馬一平　李誠讓　吳建兵　崔盤根　林　麟

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·論著·

慢性自發(fā)性蕁麻疹血小板參數(shù)及P選擇素的檢測

馬一平李誠讓吳建兵崔盤根林麟

目的：檢測慢性自發(fā)性蕁麻疹(CSU)患者血小板參數(shù)及P選擇素的表達水平,并分析與疾病嚴重程度的相關(guān)性。方法：對120例CSU患者和40名健康對照者進行血小板相關(guān)參數(shù)和可溶性P選擇素檢測，并分析與自身免疫血清實驗(ASST)結(jié)果、CSU疾病嚴重度評分(USS)的相關(guān)性。結(jié)果：CSU組平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)和可溶性P選擇素水平分別為(11.23±1.36)fL、(13.41±2.26)fL和(74.16±20.32)ng/mL，明顯高于正常對照組的(9.38±1.24)fL，(11.17±2.51)fL和(32.14±8.37)ng/mL。CSU組血小板計數(shù)為(176.16±41.05)×109/L，明顯低于健康對照組的(227.35±42.33)×109/L。所有患者中USS評分與P選擇素呈正相關(guān)，ASST陽性患者中USS與MPV呈正相關(guān)。結(jié)論：CSU組MPV、PDW和可溶性P選擇素值升高，且與疾病嚴重程度相關(guān)，提示CSU患者中存在血小板活化。

蕁麻疹；平均血小板體積；P選擇素

慢性自發(fā)性蕁麻疹(chronic spontaneous urticaria，CSU)的發(fā)病機制尚不明確。近來有研究顯示血小板及其活化產(chǎn)物，除了在血栓形成與止血中具有重要作用外，在一些炎癥性疾病的免疫和炎癥反應中也發(fā)揮重要作用，如哮喘、關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸道疾病及濕疹、特應性皮炎和蕁麻疹等炎癥性皮膚病[1,2]。

血小板活化后釋放活性氧，已有研究證實血小板氧化應激參與CSU的發(fā)病[3]。另血小板通過釋放多種炎癥介質(zhì)，參與CSU發(fā)病的免疫炎癥過程[4]。同時CSU常伴隨凝血級聯(lián)反應的激活和纖維蛋白溶解。凝血途徑的激活導致凝血酶的生成，是CSU加重的重要因素。凝血酶是一種絲氨酸蛋白酶，其在凝血級聯(lián)反應中誘導血小板活化，從而在CSU發(fā)病中發(fā)揮重要作用[5]。

既往研究多認為，平均血小板體積(mean platelet volume，MPV)和血小板分布寬度(platelet distribution width，PDW)可作為血小板活化檢測指標[6]。但其在CSU的研究中，結(jié)果不盡相同。大多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)CSU患者MPV、PDW值高于健康對照組[7,8]，但亦有部分研究認為兩者之間無明顯差異[4]，甚至有研究發(fā)現(xiàn)CSU患者MPV值明顯低于健康對照組[9]。因此有學者認為，MPV和PDW不足以單獨作為評估血小板活化和功能的指標[10]?？扇苄訮選擇素合成并儲存于內(nèi)皮細胞的Weibel-palad小體和血小板α顆粒內(nèi)，是反映血小板活化程度的特異標志[7]。為此,檢測了MPV等血小板參數(shù)和可溶性P選擇素水平，探討血小板活化在CSU發(fā)病中的作用，并分析與自身免疫血清實驗(autologous serum skin test，ASST)結(jié)果、CSU嚴重度等臨床指標的相關(guān)性。

1　資料與方法

120例CSU患者和40名健康對照者均于2014年1月至2015年7月就診于我院。記錄患者的基本信息、臨床和實驗室相關(guān)指標數(shù)據(jù)。健康對照組亦記錄相關(guān)實驗室數(shù)據(jù)。患者均行抗核抗體及甲狀腺相關(guān)抗體測定，入組結(jié)果陰性者。將CSU患者根據(jù)ASST實驗結(jié)果分為ASST陽性組(52例)和ASST陰性組(68例)，比較兩組之間各參數(shù)之間的差異性。疾病嚴重度評估采用EAACI/GA2LEN/EDF指南推薦的蕁麻疹嚴重度積分(urticaria severity score，USS)，將CSU患者分為輕型(n=77)、中重度(n=43)。

