李彥霞

泰山醫(yī)學院附屬聊城市第二人民醫(yī)院婦科，山東聊城252601

p16和Ki-67蛋白，TLR3在宮頸病變分流診斷中的應(yīng)用

李彥霞

泰山醫(yī)學院附屬聊城市第二人民醫(yī)院婦科，山東聊城252601

目的評估p16和Ki-67蛋白，TLR3檢查在宮頸病變分流診斷中的臨床價值。方法整群選取該院2014年10月一2016年8月婦產(chǎn)科門診陰道鏡下活檢病理診斷各類宮頸病變153例分別進行p16和Ki-67，TLR3檢測。采用免疫組化技術(shù)（S-P法）檢測p16及Ki-67，TLR3的表達。結(jié)果在慢性宮頸炎、CINI級、CINⅡ級、CINⅢ級中，p16陽性率為13.21%、58.24%，96.25%、97.51%，Ki-67陽性率為10.05%、61.22%、94.12%、96.05%，TLR3陽性率為11.04%、62.32%、95.02%、97.05%，p16與Ki67，TLR3陽性率呈遞增趨勢，差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)論P16和Ki-67，TLR3對宮頸病變分流診斷有重要輔助診斷價值，精確指導(dǎo)宮頸病變的診斷與治療，預(yù)防宮頸癌的發(fā)生。

P16；Ki-67；TRL3；宮頸病變；篩查

宮頸癌是婦科腫瘤中僅次于乳腺癌的第二大惡性腫瘤［1］。目前，中國常用TCT結(jié)合HPV病毒檢測-陰道鏡檢查-宮頸組織病理活檢，對宮頸癌前病變有效地進行宮頸LEEP刀手術(shù)，宮頸錐形切除術(shù)，仍存在過度治療問題［2］。隨著生物標志物的日趨被關(guān)注，細胞周期抑制因子p16蛋白，核增殖抗原Ki-67，Toll樣受體3（TLR3）對宮頸高低級別病變鑒別有一定的指導(dǎo)意義。該文分析研究2014年10月—2016年8月該院收治的153例子宮頸炎、宮頸癌前病變中p16蛋白，Ki-67及 TLR3的表達及其相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

整群收集該院婦產(chǎn)科門診就診宮頸活檢診斷為慢性宮頸炎、宮頸上皮內(nèi)瘤變I-III級標本共153例。由病理科醫(yī)師閱片。

1.2主要試劑及儀器

宮頸活檢組織均經(jīng)10%甲醛固定、24 h后石蠟包埋，連續(xù)切片，制成4 μm厚的切片。待免疫組化保存。應(yīng)用PV6000試劑盒免疫組化染色。

1.3評判標準

p16，Ki-67，TLR3陽性表達為細胞核和胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒。Ki-67著色細胞所占百分比≤5%者為（-），6%～25%為（+）、26%～50%為（++）、＞50%為（+++）。TLR3評分依據(jù)為著色度及陽性比：0分無著色，1分淡黃色，2分棕黃色，3分棕褐色；1分陽性細胞＜5%，2分5%～25%，3分26%～50%，4分≥50%。兩者相加：1分陰性（-），2分弱陽性（+），3分中等陽性（++），4分以上強陽性（+++）。

1.4統(tǒng)計方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件對所有數(shù)據(jù)進行分析，采用秩和檢驗，Spearman相關(guān)性分析等統(tǒng)計學方法，檢驗水準為0.05。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1p16在宮頸炎及宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達與分布

p16蛋白CIN中主要定位于細胞核和細胞質(zhì)表達。p16在慢性宮頸炎對照組中幾乎不表達，CINⅠ組，CINⅡ組，CINⅢ組中陽性率58.24%，96.25%，97.51%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），見表1。

