向文英，梅朝葉，楊　武，孫　佳，陸　苑，陳思穎，黃　勇

(1. 貴州省藥物制劑重點實驗室；2. 國家苗藥工程技術(shù)研究中心；3.貴州醫(yī)科大學 藥學院，貴州 貴陽　550004)

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頭花蓼的血清藥物化學研究

向文英1，2，3，梅朝葉1，3，楊武1，3，孫佳1,3，陸苑1,3，陳思穎1,3，黃勇1

(1. 貴州省藥物制劑重點實驗室；2. 國家苗藥工程技術(shù)研究中心；3.貴州醫(yī)科大學 藥學院，貴州 貴陽550004)

中藥血清藥物化學是以藥物化學的研究手段和方法為基礎，采用現(xiàn)代分析方法鑒定口服中藥后血清中藥源性成分及移行成分，它能夠直觀地分析中藥口服后的血液中的形態(tài)表現(xiàn)，快速尋找藥效物質(zhì)基礎[1]。

頭花蓼(PolygonumcapitatumBuch.-Ham.ex D.Don) 又名四季紅、石莽草等，屬于蓼科多年生草本植物的干燥全草或地上部分[2]。其味苦、辛，性涼，歸腎，具有清熱利濕、利尿通淋等功效，主要用于治療腎盂腎炎、尿道感染、膀胱炎等疾病[3-5]。但其體內(nèi)作用成分及代謝過程研究還未見報道，因此本次研究采用血清藥物化學研究方法，和色譜分析等手段對頭花蓼進行了初步研究，為探討頭花蓼提取物在大鼠體內(nèi)的主要藥效物質(zhì)基礎和提高臨床療效奠定了科學基礎。

1　材料

1.1儀器與試藥Agilent Technologies 1290 Infinity液相色譜系統(tǒng)；ESI-Q-TOF/MS(美國布魯克道爾頓)；Allegra 64R低溫高速離心機(美國Beckman Coulter 公司)；CQ 250A-TS超聲波清洗機(上海躍進醫(yī)用光學器械廠)；MTN-2800D氮吹濃縮裝置(天津奧特塞恩斯儀器有限公司)；EL204電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；

頭花蓼藥材(購自貴州施秉頭花蓼GAP種植基地，由貴州醫(yī)科大學藥學院生藥學教研室龍慶德副教授鑒定)；對照品[沒食子酸(批號MB6346)、原兒茶酸(批號MB6312)、槲皮苷(批號MB6680)，大連美侖生物科技有限公司]；金絲桃苷、陸地棉苷對照品(自制，經(jīng)UV、IR、MS、1H-MNR、13C-NMR結(jié)構(gòu)確證， HPLC在多個波長檢測，其峰面積歸一化含量均大于98.0%)；頭花蓼提取物(自制，批號：20130508)；乙腈、甲酸(色譜純，德國Merck 公司)；純凈水(廣州屈臣氏食品飲料有限公司)；其他試劑均為分析純。

1.2動物分組及給藥健康SD大鼠，體質(zhì)量為(220±20)g，由貴州醫(yī)科大學動物中心提供[批號SCXK(黔)2002-0001]?！狻岣靼?，隨機分為2組(給藥組及空白組)，每組6只，分別給予頭花蓼有效組分及蒸餾水，按每次87 g·Kg-1(生藥量)劑量連續(xù)灌胃3 d，每天2次，空白組灌胃同等體積的蒸餾水。

2　方法

2.1色譜條件色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18RRHD(2.1 mm×100 mm，1.8 μm)，柱溫：45 ℃，流動相：0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)梯度洗脫，進樣體積為2 μL，梯度洗脫：(0～10 min, 5% B～45% B, 10～14 min, 45% B～95% B, 14～15 min, 95% B～100% B, 15～16 min, 100% B～5% B。

2.2質(zhì)譜條件電噴霧離子源(ESI)，掃描方式為負離子掃描(ESI-，m/z 50～1 000)，毛細管電壓3 KV，錐孔電壓：80 V，離子源溫度：110 ℃，霧化氣(N2)壓力：1.2 bar，流速：8.0 L·min-1，溫度200 ℃，脫溶劑氣溫度：300 ℃，氣體體積流量：50 L·h-1，脫溶劑氣體積流量：550 L·h-1，準確質(zhì)量測定采用甲酸鈉校正標準液，校正模式選用：Enhanced Quadratic。數(shù)據(jù)分析：Data Analysis，Metabolite Detect。

