郭威，郭曉軍，袁洪水，朱寶成

（河北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河北保定071001）

科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究

產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌對(duì)仔雞生長(zhǎng)性能、腸道脂肪酶活力和微生物菌群的影響

郭威，郭曉軍，袁洪水，朱寶成*

（河北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河北保定071001）

本試驗(yàn)旨在研究產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌菌劑對(duì)仔雞生長(zhǎng)性能、腸道脂肪酶活力及微生物菌群的影響。選取900只1日齡健康仔雞隨機(jī)分為3組（每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)100只雞）：對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組分別飼喂添加0.5%和1%產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌菌劑的試驗(yàn)飼糧，試驗(yàn)期42 d。結(jié)果表明：（1）添加1%產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌仔雞全期料重比降低了8.50%（P＜0.05），添加0.5%劑量組飼喂全期料重比降低了5.00%（P＜0.05）。（2）添加0.5%和1%菌劑組21日齡仔雞腸道內(nèi)脂肪酶活力分別提高了8.84%（P＜0.05）和25.31%（P＜0.05）。（3）添加1%產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌組21日齡仔雞盲腸中大腸桿菌含量降低了33.93%（P＜0.05），乳酸桿菌和雙歧桿菌含量分別增加了73.78%（P＜0.05）和28.82%（P＜0.05）；添加0.5%劑量組21日齡仔雞盲腸中大腸桿菌含量降低了14.89%（P＜0.05）。由此可見(jiàn)，添加1%產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌對(duì)仔雞全期的料重比、腸道內(nèi)脂肪酶活力和微生物菌群的改善作用影響顯著。

脂肪酶；芽孢桿菌；生長(zhǎng)性能；脂肪酶活力；微生物菌群

王恬等（2006）指出，剛出殼的禽類脂肪消化率低的重要因素之一可能是胰腺脂肪酶分泌不足。因此，適當(dāng)在飼料中添加產(chǎn)消化酶的益生菌可以彌補(bǔ)禽類內(nèi)源酶的不足。枯草芽孢桿菌是一類可形成芽孢的好氧革蘭氏陽(yáng)性菌，被公認(rèn)為是可在飼料中直接使用的微生物菌種（何明清，2004）。另外，芽孢桿菌進(jìn)入動(dòng)物腸道后，在腸道上部能迅速萌發(fā)并分泌活性很強(qiáng)的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等，提高動(dòng)物機(jī)體對(duì)飼料的消化率和養(yǎng)分的吸收利用率（潘康成，2009）。枯草芽孢桿菌EA-30-A是本實(shí)驗(yàn)室篩選到的一株高產(chǎn)脂肪酶的芽孢桿菌菌株，且經(jīng)紫外誘變選育，性質(zhì)穩(wěn)定（郭曉軍，2015）。本試驗(yàn)旨在研究不同水平產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌EA-30-A對(duì)仔雞生長(zhǎng)性能、腸道內(nèi)脂肪酶活力及微生物菌群的影響，為其推廣應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌：EA-30-A菌劑，有效活菌數(shù)5×108cfu/g，由河北眾邦生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；全價(jià)飼糧：由河北大午農(nóng)牧集團(tuán)飼料有限公司提供；基礎(chǔ)飼料：在全價(jià)飼料的基礎(chǔ)上添加1%大豆油。

1.2試驗(yàn)動(dòng)物與試驗(yàn)設(shè)計(jì)仔雞，由保定市徐水縣大午集團(tuán)提供。選用同一批出雛的1日齡健康仔雞900只，分為3組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)100只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼料；試驗(yàn)Ⅰ組和Ⅱ組分別在基礎(chǔ)飼料的基礎(chǔ)上添加0.5%和1%EA-30-A菌劑。

1.3試驗(yàn)飼糧與飼養(yǎng)管理本試驗(yàn)于河北農(nóng)業(yè)大學(xué)種雞試驗(yàn)場(chǎng)內(nèi)進(jìn)行，試驗(yàn)為期42 d。采用自由飲水，人工喂料（每天3次），按常規(guī)飼養(yǎng)管理進(jìn)行免疫接種。兩個(gè)飼養(yǎng)階段日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1　日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.4測(cè)定指標(biāo)與方法每周測(cè)定各組仔雞的采食量、體增重，計(jì)算平均日增重（ADG）、平均采食量（ADFI）和料重比（F/G）。

