張?bào)w華　王　明

(商丘醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校,商丘476100)

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糖尿病腎病患者炎癥水平、免疫功能及與腎臟病變的關(guān)系

張?bào)w華王明

(商丘醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校,商丘476100)

目的：探討糖尿病腎病(DN)患者炎癥水平、免疫功能與腎臟病變的關(guān)系。方法：將124例DN患者根據(jù)24 h尿微量白蛋白排泄率(UAER)隨機(jī)分為正常白蛋白尿(NA)組35例，微量白蛋白尿(MA)組45例和臨床白蛋白尿(CP)組44例，另選取35例健康體檢者為對(duì)照組，應(yīng)用放射免疫法測(cè)定各組C反應(yīng)蛋白(CRP)水平，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法測(cè)定各組白細(xì)胞介素(IL)-6、細(xì)胞腫瘤壞死因子(TNF)-α及體液免疫(IgG、IgA、IgM)水平，采用流式細(xì)胞儀測(cè)定機(jī)體細(xì)胞免疫反應(yīng)(CD4+Th17、Th17/Treg 、CD4+CD25+Treg)。采用全自動(dòng)化生化分析儀測(cè)定各種血清血肌酐(Scr)、半胱氨酸蛋白酶抑制物C(CYSC)及UAER。結(jié)果：NA組、MA組、CP組血清CRP、IL-6、TNF-α、Scr、CYSC、UAER水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，CP組血清CRP、IL-6、TNF-α、Scr、CYSC、UAER水平顯著高于NA組、MA組(P<0.05)。NA組、MA組、CP組血清CD4+CD25+Treg、IgG水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，而CP組血清CD4+CD25+Treg、IgG水平顯著低于NA組、MA組(P<0.05)。NA組、MA組、CP組血清IgA、IgM、Th17/Treg、CD4+Th17水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。經(jīng)Pearson單因素分析，CRP、IL-6、TNF-α與Scr、CYSC、UAER呈正相關(guān)(P<0.05)，而與Th17/Treg 、CD4+CD25+Treg、IgG水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論：DN患者存在微炎狀態(tài)及免疫功能紊亂的情況，通過控制或消除促炎因素，改善DN患者免疫功能，對(duì)延緩DN患者病情發(fā)生發(fā)展有重要的意義。

糖尿病腎??；微炎癥狀態(tài)；細(xì)胞免疫功能；體液免疫；腎臟病變

糖尿病腎病(DN)是2型糖尿病(T2DM)常見并發(fā)癥，目前普遍認(rèn)為炎癥因子與內(nèi)分泌、免疫系統(tǒng)、氧化應(yīng)激、脂肪代謝異常等因素相互作用引起的細(xì)胞結(jié)構(gòu)異常及胰島素抵抗和微血管病變有關(guān)[1，2]。機(jī)體炎癥及免疫反應(yīng)可導(dǎo)致DN發(fā)生，并在DN病情進(jìn)展及預(yù)后過程中起到重要的作用[3]。本研究將通過測(cè)定DN患者血清炎癥因子水平、細(xì)胞免疫、體液免疫及腎功能等相關(guān)指標(biāo)，探討DN患者病變發(fā)生的機(jī)制及影響因素，旨在為DN臨床防治提供指導(dǎo)。

