□ 范　煒 河北省動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所

□ 徐天艦 赤峰市飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站

□ 李楠 熊雅婷 北京維德維康生物技術(shù)有限公司

熒光定量快檢產(chǎn)品—林可霉素?zé)晒舛靠焖贆z測(cè)試紙條

□ 范煒 河北省動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所

□ 徐天艦 赤峰市飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站

□ 李楠 熊雅婷 北京維德維康生物技術(shù)有限公司

林可霉素（Lincomycin）屬于林可胺類抗生素，主要用鏈霉菌發(fā)酵得到，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌有較強(qiáng)抗菌作用，對(duì)支原體也有抑制作用。林可霉素對(duì)敏感人群副作用較強(qiáng)，可引起消化道反應(yīng)，如惡心、嘔吐等，還可導(dǎo)致過(guò)敏反應(yīng)，如皮疹、蕁麻疹、多形性紅斑等。該藥物常作為飼料添加劑，預(yù)防動(dòng)物疾病，不規(guī)范用藥可導(dǎo)致在動(dòng)物組織、動(dòng)物產(chǎn)品以及乳品中殘留，不僅影響動(dòng)物性產(chǎn)品的加工生產(chǎn)，而且還會(huì)嚴(yán)重影響消費(fèi)者的身體健康。農(nóng)業(yè)部頒布的《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》（235號(hào)公告）規(guī)定了林可霉素在牛奶中的最大殘留限量為150μg/kg。針對(duì)林可霉素的定量測(cè)定國(guó)際通用方法為采用儀器方法，儀器方法靈敏度高，但是操作復(fù)雜，費(fèi)用昂貴，需要專門的技術(shù)人員進(jìn)行操作，不宜推廣。因此，急需建立一類準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便的林可霉素檢測(cè)方法。近幾年，雖然膠體金免疫層析技術(shù)已經(jīng)誕生，但由于膠體金標(biāo)記抗體檢測(cè)信號(hào)的局限性，限制了其方法學(xué)的靈敏度。熒光定量檢測(cè)系統(tǒng)由于簡(jiǎn)單快速、即時(shí)定量，從而作為一項(xiàng)新的檢測(cè)方法嶄露頭角。

圖1　標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1　林可霉素三種不同快速檢測(cè)產(chǎn)品參數(shù)比較

方法優(yōu)勢(shì)

林可霉素?zé)晒舛吭嚰垪l是北京維德維康生物技術(shù)有限公司自主研制出的熒光定量檢測(cè)產(chǎn)品之一，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)樣品中林可霉素含量進(jìn)行定量檢測(cè)，通過(guò)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線可知，其IC50=28，線性定量范圍：20～80ppb，檢測(cè)限（LOD）為7.8ppb，定量限（LOQ）為20.7ppb。

其標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

將林可霉素?zé)晒舛繖z測(cè)卡與已有的林可霉素膠體金檢測(cè)卡、試劑盒等產(chǎn)品進(jìn)行對(duì)比，比較其各項(xiàng)指標(biāo)參數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表1。通過(guò)比較發(fā)現(xiàn)，熒光定量檢測(cè)卡彌補(bǔ)了膠體金無(wú)法進(jìn)行定量檢測(cè)的不足，在標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi)可以進(jìn)行定量檢測(cè)，同時(shí)具備了較高的靈敏度，為其檢測(cè)準(zhǔn)確度提供了保障。此外，與試劑盒相比，熒光定量檢測(cè)卡達(dá)到了相同檢出限水平，同時(shí)，在進(jìn)行樣品前處理時(shí)無(wú)需稀釋處理，使操作變得更便捷。相比之下，熒光定量檢測(cè)卡綜合了高靈敏度定量檢測(cè)性能，同時(shí)又具備快捷的操作能力，具有顯著優(yōu)勢(shì)。

方法確證

基于熒光定量檢測(cè)卡的各項(xiàng)參數(shù)，再結(jié)合實(shí)際樣品檢測(cè)，對(duì)檢測(cè)時(shí)間、回收率、精確度等進(jìn)行對(duì)比驗(yàn)證及方法確證。

檢測(cè)時(shí)間為檢測(cè)前將檢測(cè)卡在50℃下孵育3min，加樣10min后在檢測(cè)配套的便攜式儀器內(nèi)讀數(shù)，即可得出待檢樣品中藥物的含量值。對(duì)于回收率和精確度的測(cè)量需分別在20種待測(cè)樣品（包括不同地域不同批次）中添加不同藥物濃度，并驗(yàn)證其回收率及精確度，結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可知，熒光定量檢測(cè)卡的回收率和精確度均達(dá)到較好水平。

為了證明熒光定量檢測(cè)卡的實(shí)際應(yīng)用情況，分別將空白樣品以及添加不同藥物濃度的樣品進(jìn)行儀器方法驗(yàn)證。根據(jù)SN/T 2218-2008《進(jìn)出口動(dòng)物源食品中林可酰胺類藥物殘留量檢測(cè)方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》中所述的檢測(cè)方法，選取HPLC-MS檢測(cè)作為驗(yàn)證方法，比較兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果及回收率，結(jié)果如表3所示。

由表3所示，熒光定量檢測(cè)卡的檢測(cè)結(jié)果與儀器檢測(cè)水平一致，當(dāng)藥物添加濃度達(dá)到40ppb時(shí)，熒光定量檢測(cè)卡的回收率甚至超過(guò)HPLC-MS檢測(cè)結(jié)果。說(shuō)明熒光定量檢測(cè)卡能夠?qū)λ幬餁埩暨M(jìn)行定量準(zhǔn)確檢測(cè)。

相較于儀器方法的復(fù)雜操作和昂貴儀器，熒光定量檢測(cè)卡只需簡(jiǎn)單處理樣品，檢測(cè)成本低、檢測(cè)速度快、準(zhǔn)確度高，對(duì)保障食品安全、實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)具有重要意義。

表2　回收率與精確度數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

表3　熒光定量檢測(cè)卡與HPLC-MS檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

討論

北京維德維康生物技術(shù)有限公司自主研發(fā)的熒光定量檢測(cè)系統(tǒng)有效地解決了膠體金等快檢方法信號(hào)局限性的問(wèn)題，實(shí)現(xiàn)了食品中農(nóng)藥獸藥殘留、非法添加物、霉菌毒素以及污染物等有害物質(zhì)濃度的準(zhǔn)確定量檢測(cè)。通過(guò)與膠體金試紙條、試劑盒以及儀器方法的對(duì)比分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，熒光定量檢測(cè)卡的準(zhǔn)確度、靈敏度以及實(shí)用性均達(dá)到了較高水平，具有顯著優(yōu)勢(shì)。熒光定量檢測(cè)系統(tǒng)憑借著簡(jiǎn)單、快速、時(shí)效性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高，可定量檢測(cè)、操作便捷、低成本等優(yōu)勢(shì)，能夠最大限度地減少甚至避免各類食品安全事件帶來(lái)的傷害，有效提高食品安全監(jiān)管工作的效率，提升食品安全監(jiān)管系統(tǒng)的完善水平，對(duì)確保大流通環(huán)境下的食品安全起到積極作用，引領(lǐng)食品安全快速檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的新方向。