于每周末早上從各組仔雞十二指腸中取食糜測(cè)定其脂肪酶活力。脂肪酶活力測(cè)定方法參考橄欖油乳化法（Macrae，1985）。

試驗(yàn)第三周末取盲腸內(nèi)容物，分離培養(yǎng)大腸桿菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌。伊紅美蘭（EMB）培養(yǎng)基用于培養(yǎng)大腸桿菌，MRS瓊脂培養(yǎng)基用于培養(yǎng)乳酸桿菌，BBL瓊脂培養(yǎng)基用于培養(yǎng)雙歧桿菌。以10倍梯度將仔雞盲腸內(nèi)容物進(jìn)行稀釋，取1 mL稀釋液分別涂布于培養(yǎng)基平板上，于37℃恒溫培養(yǎng)24 h后，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)。

1.5數(shù)據(jù)處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0進(jìn)行單因素方差分析，Duncan’s法進(jìn)行多重比較，試驗(yàn)結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2　結(jié)果與分析

2.1EA-30-A 菌劑對(duì)仔雞生產(chǎn)性能的影響表2顯示，從試驗(yàn)全期看，基礎(chǔ)飼糧中添加0.5%和1%EA-30-A菌劑較對(duì)照組平均日增重提高9.20%、23.06%，差異均顯著（P＜0.05）；1%劑量添加組較0.5%劑量組平均日增重提高12.69%（P＜0.05）?；A(chǔ)飼糧中添加0.5%EA-30-A菌劑可提高仔雞各期日采食量，但影響不顯著（P＞0.05）；從試驗(yàn)全期看，添加1%EA-30-A菌劑仔雞的平均日采食量較對(duì)照組提高了12.43%（P＜0.05），與0.5%劑量組相比提高了8.63%（P＜0.05）?；A(chǔ)飼糧中添加0.5%EA-30-A菌劑能降低仔雞各期料重比，其中對(duì)前期（1～21 d）影響不顯著（P＞0.05），對(duì)后期（22～42 d）和全期影響顯著，分別降低了2.51%（P＜0.05）和5.00%（P＜0.05）；從試驗(yàn)全期看，添加1%EA-30-A菌劑降低了仔雞料重比8.50%（P＜0.05），與0.5%劑量組相比降低了3.68%（P＜0.05）。

表2　EA-30-A菌劑對(duì)仔雞生產(chǎn)性能的影響

2.2EA-30-A菌劑對(duì)仔雞十二指腸脂肪酶活力的影響由表3可知，基礎(chǔ)飼糧中添加0.5%EA-30-A菌劑在試驗(yàn)兩周內(nèi)對(duì)仔雞十二指腸內(nèi)脂肪酶活力無(wú)顯著影響，在試驗(yàn)兩周后顯著提高了仔雞十二指腸內(nèi)脂肪酶活力；添加0.5%和1%EA-30-A菌劑與對(duì)照組相比，21日齡仔雞腸道內(nèi)脂肪酶活力分別提高了8.84%和25.31%（P＜0.05）。

表3　EA-30-A菌劑對(duì)仔雞十二指腸脂肪酶活力的影響U/mL

2.3EA-30-A菌劑對(duì)仔雞盲腸中菌群的影響表4顯示，與對(duì)照組相比，基礎(chǔ)飼糧中添加0.5% EA-30-A菌劑，21日齡仔雞盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量降低了14.89%（P＜0.05），1%劑量添加組大腸桿菌數(shù)量降低了33.93%（P＜0.05）?；A(chǔ)飼糧添加1%EA-30-A菌劑，21日齡仔雞盲腸內(nèi)乳酸菌數(shù)量增加了73.78%（P＜0.05），而添加0.5%劑量組對(duì)其影響不顯著（P＞0.10）。與對(duì)照組相比，基礎(chǔ)飼糧添加0.5%EA-30-A菌劑對(duì)21日齡仔雞盲腸內(nèi)雙歧桿菌數(shù)量影響不顯著（P＞0.05），1%劑量添加組雙歧桿菌數(shù)量增加了28.82%（P＜0.05）。

表4　EA-30-A菌劑對(duì)21日齡仔雞盲腸內(nèi)菌群數(shù)量的影響lg cfu/g

3　討論

研究報(bào)道，芽孢桿菌能夠提高仔雞的平均日增重，改善飼料轉(zhuǎn)化效率（Jiraohocakul，1990）。盧龍娣（2010）用芽孢桿菌制劑對(duì)AA白羽肉仔雞進(jìn)行飼喂試驗(yàn)，平均日增重約提高40%，不同階段飼料轉(zhuǎn)化率也有不同程度的提高。本試驗(yàn)也得到了相同的結(jié)果，基礎(chǔ)飼糧中添加0.5%和1%EA-30-A菌劑均能顯著提高仔雞平均日增重，明顯降低料重比。料重比顯著降低，表明飼料轉(zhuǎn)化率顯著提高。從添加量來(lái)看，添加1%菌劑較添加0.5%菌劑效果好，說(shuō)明芽孢桿菌要在動(dòng)物體內(nèi)發(fā)揮其益生作用還需要一定的有效活菌數(shù)。

