許駿堯　朱　潔　程　楊　吳周燁　陳以狄　夏寶妹　吳顥昕

(南京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，南京210046)

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升陷湯治療實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力大鼠免疫機(jī)制研究①

許駿堯朱潔程楊吳周燁陳以狄夏寶妹吳顥昕

(南京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，南京210046)

目的：探討升陷湯治療實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力(EAMG)大鼠的免疫機(jī)制。方法：采用人工合成鼠源乙酰膽堿受體α亞基97-116肽段加完全弗氏佐劑免疫Lewis大鼠構(gòu)建EAMG,經(jīng)評(píng)估確定建模成功25只。將這25只大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組，陽(yáng)性藥物組(強(qiáng)的松組)，升陷湯低、中、高劑量組。觀察該方對(duì)模型大鼠臨床評(píng)分、體重、低頻重復(fù)電刺激(RNS，5 Hz)衰減率、血清中乙酰膽堿抗體(AChR Ab)含量及TGF-β、IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-17水平的影響。結(jié)果：造模后各組較佐劑對(duì)照組RNS衰減率明顯增大(P<0.01或P<0.05)，且均超過(guò)10%，體重進(jìn)行性下降，并出現(xiàn)典型肌無(wú)力樣癥狀，證明造模成功。給藥治療后，升陷湯低、中、高劑量組大鼠RNS衰減率均顯著降低(P<0.01)，體重下降均減緩，癥狀好轉(zhuǎn)。與模型對(duì)照組相比，升陷湯低、中、高劑量組血清AChR Ab含量均降低(P<0.05)，TGF-β水平均升高，IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-17水平均降低(P<0.01或P<0.05)。結(jié)論：升陷湯可使RNS衰減好轉(zhuǎn)，改善EAMG大鼠體重持續(xù)下降趨勢(shì)，并使體重增加趨勢(shì)升高，其機(jī)制可能是上調(diào)TGF-β水平，下調(diào)IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-17的水平，抑制B細(xì)胞產(chǎn)生AChR Ab，降低血清AChR Ab含量，減少對(duì)NMJ處AChR的損害，從而起到治療EAMG的作用。

升陷湯；實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力；AChR Ab；細(xì)胞因子

重癥肌無(wú)力(Myasthenia gravis,MG)是在細(xì)胞免疫依賴性補(bǔ)體參與下，由乙酰膽堿受體抗體(Acetylcholine receptor antibody,AChR Ab)介導(dǎo)而產(chǎn)生的自身免疫系統(tǒng)疾病。目前西醫(yī)主要使用膽堿酯酶抑制劑、激素、免疫抑制劑、胸腺切除術(shù)等方法進(jìn)行治療，而現(xiàn)代中醫(yī)在治療上多提倡從脾胃或者奇經(jīng)論治，治法有健脾益氣、補(bǔ)中升陽(yáng)、補(bǔ)益脾腎、疏肝通絡(luò)化瘀等多種。

升陷湯出自清代醫(yī)家張錫純的《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》，方用黃芪、知母、柴胡、升麻、桔梗，是益氣升提治法的代表方，且在國(guó)內(nèi)已有用于治療MG的報(bào)道，療效較好[1,2]。本研究旨在通過(guò)升陷湯治療實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無(wú)力(Experimental autoimmune myasthenia gravis，EAMG)大鼠的實(shí)驗(yàn)，初步揭示其治療MG的免疫學(xué)機(jī)制。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康雌性6～8周齡Lewis大鼠40只，體重130～150 g，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司[許可證號(hào)碼：SCXK(滬)2013-0016]，飼養(yǎng)于南京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)腦病實(shí)驗(yàn)室SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室。

1.1.2試劑鼠源性乙酰膽堿受體-α亞基97-116肽段序列(The rat sequence 97-116 of the AChR α subunit，Rα97-116)：DGDFAIVKFTKVLLDYTGHI，由杭州中肽生化有限公司提供。完全弗氏佐劑(Complete Freund′s adjuvant，CFA)、不完全弗氏佐劑(Incomplete Freund′s adjuvant，IFA)、磷酸緩沖液(Phosphate buffer solution，PBS)均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；H37Ra干粉購(gòu)自美國(guó)Difco Bacto公司；大鼠乙酰膽堿受體抗體(AChR-Ab)ELISA試劑盒購(gòu)自武漢伊萊瑞特生物科技有限公司；大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)、干擾素γ(IFN-γ)、白細(xì)胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-17 ELISA試劑盒均購(gòu)自南京森貝伽生物科技有限公司。