1　資料與方法

1.1臨床資料選取商丘市第一人民醫(yī)院2014年6月至2015年6月收治的124例Ⅱ～Ⅳ期DN患者為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均符合美國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)及我國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)2009年制定的DN診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)24 h尿蛋白定量>0.3 g,且<1.0 g；(3)均簽署知情同意書；(4)所有病例均經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批。排除標(biāo)準(zhǔn)：惡性腫瘤、自身免疫系統(tǒng)性疾病、外傷性感染、心血管疾病、肝腎功能不全的患者。男性68例，女性56例，年齡35～78歲，平均年齡(42.8±3.4)歲，病程1個(gè)月～3年，平均病程(1.85±0.79)年。合并視網(wǎng)膜病變14例，合并高血壓15例，合并神經(jīng)病變2例。根據(jù)24 h尿微量白蛋白排泄率(UAER)隨機(jī)分為正常白蛋白尿(NA)組35例，微量白蛋白尿(MA)組45例和臨床白蛋白尿(CP)組44例。另選取35例健康體檢者為對(duì)照組，患者入組時(shí)均經(jīng)相關(guān)檢查排除腎臟不全者，其余排除標(biāo)準(zhǔn)與DN組相同，其中男性18例，女性17例，年齡28～78歲，平均年齡(40.8±3.2)歲，兩組患者性別、年齡無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法空腹抽取兩組患者靜脈血液3 ml，經(jīng)離心處理后留取上清液，并將上清液置于-20℃冰箱中保存待測(cè)。應(yīng)用放射免疫法測(cè)定各組CRP水平，CRP試劑盒由鄭州安賽生物科技有限公司提供；應(yīng)用酶聯(lián)免疫法測(cè)定各組IL-6、TNF-α及IgG、IgA、IgM水平，IL-6試劑盒由上海紀(jì)寧生物科研有限公司提供；TNF-α試劑盒由北京賽馳生物科技有限公司提供；IgG、IgA、IgM試劑盒由上海逸峰生物科技有限公司提供；采用流式細(xì)胞儀測(cè)定外周血CD4+Th17、Th17/Treg 、CD4+CD25+Treg比率。采用全自動(dòng)化生化分析儀測(cè)定各組血清Scr、CYSC及UAER。

2　結(jié)果

2.1各組血清炎癥因子及腎功能指標(biāo)對(duì)比NA組、MA組、CP組血清CRP、IL-6、TNF-α、Scr、CYSC、UAER水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，CP組血清CRP、IL-6、TNF-α、Scr、CYSC、UAER水平顯著高于NA組、MA組(P<0.05)，見表1。

2.2各組細(xì)胞免疫與體液免疫相關(guān)指標(biāo)對(duì)比NA組、MA組、CP組血清CD4+CD25+Treg、IgG水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，而CP組血清CD4+CD25+Treg、IgG水平顯著低于NA組、MA組(P<0.05)。NA組、MA組、CP組血清IgA、IgM、Th17/Treg、CD4+Th17水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，見表2。

2.3炎癥因子與體液免疫、細(xì)胞免疫及腎臟指標(biāo)的關(guān)系經(jīng)Pearson單因素分析，CRP、IL-6、TNF-α與Scr、CYSC、UAER呈正相關(guān)(P<0.05)，而與Th17/Treg 、CD4+CD25+Treg、IgG水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，見表3。

GroupsCasesCRP(mg/ml)IL-6(ng/ml)TNF-α(ng/ml)Scr(μmol/L)CYSC(μg/ml)UAER(mg/min)Controlgroup350.75±0.1818.25±4.024.25±0.850.98±0.220.52±0.126.22±0.58NAgroup354.58±0.221)24.69±4.851)6.85±1.231)1.85±0.241)1.28±0.291)11.25±3.481)MAgroup457.28±2.151)2)34.25±5.021)2)8.22±1.021)2)2.22±0.321)2)2.59±0.421)2)52.36±3.781)2)CPgroup4410.48±2.431)2)3)39.32±4.781)2)3)12.98±2.851)2)3)2.89±0.401)2)3)3.89±1.221)2)3)112.89±22.851)2)3)Fvalue8.2369.1217.9868.0227.6329.456Pvalue0.0000.0000.0000.0000.0000.000

Note：Compared with control group,1)P<0.05；compared with NA group，2)P<0.05；compared with MA group，3)P<0.05.

