晁利平，阮靜雅，劉艷霞，韓立峰，王 濤，張 祎

（天津市中藥化學(xué)與分析重點實驗室，天津 300193）

綿萆薢化學(xué)成分的分離與結(jié)構(gòu)鑒定*

晁利平，阮靜雅，劉艷霞，韓立峰，王 濤，張 祎

（天津市中藥化學(xué)與分析重點實驗室，天津 300193）

［目的］對綿萆薢的化學(xué)成分進行研究。［方法］采用大孔吸附樹脂、ODS、Sephadex LH-20等柱色譜及制備型高效液相色譜法對其所含化學(xué)成分進行分離、制備，并利用波譜學(xué)方法鑒定了結(jié)構(gòu)。［結(jié)果］從綿萆薢提取物中分離鑒定了Tachioside（1）、Isotachioside（2）、3，5-二甲氧基熊果苷（3）、2，6-二甲氧基-4-羥基-苯酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）、淫羊藿次苷D2（5）、苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（6）和腺苷（7）等7個單體成分。［結(jié)論］化合物1～3為首次從薯蕷屬中分離得到，4～7為首次從該植物中分離得到。

綿萆薢；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定

DOI：10.11656/j.issn.1673-9043.2016.05.13

作為傳統(tǒng)中藥，綿萆薢（Dioscoreae spongiosae Rhizoma）以其干燥根莖入藥，具有利濕去濁，祛風除痹之功效，用于治療膏淋、白濁、白帶過多、風濕痹痛、關(guān)節(jié)不利、腰膝疼痛等癥［1］，主產(chǎn)于湖南、湖北、浙江、江西、福建、廣東及廣西等地［2］。綿萆薢中含有的化學(xué)成分主要為甾體、二芳基庚烷、木脂素、有機酸及酯等［3］。藥理活性研究表明，綿萆薢及其有效成分具有抗骨質(zhì)疏松［4］、抗心肌缺血、抗腫瘤［5］、抗真菌、調(diào)血脂、降尿酸［6］、預(yù)防動脈粥樣硬化等作用。臨床上用于治療乳糜尿、慢性前列腺炎、骨質(zhì)疏松、風濕及類風濕性關(guān)節(jié)炎及骨關(guān)節(jié)炎等癥狀。

筆者在對綿萆薢化學(xué)成分研究的過程中，利用與文獻［7-13］類似的方法，分離鑒定出7個單體化合物。其中，1～3為首次從薯蕷屬中分離得到，4～7為首次從該植物中分離得到，結(jié)構(gòu)見圖1。

1 儀器與材料

Bruker500MR超導(dǎo)核磁共振波譜儀（瑞士Bruker公司，AvanceⅢ500MR），大孔吸附樹脂（天津海光化工有限公司），ODS（ChromatorexODSMB，40～75μm，日本YMC有限公司）；Sephadex LH-20（瑞典Ge Healthcare Bio-Sciences AB公司），Cosmosil 5C18-MS-Ⅱ制備柱和分析柱（250 mm×4.6 mm和250 mm×20 mm，均為5 μm，Japan，Nacalai Tesque公司），TLC Silica gel 60 F254（Aluminium sheets 20 cm×20 cm，德國Merck公司）。

色譜/分析純氯仿、甲醇、乙腈、丙酮、冰醋酸等試劑購自天津康科德科技有限公司。

綿萆薢購自河北安國，由天津中醫(yī)藥大學(xué)李天祥副教授鑒定為薯蕷科植物綿萆薢（Dioscoreaspongiosa J.Q.Xi，M.Mizuno et W.L.Zhao）。

2 提取與分離

取綿萆薢干燥根（7.8 kg）經(jīng)18、16倍量70% EtOH加熱回流2次（3、2 h），合并濾液，減壓回收溶劑，得浸膏1 150.0 g。上述浸膏（1 000.0 g）經(jīng)D101大孔吸附樹脂處理（H2O→95%EtOH→Acetone），得到 H2O、95%EtOH和 Acetone洗脫物分別為725.0、245.0及1.9 g。

95%EtOH洗脫物（150.0g）經(jīng)硅膠柱層析［CHCl3-MeOH（100∶1→100∶3→100∶7，V/V）→CHCl3-MeOHH2O（10∶3∶1→7∶3∶1→6∶4∶1，V/V/V，下層）］，共得12個組分（Fr.1～12）。