1.1.3藥物強(qiáng)的松片(規(guī)格5 mg/片，上海信誼藥廠有限公司，批號(hào)：018150306)由江蘇省無(wú)錫市中醫(yī)醫(yī)院提供；升陷湯浸膏含中藥黃芪18 g、知母9 g、柴胡4.5 g、升麻3 g、桔梗4.5 g，浸膏含生藥1.26 g/ml，由南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院制備。

1.2方法

1.2.1建立EAMG模型參照Baggi等[3]和Na等[4]的方法構(gòu)建EAMG大鼠模型。具體方法：實(shí)驗(yàn)第1天于造模組大鼠肩背部與尾基部多點(diǎn)注射與CFA充分混勻的乳劑200 μl(含Rα97-116 50 μg、H37Ra干粉1 mg)；佐劑對(duì)照組注射等量PBS與CFA混合乳劑，并在第30天和第45天于同部位多點(diǎn)注射與IFA充分混勻的乳劑200 μl(含Rα97-116 50 μg)以強(qiáng)化免疫，佐劑對(duì)照組注射等量PBS與IFA混勻的乳劑。

1.2.2模型評(píng)估采用體重和Lennon分級(jí)法對(duì)模型進(jìn)行評(píng)估。①體重：實(shí)驗(yàn)期間每周2次稱重。②按 Lennon等[5]的分級(jí)法將癥狀嚴(yán)重程度分為 4 級(jí)。0級(jí)： 沒有肯定的無(wú)力表現(xiàn)；1級(jí)：撕咬無(wú)力，四肢力量較差，在光滑地面上前肢打滑，活動(dòng)減少且易疲勞；2級(jí)：明顯無(wú)力，休息時(shí)身體呈隆起姿勢(shì)，頭尾下垂，大腿外展，前肢趾彎曲，動(dòng)作笨拙，行走不穩(wěn)；3級(jí)：嚴(yán)重?zé)o力表現(xiàn)，無(wú)撕咬動(dòng)作，肌肉震顫，呼吸困難，瀕死或死亡。癥狀在4級(jí)之間者,分別打0.5、1.5、2.5分。

1.2.3分組及給藥將經(jīng)模型評(píng)估成功的EAMG大鼠共25只隨機(jī)分為模型對(duì)照組，陽(yáng)性藥物組(強(qiáng)的松組)，升陷湯低、中、高劑量組，每組5只。給藥劑量根據(jù)人體體表面積計(jì)算給藥劑量，相當(dāng)于成人等效劑量的8倍，其等效劑量為中劑量，中劑量的1/2為低劑量，中劑量的2倍為高劑量。灌胃給藥體積為1 ml/100 g。模型對(duì)照組給予生理鹽水灌胃；陽(yáng)性藥物組給予強(qiáng)的松5.4 mg/(kg·d)(純水溶解)灌胃；升陷湯低劑量組給予浸膏2.6 g/(kg·d)，中劑量組給予5.2 g/(kg·d)，高劑量組給予10.4 g/(kg·d)灌胃。

1.2.4低頻重復(fù)神經(jīng)電刺激(Repetitive nerve stimulation,RNS)檢測(cè)用1%戊巴比妥鈉按40 mg/kg腹腔注射，將大鼠麻醉后固定于解剖板上，將刺激電極以2～3 mm 距離插至坐骨切跡附近肌肉內(nèi)，參考電極插入腹部皮下，一根記錄電極置于同側(cè)腓腸肌內(nèi)側(cè)頭，另一根記錄電極置于跟腱附著處,分別給以5 Hz連續(xù)10次的低頻電刺激，移動(dòng)電極，重復(fù)操作3次[6]。計(jì)算第1個(gè)與第5個(gè)動(dòng)作電位的衰減率D，衰減率D=(第1個(gè)動(dòng)作電位-第5個(gè)動(dòng)作電位)/第5個(gè)動(dòng)作電位，大于10%者為陽(yáng)性。