表1　p16在宮頸各類型病變中表達

2.2Ki-67在宮頸炎及宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達與分布

Ki-67蛋白在CIN中主要定位于細胞核和細胞質(zhì)表達。Ki-67在慢性宮頸炎對照組中幾乎不表達，CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ組中陽性率61.22%，94.12%，96.05%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），見表2。

表2　Ki-67在宮頸各類型病變中表達

2.3TLR3在宮頸炎及宮頸上皮內(nèi)瘤變中的表達與分布

TLR3主要于胞質(zhì)和（或）胞核內(nèi)表達。TLR3在慢性宮頸炎陽性率為11.04%，CINⅠ組，CINⅡ組中，CINⅢ組陽性率62.32%，95.02%、97.05%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），見表3。

表3　TLR3在宮頸各類型病變中表達

2.4宮頸各類型病變中p16與Ki-67，TLR3的相關(guān)性

Spearman相關(guān)性分析顯示：153例宮頸病變組織中p16及Ki-67，TLR3的表達均呈顯著正相關(guān)（rs=0.528，P＜0.01）。

3　討論

宮頸癌是常見的婦科腫瘤。隨著目前檢測水平的提高及人們防癌意識的提高，宮頸癌的發(fā)病率有所降低，早期癌及宮頸上皮內(nèi)瘤檢出率升高。隨著對生物標記物的關(guān)注，p16，Ki-67及TLR3越來越引起人們的重視，有望明確診斷宮頸高低級別病變，輔助治療，避免過度治療［3-4］。

p16是細胞周期素依賴激酶的抑制因子，是一種抑癌基因。通過抑制細胞周期蛋白D催化反應(yīng)，干擾抑制cDI＜4或cDI＜6活性組織細胞進入G/s期，無限制擴增向腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)化，發(fā)揮抑癌的作用。有研究發(fā)現(xiàn)［5］，99%高危型HPV陽性的宮頸病變及宮頸癌中有p16表達。Dong等［6］研究159例惡性婦科腫瘤p16表達情況，p16在FIGO分期越高、分化越差的腫瘤中表達明顯。Ki-67是一種核抗原，與增殖細胞密切相關(guān)。隨著腫瘤的惡性程度增高，Ki-67的表達增強，預(yù)后越差。TLRⅢ是一種Ⅰ型跨膜蛋白。具有保持組織穩(wěn)態(tài)平衡、調(diào)節(jié)細胞凋亡等功能。可通過炎癥反應(yīng)、細胞凋亡，逃避機體的免疫識別，導(dǎo)致病毒持續(xù)生長，HR-HPV下調(diào)TLR3表達，自然殺傷細胞活性降低，朗罕細胞減少，逃逸免疫，導(dǎo)致病毒感染及宮頸病變。該研究中，在慢性宮頸炎、CINI級、CINlI級、CINⅢ級中，p16陽性率為13.21%、58.24%，96.25%、97.51%，Ki-67陽性率為10.05%、61.22%、94.12%、96.05%，TLR3陽性率為11.04%、62.32%、95.02%、97.05%，p16與Ki-67，TLR3陽性率呈遞增趨勢，差異有統(tǒng)計學意義，Spearman相關(guān)性分析，TLR3與p16蛋白及Ki-67的表達均具有相關(guān)性（rs= 0.538，P＜0.01；rs=0.526，P＜0.01）。提示TLR3在宮頸各級病變轉(zhuǎn)化的過程中有重要作用。

該研究顯示，p16，ki-67在病變子宮頸中均有表達，隨著CIN級別的升高以及發(fā)生癌變，陽性率逐漸升高。CINI級病變p16染色可見各級表達。p16陰性表達的CINI級病變可能持續(xù)或者退化，而p16彌漫強陽性表達的CINI級病變進展為CINII～III級的風險較高。51例p16和Ki-67陰性病例無高級別CIN，提示p16和Ki-67均陰性可除外高級別CIN。3例高級別CIN病變p16顯示陰性，但Ki-67顯示陽性；11例高級別CIN病變，Ki-67為陰性，但p16均為陽性，說明單獨p16或Ki67用于診斷宮頸病變，有一定的漏診，聯(lián)合p16和Ki-67可以減少CIN的漏診。CINII級、CINIII級中p16與Ki-67多數(shù)為強陽性表達，提示p16和Ki-67均呈強陽性表達支持高級別宮頸病變的診斷［7-8］。