Fr.6（14.0 g）經(jīng)ODS柱層析［MeOH-H2O（20∶80 →30∶70→40∶60→50∶50→60∶40→70∶30→80∶20→100∶0，V/V）］，得到17個組分（Fr.6-1～6-17）。Fr.6-1（1170.0mg）經(jīng)制備型高效液相色譜法（PHPLC）分離制備［CH3CN-H2O（3∶97，V/V）］，得到17個組分（Fr.6-1-1～6-1-17）。Fr.6-1-6（26.9 mg）、6-1-9 （13.8 mg）、6-1-11（29.0 mg）、Fr.6-1-14（90.9 mg）分別經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析（MeOH），得到Tachioside（1，20.0 mg）、Isotachioside（2，7.9 mg）、3，5-二甲氧基熊果苷（3，25.6 mg）和2，6-二甲氧基-4-羥基-苯酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4，36.3 mg）。Fr.6-1-15（119.4 mg）經(jīng)PHPLC分離制備［MeOHH2O（8∶92，V/V）+1%HAc］，得到腺苷（7，50.0 mg）和淫羊藿次苷D2（5，36.0 mg）。Fr.6-3（241.0 mg）經(jīng)PHPLC分離制備［CH3CN-H2O（10∶90，V/V）+1%HAc］，得到苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（6，9.8 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準分子離子峰m/z 301.093 2［M-H］-，確定其分子式為C13H18O（8Calcd for C13H17O8，301.092 9）。1H-NMR（500 MHz，C5D5N）：δ 7.14（1H，br.s，H-3），7.04（1H，br.d，ca.J=9 Hz，H-5），7.13（1H，d，J=8.5 Hz，H-6），5.54（1H，d，J=7.0 Hz，H-1′），4.36（2H，m，overlapped，H-2′andH-3′），4.32（1H，dd，J=7.5、8.0Hz，H-4′），4.10（1H，m，H-5′），［4.38（1H，dd，J=4.5、11.5 Hz）、4.57（1H，br.d，ca.J=12 Hz），H2-6'］，3.70 （3H，s，2-OCH）3。其1H-、13C-NMR（125 MHz，C5D5N，見表1）譜數(shù)據(jù)與文獻［14］相對照，鑒定該化合物為Tachioside。

化合物2：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準分子離子峰m/z 301.092 8［M-H］-，確定其分子式為C13H18O1（3Calcd for C13H17O13，301.092 9）。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）：δ 6.46（1H，d，J=2.0 Hz，H-3），6.30（1H，dd，J=2.0、8.5 Hz，H-5），7.02（1H，d，J=8.5 Hz，H-6），4.70（1H，d，J=7.0 Hz，H-1'），3.44（2H，m，overlapped，H-2′and H-5′），3.33（1H，dd，J=7.5、8.0 Hz，H-3′），3.38（1H，dd，J=8.0、9.5 Hz，H-4′），［3.69（1H，dd，J=5.5、12.0 Hz）、3.86（1H，br.d，ca.J=12 Hz），H2-6′，3.81（3H，s，2-OCH3）。其1H-、13C-NMR（125 MHz，CD3OD，見表1）譜數(shù)據(jù)與文獻［15］相對照，鑒定該化合物為Isotachioside。

化合物3：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準分子離子峰m/z 331.103 9［M-H］-，確定其分子式為C14H20O9（Calcd for C14H19O9，331.103 5）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）：δ 6.38（2H，s，H-2，6），4.69（1H，d，J=7.5 Hz，H-1′），3.20（1H，dd，J= 7.5、9.0 Hz，H-2′），3.26（1H，dd，J=9.0、9.0 Hz，H-3′），3.11（1H，dd，J=9.0、9.0 Hz，H-4′），3.30（1H，m，H-5′），［3.40（1H，dd，J=5.0、12.0 Hz）、3.72（1H，m，overlapped），H2-6′］，3.72（6H，s，3，5-OCH3）。其1H-、13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6，見表1）譜數(shù)據(jù)與文獻［16］相對照，鑒定該化合物為3，5-二甲氧基熊果苷（koaburaside）。

化合物4：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準分子離子峰m/z 331.104 2［M-H］-，確定其分子式為C14H20O9（Calcd for C14H19O9，331.103 5）。1H-NMR（500 MHz，C5D5N）：δ 6.55（2H，s，H-3，5），5.53（1H，d，J=7.0 Hz，H-1′），4.28（3H，m，overlapped，H-2′-4′），3.88（1H，m，H-5′），［4.30（1H，dd，J=5.5、12.0 Hz）、4.38（1H，dd，J=2.0、11.5 Hz），H2-6′］，3.70（6H，s，2，6-OCH3）。其1H-、13CNMR（125 MHz，C5D5N，見表1）譜數(shù)據(jù)結(jié)合1H-1H COSY、HSQC、HMBC等2D-NMR譜的解析，鑒定該化合物為文獻［17］所報道的2，6-二甲氧基-4-羥基-苯酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（2，6-dimethoxy-4-hydroxyphenol-1-O-β-D-glucopyranoside）。

化合物5：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準分子離子峰m/z 345.120 2［M+COOH］-，確定其分子式為C14H20O7（CalcdforC15H21O9，345.119 1）。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）：δ 7.14（2H，d，J=8.5 Hz，H-2，6），7.02（2H，d，J=8.5 Hz，H-3，5），2.76（2H，t，J= 7.0 Hz，H2-7），3.69（2H，t，J=7.0 Hz，H2-8），4.86 （1H，d，J=7.0 Hz，H-1′），3.45（2H，m，overlapped，H-2′and 3′），3.40（2H，overlapped，H-4′and 5′），［3.69（1H，m，overlapped）、3.88（1H，dd，J=1.5、13.0 Hz），H2-6′］。其1H-、13C-NMR（125 MHz，CD3OD，見表1）譜數(shù)據(jù)與文獻［18］相對照，鑒定該化合物為淫羊藿次苷D（2Icariside D2）。