1.2.5血清AChR Ab及細(xì)胞因子的ELISA檢測(cè)造模結(jié)束后采用尾靜脈取血，取血后靜置30 min，3 000 r/min，4℃離心15 min，取上層血清，放置-20℃冷凍保存。給藥結(jié)束后采用頸動(dòng)脈取血，取血清-20℃冷凍保存。采用AChR Ab、TGF-β、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-17 ELISA試劑盒檢測(cè)各個(gè)指標(biāo)，具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。其中AChR Ab檢測(cè)以P/N為評(píng)價(jià)指標(biāo)，P/N=(待測(cè)樣品OD值-空白孔OD值)/(陰性對(duì)照品OD值-空白孔OD值)。其值大于2.1為陽(yáng)性，小于1.4為陰性，介于兩者之間為假陽(yáng)性。

2　結(jié)果

2.1造模后大鼠的一般狀況與評(píng)估第1次免疫后1個(gè)月左右，造模組大鼠體重增長(zhǎng)逐漸減緩，并出現(xiàn)活動(dòng)減少，毛發(fā)變暗等癥狀。第2次免疫后大部分造模組大鼠出現(xiàn)了體重增長(zhǎng)停滯或下降，毛發(fā)枯燥，動(dòng)作減緩，叫聲低弱。第3次免疫后造模組體重已顯著低于佐劑對(duì)照組，并伴有以上癥狀不同程度加重。3次免疫后兩周，采用Lennon評(píng)分、ELISA檢測(cè)血清AChR-Ab含量和檢測(cè)肌電圖的方法對(duì)造模組大鼠進(jìn)行模型評(píng)估。取Lennon評(píng)分大于1分，血清AChR Ab檢測(cè)為陽(yáng)性，低頻重復(fù)電刺激衰減率大于10%的25只為造模成功大鼠，成模率71.4%。

2.2RNS衰減率由表1可見，造模后除佐劑對(duì)照組外，各組衰減率均明顯增大(P<0.01或P<0.05)，且均大于10%為陽(yáng)性，說(shuō)明造模后大鼠出現(xiàn)了肌電衰減，符合EAMG造模標(biāo)準(zhǔn)。給藥治療后各治療組大鼠RNS衰減率均顯著減小(P<0.01)，低于10%，升陷湯低、中、高劑量組與強(qiáng)的松組比較衰減率略低，無(wú)顯著差異性(P>0.05)。說(shuō)明升陷湯和強(qiáng)的松均能明顯改善EAMG大鼠肌電衰減，使其轉(zhuǎn)為陰性。

GroupsnThedecrementpercentageofRNSbeforetreatmentThedecrementpercentageofRNSaftertreatmentCFA58.27±1.427.99±1.71EAMGmodel514.23±2.352)12.96±1.13Positivecontrol511.98±1.041)8.59±1.193)Lowdosegroup513.64±1.542)6.81±1.223)4)Mediumdosegroup515.54±2.712)8.14±1.553)4)Highdosegroup513.35±3.062)5.81±2.663)4)

Note：Compared with CFA，1)P<0.05,2)P<0.01；compared with EAMG model，3)P<0.01；compared with positive control，4)P>0.05.

2.3ELISA檢測(cè)大鼠血清AChR Ab水平由圖1可見，治療前，各組與佐劑對(duì)照組比較，AChR Ab含量均顯著升高(P<0.01或P<0.05)；治療后，與模型對(duì)照組相比，強(qiáng)的松組和升陷湯三個(gè)劑量組均降低(P<0.05)。與治療前相比，強(qiáng)的松組和升陷湯高劑量組AChR Ab含量顯著降低(P<0.01)，而低、中劑量組亦降低(P<0.05)。

2.4治療后ELISA檢測(cè)大鼠血清TGF-β、IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-17的水平由表2可見模型組與佐劑對(duì)照組比較，IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-17水平顯著升高(P<0.01)，而TGF-β水平則降低(P<0.05)。升陷湯三個(gè)劑量組與模型對(duì)照組相比IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-17水平均顯著降低(P<0.01或P<0.05)；升陷湯三個(gè)劑量組與模型對(duì)照組比較TGF-β水平均升高(P<0.05)。升陷湯三個(gè)劑量組IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-17水平低于強(qiáng)的松組(P<0.05或P<0.01或P>0.05)；升陷湯中劑量組TGF-β水平高于強(qiáng)的松組(P<0.05)，而低、中劑量組略高于強(qiáng)的松組，無(wú)顯著差異性(P>0.05)。

圖1　各組大鼠血清AChR Ab含量檢測(cè)(pmol/L)Fig.1　Titer of AChR Ab in serum of each group rats(pmol/L)Note: Compared with CFA，*.P<0.05，**.P<0.01；compared with EAMG model，#.P<0.05，##.P<001；after treatment compared with before treatment，△.P<0.05，△△.P<0.01.