2.3供試品的制備分別于末次給藥后30 min股動脈采血，取全血置于37 ℃恒溫水浴上，至上層有黃色液體析出，4 ℃離心10 min，置于-20 ℃保存，備用。取大鼠血清0.5 mL，用甲醇沉淀蛋白，加入300 μL 50%甲醇水溶液溶解殘留物，UHPLC-ESI-Q-TOF/MS進樣分析。

3　結(jié)果

在本實驗色譜和質(zhì)譜條件下，大鼠口服頭花蓼提取物后血清樣本中共檢測出18個移行成分，通過與對照品對照和題組前期對頭花蓼的化學成分研究[6]，確定5個為原型成分，13個可能為原型成分的代謝產(chǎn)物，其中1號指紋峰為沒食子酸，3號指紋峰為原兒茶酸，5號指紋峰為陸地棉苷、7號指紋峰為金絲桃苷、10號指紋峰為槲皮苷，見Tab 1。

Tab 1　Total ion chromatogram of peak retention and vested of Polygonum capitatum

4　討論

本研究建立了UHPLC-ESI-Q-TOF/ MS對血清的檢測方法，其具有離子傳輸效率高、傳輸離子質(zhì)量范圍寬、靈敏度高、錯誤率低、重現(xiàn)性高等優(yōu)點。在頭花蓼提取物含藥血清中檢測到大量的黃酮類成分槲皮素的葡萄糖醛酸化、甲基化、硫酸化代謝產(chǎn)物，同時還存在酚酸類成分沒食子酸、原兒茶酸的甲基化、硫酸化代謝產(chǎn)物等，這些成分可能為頭花蓼的體內(nèi)直接作用物質(zhì)，對其進行深入的研究，將有助于闡明頭花蓼藥效物質(zhì)基礎及藥效機制。

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[1]Huo S X, Peng X M, Gao L. Pharmacochemistry of traditional Uighur medicine Calla Turcica[J].ChinTraditPatentMed,2011,33(10):1754-7.

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[2]Tang L, Liu Y, Huang Y, et al. Study on absorption characteristics of five com ponents from Polygonum capitatum by isolated everted intestine model[J].ChinPharmacolBull,2014,30(7):1031-2.

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[5]Xie Y, Zhang L Y, Lian B, et al. Determination of quercitrin in Polygonum capitatum and Re lin qing granules by HPLC[J].ChinaJChinMaterMed,2009,34(8):984-6.

[6]劉躍,胡杰,謝玉敏,等.UPLC- MRM-MS法測定頭花蓼藥材中7個指標成分[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2015,27(1):73-6.

[6]Liu Y, Hu J, Xie Y M, et al. Determination of seven components in Polygonum capitatum by UPLC-MRM-MS[J].NaturalProdResDev, 2015,27(1):73-6.

Serum pharmacochemistry ofPolygonumcapitatum

XIANG Wen-ying1,2,3,MEI Chao-ye1,3,YANG Wu1,3, SUN Jia1,3, LU Yuan1,3, CHEN Si-ying1,3, HUANG Yong1

(1.GuizhouProvincialKeyLaboratoryofPharmaceutics;2.NationalEngineeringResearchCenterofMiao’sMedicine, 3.SchoolofPharmacy,GuizhouMedicalUniversity,GuizhouGuiyang550004,China)

頭花蓼；血清藥物化學；UHPLC-Q-TOF/MS；含藥血清；指紋圖譜；移行成分

Polygonumcapitatum; serum pharmacochemistry; UHPLC-Q-TOF；serum containing drug; fingerprint; compounds

時間：2016-9-22 11:14

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160922.1114.056.html

2016-06-10,

2016-08-25

國家自然科學基金項目(No 81260688)；貴州省國際科技合作計劃(No 2012-7040)，貴州省研究生卓越人才計劃項目(黔教研合ZYRC字[2014]J012)

向文英(1992-)，女，碩士生，研究方向：藥物代謝動力學研究，E-mail:852017994@qq.com；

黃勇(1976-)，男，博士，教授，研究方向：中藥活性成分及新藥開發(fā)研究，通訊作者，E-mail：Hujie51619@sina.cn

10.3969/j.issn.1001-1978.2016.10.028

A

1001-1978(2016)10-1476-02

R-332；R282.71；R284.1