GroupsCasesCD4+Th17(%)Th17/Treg(%)CD4+CD25+Treg(%)IgG(g/L)IgA(g/L)IgM(g/L)Controlgroup3532.98±3.5818.25±4.5615.32±2.2515.20±2.851.45±0.241.42±0.35NAgroup3535.15±4.981)22.36±5.021)13.52±3.281)13.22±2.621)1.98±0.321)1.78±0.421)MAgroup4539.96±5.481)2)26.98±6.321)2)11.25±2.961)2)11.22±2.181)2)2.58±0.321)2)2.29±0.371)2)CPgroup4442.65±4.261)2)3)38.59±7.261)2)3)8.26±2.021)2)3)9.05±1.961)2)3)2.92±0.361)2)3)2.98±0.451)2)3)Fvalue8.4569.86210.4259.78510.4239.523Pvalue0.0000.0000.0000.0000.0000.000

Note：Compared with control group,1)P<0.05；compared with NA group，2)P<0.05；compared with MA group，3)P<0.05.

表3炎癥因子與體液免疫、細(xì)胞免疫及腎臟指標(biāo)的關(guān)系

Tab.3Relationship between inflammatory factor and humoral immunity,cellular immunity and kidney index

RelationshipScrCYSCUAERCD4+Th17Th17/TregCD4+CD25+TregIgGIgAIgMCRP0.3261)0.3181)0.3691)0.119-0.3421)-0.3221)-0.3451)0.1220.138IL-60.3181)0.3051)0.3521)0.114-0.3521)-0.3171)-0.3321)0.1140.118TNF-α0.3321)0.3461)0.3291)0.123-0.3361)-0.3091)-0.3271)0.1280.126

Note：1)P<0.05.

3　討論

DN的發(fā)病機(jī)制尚不明確，但近年相關(guān)研究認(rèn)為炎癥因子在DN大血管病變中起到重要的作用[4]。Kentaro等[5]認(rèn)為炎癥因子水平紊亂是血管動(dòng)脈粥樣硬化的前期，是引起血管內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷的重要誘因。高血脂、高血糖均會(huì)增加血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性，引起血管內(nèi)皮功能損傷，使得相關(guān)炎癥因子(如CRP、IL-6、TNF-α)水平紊亂，從而加劇血管內(nèi)皮功能損傷，導(dǎo)致腎小管濾過功能受損[6]。CRP是機(jī)體非特異性炎癥標(biāo)記物，可作為血管損傷程度的標(biāo)記物，其在T2MD血管病變中的作用已獲得肯定[7]。IL-6由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，它可趨化及激活中性粒細(xì)胞、噬堿性粒細(xì)胞、T細(xì)胞至炎癥反應(yīng)部位，并誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生層黏連蛋白、膠原蛋白Ⅲ、Ⅳ，從而加重血管內(nèi)皮損傷[8]。高水平TNF-α可刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞，并誘導(dǎo)趨化蛋白、黏附因子生成，增加血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性及刺激血管平滑肌細(xì)胞增生，引起血管動(dòng)脈粥樣硬化，從而導(dǎo)致血管病變[9]。本研究結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，DN患者血清炎癥因子水平顯著升高，且隨著UAER水平的升高，DN患者血清炎癥因子水平顯著升高，經(jīng)Pearson單因素分析，CRP、IL-6、TNF-α與Scr、CYSC、UAER呈正相關(guān)(P<0.05)。這表明炎癥細(xì)胞因子水平異常升高與機(jī)體腎功能損傷有密切的關(guān)系，炎癥因子表達(dá)水平升高有可能促進(jìn)DN腎功能進(jìn)行性衰竭。吳瓊皎等[10]認(rèn)為趨化因子、黏附分子、各種類型細(xì)胞因子水平升高，可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及單核細(xì)胞黏附，并會(huì)誘導(dǎo)單核細(xì)胞趨化及釋放各種細(xì)胞因子，從而加重腎臟損傷及炎癥反應(yīng)。