GroupsnIFN-γIL-2IL-4IL-17TGF-βCFA5643.5±25.12)516.1±75.22)33.7±1.52)38.1±1.92)100.9±4.51)EAMGmodel5778.6±7.4686.5±31.1141.5±3.250.8±1.983.1±3.5Positivecontrol5728.4±20.91)540.3±35.81)39.6±2.71)45.7±2.81)98.6±9.61)Lowdosegroup5667.9±26.132)5)469.9±38.92)3)35.2±2.42)4)42.9±1.52)3)98.7±3.91)3)Mediumdosegroup5657.8±26.22)5)481.2±52.22)5)34.6±2.12)5)42.2±2.52)4)99.3±12.61)4)Highdosegroup5639.±21.72)5)485.1±57.52)5)34.9±2.12)4)43.8±1.71)3)98.3±3.91)3)

Note：Compared with EAMG model，1)P<0.05,2)P<0.01；compared with positive control，3)P>0.05,4)P<0.05,5)P<0.01.

圖2　治療后各組大鼠體重(g)Fig.2　Weight of each group rats with medication(g)

2.5治療后各組大鼠體重變化由圖2可見，給藥后(第9周)，升陷湯三個(gè)劑量組和強(qiáng)的松組大鼠體重下降均減緩,而模型對(duì)照組體重持續(xù)下降，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束體重明顯低于各給藥組(P<0.01)。說(shuō)明升陷湯和強(qiáng)的松均可改善EAMG大鼠體重持續(xù)下降趨勢(shì)，而使體重增加趨勢(shì)升高。

3　討論

MG作為一種自身免疫性疾病其發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，目前認(rèn)為，體液及細(xì)胞免疫、多種抗體、補(bǔ)體及細(xì)胞因子等均參與了MG的發(fā)病過(guò)程。其發(fā)病的關(guān)鍵是機(jī)體產(chǎn)生了針對(duì)位于神經(jīng)肌肉接頭(Neuromuscular junction,NMJ)處AChR的異常免疫應(yīng)答，受誘導(dǎo)活化的B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞并分泌AChR Ab,后者可通過(guò)：①阻斷ACh與AChR結(jié)合或使離子通道關(guān)閉；②結(jié)合AChRs致使其內(nèi)吞、降解或退化；③激活補(bǔ)體，形成膜攻擊復(fù)合物，破壞NMJ處突觸后膜等途徑影響神經(jīng)與肌肉功能[7]。本實(shí)驗(yàn)中，與佐劑對(duì)照組相比造模后各組大鼠血清AChR Ab含量均顯著增高(P<0.01或P<0.05)，且出現(xiàn)體重進(jìn)行性下降，肌無(wú)力樣表現(xiàn)等伴隨癥狀，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)所采用的Rα97-116雖僅為AChR的一小部分但其含有能引起MG的抗原決定簇，具備高度的免疫原性，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，成功構(gòu)建EAMG模型，成模率71.4%，與國(guó)內(nèi)外同類研究報(bào)道相一致。給藥治療后，各組大鼠血清AChR Ab含量均降低(P<0.05)，其中升陷湯三個(gè)劑量組略低于強(qiáng)的松組，無(wú)顯著差異性(P>0.05)。而與治療前相比，強(qiáng)的松組和升陷湯高劑量組降低更為顯著(P<0.01)。提示升陷湯和強(qiáng)的松均可降低AChR Ab含量，從而起到治療MG的作用，并且高劑量的升陷湯比低、中劑量降低更為顯著。