芽孢桿菌促生長(zhǎng)的機(jī)理可能是其進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)后能產(chǎn)生多種酶類，如蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和半纖維素酶等，這些酶能促進(jìn)腸道有機(jī)物的消化吸收（Haberer，2003），從而提高飼料的利用率。本試驗(yàn)將EA-30-A菌劑添加到基礎(chǔ)飼糧中，仔雞十二指腸內(nèi)脂肪酶活力顯著提高，說(shuō)明EA-30-A菌劑進(jìn)入仔雞體內(nèi)后，迅速生長(zhǎng)繁殖，代謝產(chǎn)生了脂肪酶，彌補(bǔ)了仔雞出殼初期內(nèi)源性脂肪酶的不足，有效促進(jìn)了脂肪的吸收利用，提高了料重比和飼料利用價(jià)值。

研究表明，動(dòng)物長(zhǎng)期持續(xù)飼喂芽孢桿菌可產(chǎn)生病原菌拮抗物質(zhì)，拮抗腸道病原細(xì)菌，起到維持和調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡的作用（Guo，2006；Alexopoulos，2001；Jamamus，2001）。芽孢桿菌是好氧菌，抗逆性強(qiáng)，耐酸、堿、熱，主要作用是消耗腸道中的氧氣，給乳酸菌、雙歧桿菌等厭氧益生菌營(yíng)造厭氧的生長(zhǎng)環(huán)境。王曉霞等（2006）在肉雞飼糧中添加0.1%枯草芽孢桿菌，能減少肉雞盲腸中的大腸桿菌和沙門氏菌等有害菌的數(shù)量，選擇性增加乳酸桿菌等有益菌群的數(shù)量。Jin等（1998）發(fā)現(xiàn)，肉仔雞在10、20日齡飼喂0.05%乳酸桿菌制劑后，盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)顯著降低。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加1%產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌顯著降低了21日齡仔雞盲腸中大腸桿菌數(shù)量，增加了乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量，添加0.5%劑量對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)量影響顯著。雖然0.5%劑量添加組對(duì)21日齡仔雞腸道內(nèi)菌群影響沒(méi)有達(dá)到顯著水平，但仍顯示了芽孢桿菌的有益作用。

4　結(jié)論

4.1基礎(chǔ)飼糧中添加1%產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌能顯著提高仔雞平均日增重，改善料重比，效果優(yōu)于0.5%劑量組。

4.2基礎(chǔ)飼糧中添加產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌能提高仔雞腸道內(nèi)脂肪酶活力，促進(jìn)脂肪的消化吸收，效果以添加1%最優(yōu)。

4.3基礎(chǔ)飼糧中添加1%產(chǎn)脂肪酶芽孢桿菌能顯著降低盲腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)，增加乳酸桿菌和雙歧桿菌數(shù)量。

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This experiment was conducted to investigate the effects of dietary Bacillus producing lipase on performance，intestinal lipase activity and microflora of chicks.A total of 900 one-day-old chicks were randomly allocated to 3 groups with 3 replicates of 100 each.The chicks were randomly subjected to one of the following 3 treatments for 42 days：control group（fed a basal diet），and two treatments（fed the basal diet with 0.5%and 1%dietary Bacillus producing lipase，respectively）.The result showed as follows：（1）Adding 1%Bacillus producing lipase decreased feed/gain by 8.50%at weeks 1 to 6（P＜0.05），and adding 0.5%dose decreased by 5.00%（P＜0.05）.（2）After adding 0.5%and 1%Bacillus producing lipase，duodenal lipase activity of chicks on day 21 increased by 8.84%（P＜0.05）and 25.31%（P＜0.05），respectively.（3）The number of E.coli decreased by 33.93%and the number of Lactobacillus and Bifidobacterium in caecum of chicks on day 21 respectively increased by 73.78%（P＜0.05）and 28.82%（P＜0.05）by adding 1%Bacillus producing lipase，and the number of E.coli in caecum of chicks on day 21 decreased by 14.89%（P＜0.05）after adding 0.5%Bacillus.In conclusion，adding 1%Bacillus producing lipase had significant influence on feed/gain，intestinal lipase activity and microflora of chicks at weeks 1 to 6（P＜0.05）.

lipase；Bacillus；growth performance；lipase activity；microflora

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20161405

S816.7

A

1004-3314（2016）14-0019-03

國(guó)家星火計(jì)劃項(xiàng)目［2010GA105010］；河北省科技計(jì)劃項(xiàng)目（12236606）