圖1 綿萆薢中分離得到的化合物1~7

化合物6：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準分子離子峰m/z 315.110 0［M+COOH］-，確定其分子式為C13H18O（6CalcdforC14H19O8，315.1085）。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）：δ 7.42（2H，br.d，ca.J=7 Hz，H-2，6），7.33（2H，t，J=7.0 Hz，H-3，5），7.27 （1H，br.d，ca.J=7 Hz，H-4），4.67、4.93（1H each，both d，J=11.5 Hz，H2-7），4.35（1H，d，J=7.0 Hz，H-1′），3.25（2H，m，H-2′and 5′），3.35（1H，dd，J=7.5、8.0 Hz，H-3′），3.30（1H，dd，J=8.0、8.0 Hz，H-4'），［3.69（1H，dd，J=5.0、12.0 Hz）、3.90（1H，br.d，ca.J=12 Hz），H2-6′］。其1H-、13C-NMR（125 MHz，CD3OD，見表1）譜數(shù)據(jù)與文獻［19］相對照，鑒定該化合物為苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（benzyl alcohol O-β-D-glucopyranoside）。

表1 化合物1～7的13C-NMR（125 MHz，δ）譜數(shù)據(jù)

化合物7：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS給出其準分子離子峰m/z 266.090 2［M-H］-，確定其分子式為C10H13N5O（4CalcdforC10H12N5O4，266.089 5）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）：δ 8.17（1H，s，H-2），8.38（1H，s，H-8），7.38（2H，s，6-NH2），5.91（1H，d，J=5.5 Hz，H-1′），4.64（1H，dd，J=3.0、5.5 Hz，H-2′），4.18（1H，t，J=3.0 Hz，H-3′），4.00（1H，m，H-4′），［3.59 （1H，dd，J=4.0、12.0 Hz）、3.71（1H，dd，J=3.0、12.0 Hz），H2-5′］。其1H-、13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6，見表1）譜數(shù)據(jù)與文獻［20］相對照，鑒定該化合物為腺苷（Adenosine）。

4 結(jié)果

為了進一步擴大對綿萆薢的開發(fā)與利用，筆者運用色譜和波譜學(xué)方法，對綿萆薢的化學(xué)成分進行了研究，分離并鑒定了以下7個單體成分，分別是Tachioside（1）、Isotachioside（2）、3，5-二甲氧基熊果苷（3）、2，6-二甲氧基-4-羥基-苯酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）、淫羊藿次苷D2（5）、苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（6）、腺苷（7）。其中，化合物1～3為首次從薯蕷屬中分離得到，4～7為首次從該植物中分離得到。

5 討論

綿萆薢最早記錄于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷史久遠且療效顯著。但國內(nèi)外對綿萆薢化學(xué)成分的研究報道尚少，據(jù)文獻報道，其化學(xué)成分主要是甾體皂苷、二芳基庚烷、木脂素類等；具有抗骨質(zhì)疏松、抗心肌缺血、抗腫瘤、抗真菌、調(diào)血脂、降尿酸、預(yù)防動脈粥樣硬化等藥理作用。因此，進一步開發(fā)與利用該植物，加強其化學(xué)成分與藥理活性的篩選，可對其臨床治療與應(yīng)用有指導(dǎo)性意義。

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Isolation and structural identification of constituents from Dioscoreae spongiosae Rhizoma

CHAO Li-ping，RUAN Jing-ya，LIU Yan-xia，HAN Li-feng，WANG Tao，ZHANG Yi
（Key Laboratory of Traditional Chinese Medicinal Chemistry and Analytical Chemistry of Tianjin，Tianjin 300193，China）

［Objective］Study on chemical constituents of Dioscoreae spongiosae Rhizoma.［Methods］The chemical constituents were obtained by ODS，Sephadex LH-20 and PHPLC chromatorgraphy isolation，and identified by chemical and spectral analysis.［Results］The structures of seven comounds were elucidated to be tachioside（1），isotachioside（2），koaburaside（3），2，6-dimethoxy-4-hydroxyphenol-1-O-β-D-glucopyranoside（4），icariside D2（5），benzyl alcohol O-β-D-glucopyranoside（6），and adenosine（7），respectively.［Conclusion］Compounds 1～3 were obtained from Dioscoreae genus firstly，and 4～7 was isolated from the plant for the first time.

Dioscoreae spongiosae Rhizoma；chemical constituents；structural identification

R284

A

1673－9043（2016）05－0336-04

2016-05-04）

新世紀優(yōu)秀人才支持計劃資助項目（NCET-12-1069）；天津市高等學(xué)校創(chuàng)新團隊培養(yǎng)計劃資助項目（TD12-5033）。

晁利平（1989-），女，碩士研究生，主要從事中藥化學(xué)與分析研究。

張 祎，E-mail:zhwwxzh@263.net。