由Th1細(xì)胞分泌的IFN-γ、IL-2與促炎反應(yīng)和細(xì)胞毒反應(yīng)密切相關(guān)[8]。IFN-γ可促進(jìn)T、B細(xì)胞的增殖和活化，分泌自身抗體，放大免疫應(yīng)答[9]。而在MG患者和動(dòng)物模型中，IFN-γ均顯著升高，對(duì)促進(jìn)MG起重要作用。研究表明給予EAMG大鼠IFN-γ(rrIFN-γ)皮下注射后MG癥狀加重[10]，而IFN-γ或IFN-γ受體基因敲除的EAMG小鼠癥狀較輕[11]。此外Tuzun等[12]還證實(shí)IFN-γ可誘導(dǎo)特異性B細(xì)胞成熟并分泌AChR Ab，且兩者表達(dá)水平呈正相關(guān)。類似的，IL-2可促進(jìn)IFN-γ的產(chǎn)生，其在MG患者中呈現(xiàn)高表達(dá)，而降低血清中IL-2的水平可使AChR Ab降低[13]。本實(shí)驗(yàn)中，模型對(duì)照組相比佐劑對(duì)照組血清IFN-γ與IL-2水平顯著升高(P<0.01)，說(shuō)明EAMG大鼠體內(nèi)出現(xiàn)了免疫失衡，兩者可能均起到了促進(jìn)MG發(fā)病的作用。給藥治療后，各組大鼠血清IFN-γ與IL-2水平均降低(P<0.01或P<0.05)，說(shuō)明升陷湯和強(qiáng)的松均可使IFN-γ與IL-2水平降低，從而降低AChR Ab水平，這可能是升陷湯治療EAMG的主要機(jī)理之一。相比強(qiáng)的松組，升陷湯三個(gè)劑量組尤其中、高劑量組降低更為顯著(P<0.01)，說(shuō)明升陷湯的免疫干預(yù)作用明顯強(qiáng)于強(qiáng)的松。

由Th2細(xì)胞分泌的IL-4可刺激B細(xì)胞活化增殖，并在抗體分泌及其類型轉(zhuǎn)換中起到關(guān)鍵作用，但其在MG發(fā)病過(guò)程中的作用目前仍存在爭(zhēng)議。Ostlie等[14]發(fā)現(xiàn)IL-4基因敲除小鼠相比對(duì)照組血清AChR Ab出現(xiàn)更早而持久，肌無(wú)力癥狀也更重。另有在MG患者中存在IL-4下降的報(bào)道[15]。而相反的，有研究認(rèn)為AChR Ab的產(chǎn)生主要受IL-4調(diào)控，IFN-γ作為協(xié)同因子可增強(qiáng)其作用[16]。Shandley等[17]也證實(shí)IL-4可通過(guò)促使生成IL-15刺激Th1細(xì)胞及B細(xì)胞活化，從而促進(jìn)MG的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)中，升陷湯三個(gè)劑量組血清IL-4水平顯著低于模型對(duì)照組(P<0.01)，提示降低IL-4水平可能是升陷湯參與免疫調(diào)節(jié)，治療MG的一種方式，而其具體作用機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

IL-17由一種新發(fā)現(xiàn)的參與免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)的Th細(xì)胞——Th17細(xì)胞分泌。有研究表明MG血清AChR Ab水平與IL-17呈正相關(guān)，對(duì)MG發(fā)病起促進(jìn)作用[18]。而Bai等[19]證實(shí)在此過(guò)程中IL-17的作用甚至強(qiáng)于IFN-γ。本實(shí)驗(yàn)中，造模后血清IL-17水平顯著升高(P<0.01)，而治療后各組均降低(P<0.01或P<0.05)，說(shuō)明升陷湯和強(qiáng)的松亦可通過(guò)降低血清IL-17下調(diào)AChR Ab水平，起到調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，治療MG的作用。另外值得注意的是，在升陷湯三個(gè)劑量組中，中劑量組而非高劑量組IL-17水平最低，且顯著低于強(qiáng)的松組(P<0.01)，提示升陷湯作用的機(jī)理可能并非是單純的免疫抑制，而是調(diào)節(jié)免疫平衡，與原方等效劑量的升陷湯中劑量組能使血清IL-17水平恢復(fù)至最接近正常水平，效果優(yōu)于低、高劑量組和強(qiáng)的松組。