1.1病例選擇入組患者年齡18～45歲，連續(xù)性或反復紅斑、風團發(fā)作6周以上。年齡、性別相匹配的健康人群40名作為對照。排除標準：排除急性蕁麻疹、物理性蕁麻疹、蕁麻疹性血管炎，合并有諸如類風濕性關(guān)節(jié)炎和炎癥性腸病等其他慢性炎癥性疾病、高血壓病、糖尿病、心血管疾病、癌癥、血液系統(tǒng)疾病、慢性肝臟或腎臟疾病、自身免疫性疾病等。

1.2實驗方法

1.2.1血常規(guī)的檢測，應用美國貝克曼LH750血細胞分析儀進行檢測，主要包括血紅蛋白、白細胞、MPV、PLT、PDW、PCT等指標。

1.2.2C反應蛋白(CRP)非抗凝血2 mL，使用QUICKREAD分析儀，用免疫比濁法測定，試劑 “QuickRead CRP”由芬蘭ORION診斷公司提供。

1.2.3可溶性P選擇素采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附測定(美國RD公司)，嚴格按照實驗說明書操作。

2　結(jié)果

2.1CSU患者和健康對照組之間血小板參數(shù)、CRP、P選擇素之間的比較CSU組與健康對照組相比，CSU組MPV值、PDW值、CRP、可溶性P選擇素值明顯高于健康對照組。CSU組血小板計數(shù)明顯低于健康對照組(表1)。

2.2ASST陽性組與ASST陰性組兩組之間比較見表2。ASST陽性組具有更高的MPV值(P=0.037)、CRP(P=0.021)、可溶性P選擇素值(0.006)。

表1　CSU患者和健康對照組血小板參數(shù)、CRP、P選擇素間的比較

注：MPV：平均血小板體積； PDW：血小板分布寬度； PLT：血小板計數(shù)； PCT：血小板壓積； CRP：C反應蛋白

表2　ASST陽性組與ASST陰性組血小板參數(shù)、CRP、P選擇素間的比較

注：MPV：平均血小板體積； PDW：血小板分布寬度； PLT：血小板計數(shù)； PCT：血小板壓積； CRP：超敏C反應蛋白

2.3蕁麻疹嚴重度評分(USS)與血小板參數(shù)、CRP、P選擇素間的相關(guān)性見表3。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CSU患者USS與MPV正相關(guān)，與其他血小板參數(shù)之間未見明顯相關(guān)性。進一步分析發(fā)現(xiàn)，此種相關(guān)性只見于ASST陽性組。另CSU患者USS與CRP、P選擇素之間亦存在正相關(guān)，且ASST陽性組、ASST陰性組均見類似相關(guān)性。

表3　蕁麻疹嚴重度評分(USS)與CSU患者血小板參數(shù)、CRP、P選擇素間的相關(guān)性

注：R1：總CSU組Spearman相關(guān)系數(shù)r值；R2：ASST陽性組相關(guān)系數(shù)r值；R3:ASST陰性組相關(guān)系數(shù)r值； P1：總CSU組P值； P2：ASST陽性組P值； P3：ASST陰性組P值

3　討論

血小板活化包括血小板形狀的改變、血小板聚集和血小板成分的釋放，而實際中可以量化檢測血小板形狀的改變及聚集趨勢的變化；另可以通過檢測血和尿中相關(guān)血小板代謝產(chǎn)物的水平而判斷血小板活化程度。血小板形態(tài)學的改變可以通過自動全血細胞分析儀，檢測各種血小板參數(shù)而輕松獲得。其中MPV和PDW是研究最為廣泛的血小板活化指標[6]。P選擇素是反映血小板活化程度的特異標志，對判斷血栓前狀態(tài)，體內(nèi)凝血傾向具有重要意義。當血小板活化時，P選擇素迅速從血小板的α顆粒膜內(nèi)移動到膜表面，從而啟動血小板與白細胞的黏附。在血流中，白細胞成鏈索狀在活化的血小板上滾動并黏附。研究表明，P選擇素不僅對血小板的黏附起作用，而且對血小板的聚集也具有重要意義[7]。

本研究發(fā)現(xiàn)，CSU組與健康對照組相比，ASST陽性組與ASST陰性組間比較，ASST陽性組具有更高的MPV、CRP和可溶性P選擇素值。提示CSU患者存在血小板活化，尤以ASST陽性者表現(xiàn)明顯。該結(jié)果與國外部分研究相符。Chandrashekar等[7]研究發(fā)現(xiàn)，慢性蕁麻疹(CU)患者MPV和PDW值明顯高于健康對照組。CU患者血小板聚集和可溶性P選擇素水平明顯高于對照組。自體血漿皮膚實驗(autologous plasma skin test，APST)陽性患者與APST陰性患者相比，前者具有更高的血小板聚集和可溶性P選擇素，提示自身免疫相關(guān)患者組血小板活化程度更高。研究者認為CU患者存在明顯的血小板活化，尤其是自身免疫相關(guān)的CU患者。Magen等[8]研究發(fā)現(xiàn)ASST陽性CU患者，與ASST陰性CU患者和健康對照組相比，MPV和CRP濃度明顯升高。