有研究，不同病理學家在正常組織及CINI級診斷間只有30%及64%一致性，而CINⅡ級更是低于50%的一致性，隨著細胞分子學的發(fā)展及對標志物的日趨關(guān)注，p16和Ki-67均呈強陽性表達支持高級別宮頸病變的診斷，提高了診斷的準確性。

［1］Chih HJ，Lee AH，Colville L，et a1.A review of dietary preventionof human papillomavirus-related infection of the cervix and cervicalintraepithelial neoplasia［J］.Nutr Cancer，2013，65（3）：317-328.

［2］郭超楠.全自動DNA倍體分析系統(tǒng)在宮頸癌早期診斷中的應(yīng)用研究［D］.張家口：河北北方學院，2012.

［3］梁凌云，杜輝，王純，等.深圳人群人乳頭瘤病毒病毒感染亞型分布與宮頸上皮內(nèi)瘤變情況橫斷面調(diào)查［J］.北京大學學報：醫(yī)學版，2013，45（1）：114-118.

［4］許振國，程烽，林建著，等.p16INK4A作為分子標志物在子宮頸癌篩查中的應(yīng)用［J］.中國婦幼保健，2013，28（19）：3109-3111.

［5］傅小一，張子雯.p16INK4A蛋白及HPV感染與宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗癌的相關(guān)性分析［J］.中國老年性雜志，2014，34（15）：4138-4140.

［6］Dong Y，Walsh MD，McGuckin MA，et a1.Increased expression of cyclin-dependent kinase inhibitor 2（CDK2A）gene product pl 6iNK4 in ovarina cancer is associatedwith prognosis and unfavourable prognosis［J］.Int JCancer，1997，74（1）：57.

［7］赫芳芳，高英，魏力.p16、Ki-67在宮頸鱗狀上皮病變分級診斷中的意義［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2016（8）：1271-1274.

［8］周麗.液基薄層細胞檢查在宮頸病變患者診斷中的應(yīng)用價值［J］.當代醫(yī)學，2013（18）：112-113.

Application of p16，Ki-67 Protein and TLR3 in Shunt Diagnosis of Cervical Lesions

LI Yan-xia
Gynecology of the Second People's Hospital of Liaocheng，Affilicated to Taishan Medical Sciences Univercity，Liaocheng，Shandong Province，252601 China

Objective To evaluate the application of p16，Ki-67 protein and TLR3 in shunt diagnosis of cervical lesions. Methods Group selection from October 2014 to August 2016 153 specimens onfirmed by pathological diagnosis of cervical lesions and can not determine the level of cervical lesions after Biopsying under colposcope.p16，Ki-67，TLR3 were detected with Envision methode.Results In chronic cervicitis，CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ，the positive expression rate of p16 for 58.24% and 13.21%and 96.25%and 97.51%，the positive rate of Ki-67 was 10.05%and 61.22%and 94.12%and 96.05%，TLR3 positive rate was 11.04%，62.32%，95.02%，97.05%，p16 and Ki-67，TLR3 positive rate was increased，the difference is significant.Conclusion P16 and Ki-67，TLR3 is important auxiliary diagnostic value for shunt in the diagnosis of cervical lesions，accurate guide the diagnosis and treatment of cervical lesions，prevent the happening of the cervical cancer.

P16；Ki-67；TRL3；Cervical lesions；Screening

R711

A

1674-0742（2016）10（a）-0026-03

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.28.026

李彥霞（1981.2-），女，山東臨清人，本科，主治醫(yī)師，研究方向：婦科腫瘤。

（2016-09-10）