Th3細(xì)胞分泌的TGF-β是體內(nèi)主要的內(nèi)源性免疫抑制性細(xì)胞因子。它被證實(shí)可通過(guò)抑制Th1、Th2細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-γ、IL-4等，抑制AChR Ab的合成，具有預(yù)防EAMG發(fā)病的作用[20]，且有研究發(fā)現(xiàn)EAMG鼠癥狀的好轉(zhuǎn)往往伴隨著TGF-β水平的升高[21]。本實(shí)驗(yàn)中，模型對(duì)照組血清TGF-β水平降低(P<0.05)，給藥治療后，各組大鼠血清TGF-β水平均升高(P<0.05)，說(shuō)明EAMG發(fā)病后機(jī)體處于免疫亢進(jìn)狀態(tài)，缺乏免疫抑制，而升陷湯和強(qiáng)的松均可升高TGF-β水平，發(fā)揮免疫抑制作用，從而起到治療MG的效果。與IL-17的實(shí)驗(yàn)結(jié)果類似，升陷湯中劑量組血清TGF-β含量高于其他治療組且最接近正常水平，與強(qiáng)的松組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

綜上所述，本研究提示升陷湯治療EAMG的機(jī)制可能是調(diào)節(jié)各細(xì)胞因子：升高TGF-β，下調(diào)IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-17，恢復(fù)Th細(xì)胞之間的免疫穩(wěn)態(tài)，從而抑制B細(xì)胞分化、增殖、合成分泌AChR Ab，減少對(duì)NMJ處AChR的損害，發(fā)揮治療MG作用，且在一定劑量范圍內(nèi)，升陷湯免疫調(diào)節(jié)的功能更好。本研究為進(jìn)一步探究升陷湯治療MG提供了免疫學(xué)依據(jù)。

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[收稿2015-12-09]

(編輯倪鵬)

Research on immune mechanism of Shengxian decoction in experimental autoimmune myasthenia gravis rats

XU Jun-Yao,ZHU Jie,CHENG Yang,WU Zhou-Ye,CHEN Yi-Di,XIA Bao-Mei，WU Hao-Xin.

Nanjing University of TCM,Nanjing 210046，China

Objective:To investigate the immune mechanism of Shengxian decoction in experimental autoimmune myasthenia gravis(EAMG) rats.Methods: Lewis rats were immunized with the rat sequence 97-116 of the AChR α subunit(Rα97-116) in CFA,25 of which were successful.They were randomly divided into 5 groups:EAMG model group,prednisone group(5.4 mg/kg),Shengxian decoction low,medium,high dose groups(dosage 2.6 g/kg,5.2 g/kg,10.4 g/kg).Clinical symptoms,weight,and the decrement percentage of RNS(5 Hz) were evaluated,and ELISA were adopted to determine the titers of AChR Ab,TGF-β,IFN-γ,IL-2,IL-4 and IL-17 in serum.Results: After molding,the percentage of decrement of RNS in each group noticeably increased by more than 10% in comparison with that in the CFA control group(P<0.01 orP<0.05).At the same time,they were also subjected to progressive decreasing weight and typical myasthenia symptoms,showing the successful molding.With medication,the decrement percentage of RNS of rats in the groups with low,medium and high dose of Shengxian decoction were all on obvious decline with alleviated weight decrease(P<0.01),testifying to the symptom improvement.Compared with the CFA control group,the groups with low,medium and high dose of Shengxian decoction were coupled with decreasing AChR Ab content(P<0.05),rising TGF-β level and reducing IFN-γ,IL-2,IL-4 and IL-17 level(P<0.01 orP<0.05).Conclusion: Shengxian decoction can turn the decrement percentage of RNS around,improve the progressive weight decrease in EAMG rats and increase the weight gains. By up-regulating the TGF-β level,lowering IFN-γ,IL-2,IL-4 and IL-17 level,preventing B cells from producing AChR Ab and reducing the content of AChR Ab in serum,it will soothe the damage of NMJ to AChR and cure EAMG.

Shengxian decoction;Experimental autoimmune myasthenia gravis;AChR Ab;Cytokines

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.10.012

許駿堯(1993年-)，男，主要從事自身免疫系統(tǒng)疾病方面的研究，E-mail：296428835@qq.com。

及指導(dǎo)教師：吳顥昕(1965年-)，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事心腦血管病及自身免疫系統(tǒng)疾病基礎(chǔ)與臨床研究，E-mail：wuhaoxin@sohu.com。

R285.5R392.11

A

1000-484X(2016)10-1462-05

①本文為2014年江蘇省大學(xué)生科技創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃省級(jí)重點(diǎn)項(xiàng)目(201410315003Z)。