目前已有研究表明，DN屬于自身免疫性疾病，由自身抗體及自身免疫應(yīng)答性T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)對(duì)自身抗原發(fā)生免疫應(yīng)答引起，其發(fā)生及進(jìn)展過程屬于免疫系統(tǒng)自身調(diào)節(jié)異常的過程[11]。DN患者中CD4+T細(xì)胞分化功能性減弱導(dǎo)致T細(xì)胞免疫功能、細(xì)胞因子分泌水平異常，從而導(dǎo)致DN患者免疫功能障礙。Andy等[12]認(rèn)為自身應(yīng)答性T淋巴細(xì)胞可介導(dǎo)機(jī)體抗原免疫應(yīng)答反應(yīng)，并參與機(jī)體免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)平衡過程。糖尿病患者由于體內(nèi)自身應(yīng)答性T淋巴細(xì)胞活性下降，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞因子及其受體分泌水平異常，從而導(dǎo)致免疫功能障礙。本研究結(jié)果顯示，DN患者血清中CD4+CD25+Treg水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，而CP組血清CD4+CD25+Treg水平顯著低于NA組、MA組(P<0.05)。這提示T淋巴細(xì)胞調(diào)節(jié)失衡是引起DN發(fā)生及病情進(jìn)展的重要因素。本研究中DN患者血清IgG水平低于對(duì)照組，而IgA、IgM水平高于對(duì)照組， 經(jīng)Pearson單因素分析，CRP、IL-6、TNF-α與Th17/Treg 、CD4+CD25+Treg、IgG水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，進(jìn)一步表明機(jī)體中存在非活動(dòng)性炎癥反應(yīng)。

綜上所述，炎癥因子及機(jī)體免疫反應(yīng)與DN的發(fā)生及進(jìn)展有密切的關(guān)系，當(dāng)微炎癥發(fā)生后，DN患者腎功能衰竭也可能進(jìn)一步加重。通過控制或消除促炎因素，對(duì)改善DN患者免疫功能及延緩DN患者病情發(fā)生進(jìn)展有重要的意義。

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[收稿2015-09-25修回2015-10-10]

(編輯倪鵬)

Relationship of micro-inflammation,cellular and humoral immune function and kidney disease of patients with diabetic nephropathy

ZHANG Ti-Hua,WANG Ming.

Department of Preventive Medicine,Shangqiu Medical College,Shangqiu 476100,China

Objective:To investigate the relationship of micro-inflammation,cellular and humoral immune function and kidney disease of patients with diabetic nephropathy.Methods: 124 cases of DN were randomly divided into normal albuminuria group (NA,n=35),microalbuminuria group (MA,n=45) and clinical albuminuria groups(CP,n=44) based on 24 h urinary albumin excretion rate (UAER) and the healthy subjects were selected as the control group(n=35).The levels of C-reactive protein (CRP) were measured with radioimmunoassay,the levels of interleukin-6(IL-6),tumor necrosis factor-α(TNF-α) and humoral immunity(IgG enzyme-linked immunosorbent assay,IgA,IgM) were measured with ELISA.The levels of immune response (CD4+Th17,Th17/Treg,CD4+CD25+Treg) were measured with flow cytometry cellular.The levels of creatinine (Scr),cystatin C (CYSC) and UAER of each groups were analyzed with fully automated biochemistry.Results: The levels of CRP,IL-6,TNF-α,Scr,CYSC,UAER of NA group,MA group,CP groups were higher than control groups(P<0.05),the levels of CRP,IL-6,TNF-α,Scr,CYSC,UAER of CP groups were higher than NA,MA group (P<0.05).The levels of CD4+CD25+Treg,IgG were lower than the control group (P<0.05),while the levels of CD4+CD25+Treg,IgG of CP groups were higher than NA group,MA group (P<0.05).The levels of IgA,IgM,Th17/Treg，CD4+Th17 of NA group,MA group,CP groups were higher than control groups(P<0.05).The levels of CRP,IL-6,TNF-α were positively correlated with Scr,CYSC,UAER(P<0.05) and were negatively correlated with Th17/Treg,CD4+CD25+Treg,IgG (P<0.05).Conclusion: DN patients with micro inflammatory status and immune function disorder,through the control or elimination of pro-inflammatory factors,improve the immune function of DN patients to delay the occurrence and progress of DN patients has important significance.

Diabetes nephropathy;Micro-inflammatory state;Cellular immunity;Humoral immunity;Kidney disease

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.10.024

張?bào)w華(1971年-)，女，碩士，副教授，主要從事預(yù)防醫(yī)學(xué)教學(xué)和科研工作。

R392.6

A

1000-484X(2016)10-1524-04