但亦有與我們研究不符的報道，Kasperska-Zaj?c等[4]研究發(fā)現(xiàn)，CSU患者和健康對照組相比，MPV和PDW值未見明顯差異。Akelma等[9]研究發(fā)現(xiàn)，兒童CSU患者MPV值明顯低于健康對照組。我們分析結(jié)論不同的原因可能在于：(1)所選病例年齡、病程等不同；(2)MPV值受多種因素影響，例如保存時間、抗凝劑的選擇、血細胞分析儀型號的不同、藥物、炎癥、冠狀動脈疾病、血小板計數(shù)、血小板大小、糖尿病等，臨床研究中很難完全避免這些混雜因素；(3)上述結(jié)論不符的研究中，未檢測可溶性P選擇素水平。

本研究中發(fā)現(xiàn)，CSU組血小板計數(shù)明顯低于健康對照組，與Chandrashekar等[7]研究結(jié)果一致。但Magen等[8]研究發(fā)現(xiàn)，CU患者和健康對照組相比，血小板計數(shù)值無明顯差別。Kasperska-Zaj?c等[4]研究發(fā)現(xiàn)，中重度CSU患者血小板計數(shù)，明顯高于輕度CSU患者和健康對照組。另外既往研究顯示[7]，MPV值與血小板計數(shù)值之間存在負相關(guān)，故而支持我們研究中CSU組PLT明顯低于健康對照組的結(jié)果。

本研究相關(guān)性分析中發(fā)現(xiàn)，CSU患者USS與CRP、P選擇素之間呈正相關(guān)。ASST陽性CSU患者，USS與MPV呈正相關(guān)。提示CRP、P選擇素和MPV，可作為CSU患者疾病嚴重度評估的可能監(jiān)測指標。Magen等[8]研究發(fā)現(xiàn)，ASST陽性CU患者USS與MPV值呈明顯正相關(guān)，與我們研究結(jié)果相符。

本研究證實了CSU存在血小板活化，尤其是ASST陽性患者，該結(jié)果進一步解釋了臨床中單純抗組胺藥物療效不佳的原因。我們認為聯(lián)合雙嘧達莫、盧帕他定等抗血小板藥物，可能對于部分CSU具有更好療效。另CRP、P選擇素和MPV可作為CSU患者疾病嚴重度評估的可能監(jiān)測指標。但鑒于本研究病例數(shù)少，上述結(jié)果仍需更大樣本量、設計完善的臨床研究予以佐證。

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(收稿：2016-01-29修回：2016-03-17)

Detection of the levels of platelet parameters and soluble P-selectin in the patients with chronic spontaneous urticaria

MAYiping,LIChengrang,WUJianbing,CUIPangen,LINLin.

InstituteofDermatology,ChineseAcademyofMedicalSciences,Nanjing210042,China

Correspondingauthor:MAYiping,E-mail:mayipingg@sohu.com

Objective: To detect the levels of platelet parameters and soluble P-selectin in the patients with chronic spontaneous urticaria (CSU). Methods: The levels of platelet parameters, and soluble P-selectin in 120 patients and 40 healthy controls were detected and the relationship between these parameters and autoimmune serum test (ASST) and urticaria severity score (USS) was analyzed. Results: The levels of mean platelet volume (MPV), platelet distribution width (PDW) and soluble P-selectin were (11.23±1.36)fL, (13.41±2.26)fL and (74.16±20.32)ng/mL in the patients, which were significantly higher than those in controls group (9.38±1.24 fL, 11.17±2.51 fL and 32.14±8.37 ng/mL, respectively). The level of platelet count in CSU group was (176.16±41.05)×109/L, which was significantly lower than that in controls (227.35±42.33)×109/L. There was a significant positive correlation between USS and P-selectin levels in the patients and the correlation between USS and MPV in the patients with positive ASST was also significantly positive. Conclusion: The levels of MPV, PDW and soluble P-selectin were increased in the patients with CSU and were correlated to the disease severity. The platelets are activated in the patients with CSU.

urticaria; mean platelet volume; P-selectin

中國醫(yī)學科學院皮膚病研究所，南京，210042

馬一平，E-mail: mayipingg@sohu.com