陳順金，陳靖，吳笑英，黎潤球(東莞市人民醫(yī)院耳鼻喉科、病理科，廣東東莞53000)

·論著·

鼻咽癌EGFL7的表達(dá)與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系

陳順金1，陳靖2，吳笑英1，黎潤球1
(東莞市人民醫(yī)院耳鼻喉科1、病理科2，廣東東莞523000)

目的檢測鼻咽癌表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域7(EGFL7)的表達(dá)水平，并觀察其與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，為臨床診療提供依據(jù)。方法選取2014年1月至2016年1月我院收治的鼻咽癌患者50例為觀察組，同期鼻咽炎患者50例為對照組，應(yīng)用免疫組化分析法檢測兩組患者的EGFL7表達(dá)水平、微血管密度(MVD)和淋巴管密度(LVD)，并分析EGFL7與病理特征、MVD和LVD的關(guān)系。結(jié)果觀察組患者的EGFL7高表達(dá)率為38.0%(19/50)，顯著高于對照組的10.0%(5/50)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；EGFL7與年齡、性別和EB病毒無關(guān)(P＞0.05)，與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)；EGFL7與MVD呈正相關(guān)(P＜0.05)，與LVD無相關(guān)(P＞0.05)。結(jié)論EGFL7與鼻咽癌轉(zhuǎn)移有關(guān)，與血管形成有關(guān)，與淋巴管形成無關(guān)。

表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域7；鼻咽癌；鼻咽炎；相關(guān)性

鼻咽癌是發(fā)生在鼻咽腔的惡性腫瘤，多發(fā)生于頂部和側(cè)壁，是耳鼻喉科常見的惡性腫瘤之一。鼻咽癌發(fā)生轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的主要原因，其中頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移最常見。血管形成是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的重要原因，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移也是最重要的途徑，尤其是頭頸部惡性腫瘤[1]。現(xiàn)階段研究顯示，生物因子與腫瘤血管、淋巴管形成有重要關(guān)系，比如：血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrow th factor，VEGF)與腫瘤血管、淋巴管的形成存在較大關(guān)系[2]。表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域7(epidermalgrow th factor like domain 7，EGFL7)與血管內(nèi)皮有關(guān)，在血管形成中發(fā)揮重要作用，與其功能完善也有較大關(guān)系[3]。研究顯示，EGFL7在腫瘤細(xì)胞中也會出現(xiàn)表達(dá)，但是其是否與淋巴管形成有關(guān)尚無定論[4]。本研究旨在研究EGFL7的表達(dá)水平，并觀察其與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，為臨床診療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2014年1月到2016年1月我院收治的鼻咽癌患者50例為觀察組，所有患者均經(jīng)病理確診為鼻咽癌。男性39例，女性11例；年齡38～80歲，平均(59.4±3.3)歲；臨床分期：Ⅰ+Ⅱ期31例，Ⅲ+Ⅳ期19例。另選取同期行鼻咽活檢且病理確診為鼻咽炎患者50例為對照組，男性38例，女性12例。年齡37～80歲，平均(58.9±2.8)歲。兩組患者的年齡和性別比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者及家屬均知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 方法手術(shù)取標(biāo)本放置于10%甲醛溶液中，常規(guī)石蠟包埋，以4μm厚度進(jìn)行連續(xù)切片。應(yīng)用兔抗人EGFL7單克隆抗體(由上海生物技術(shù)有限公司提供)檢測兩組組織中EGFL7表達(dá)水平。應(yīng)用免疫組化分析法檢測觀察組微血管密度(m icrovesseldensity，MVD)、淋巴管密度(lymph vesseldensity，LVD)，所有操作均按照操作說明進(jìn)行，均由同一醫(yī)師操作。EGFL7為胞漿染色，染色程度：0分表示胞漿無染色；1分表示胞漿淡黃色云霧狀染色；2分表示胞漿黃素顆粒狀染色；3分表示胞漿深黃色均勻染色；陽性細(xì)胞所占比例：0分表示陽性細(xì)胞數(shù)≤10%；1分表示陽性細(xì)胞數(shù)為11%～40%；2分表示陽性細(xì)胞數(shù)為41%～70%；2分表示陽性細(xì)胞數(shù)超過70%?？傆嫹譃橹珡?qiáng)度+陽性細(xì)胞所占比例。總計分0分表示陰性；總計分1～2分表示弱陽性；總計分3～4分表示陽性；總計分5～6分表示強(qiáng)陽性(陰性+弱陽性表示低表達(dá)；陽性+強(qiáng)陽性表示高表達(dá))。MVD計數(shù)和LVD計數(shù)：將其放置于200倍的顯微鏡下觀察記錄5個視野，取平均值進(jìn)行計數(shù)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，應(yīng)用Pearson進(jìn)行相關(guān)性分析，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EGFL7表達(dá)情況觀察組患者的EGFL7高表達(dá)為38.0%，顯著高于對照組的10.0%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 鼻咽癌和鼻咽炎組織中EGFL7表達(dá)水平比較[例(%)]

2.2 EGFL7與臨床病理關(guān)系EGFL7與年齡、性別和EB病毒無關(guān)(P＞0.05)，與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，見表2。

表2 EGFL7與臨床病理關(guān)系[例(%)]

2.3 MVD、LVD與臨床病理關(guān)系EGFL7高表達(dá)者M(jìn)VD顯著高于低表達(dá)者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者M(jìn)VD、LVD均顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，Ⅲ+Ⅳ期者M(jìn)VD、LVD均顯著高于Ⅰ+Ⅱ期者，比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3 MVD、LVD與臨床病理關(guān)系(±s)

表3 MVD、LVD與臨床病理關(guān)系(±s)

臨床病理EGFL7表達(dá)分類高表達(dá)低表達(dá)t值6.748 P值0.009 t值1.023 P值0.193淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有無5.462 0.012 5.036 0.013 TNM分期Ⅰ+Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期例數(shù)19 31 20 30 31 19 MVD 86.45±13.25 52.52±9.36 81.24±10.57 56.25±6.73 62.38±3.85 84.67±8.04 4.529 0.019 LVD 9.35±2.32 6.93±1.07 13.04±2.04 2.09±0.95 14.33±2.26 5.29±0.74 3.952 0.021

2.4 相關(guān)性分析Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，EGFL7與MVD呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.745，P＜0.05)，與LVD無相關(guān)關(guān)系(r=0.004，P＞0.05)。

3 討論

轉(zhuǎn)移侵襲是惡性腫瘤的重要特征，是導(dǎo)致惡性腫瘤惡化的重要原因，給患者生命帶來較大威脅。多數(shù)研究顯示，不同腫瘤出現(xiàn)侵襲轉(zhuǎn)移時均具有相似的步驟，主要包括：原發(fā)腫瘤迅速生長、形成新的血管、腫瘤細(xì)胞脫落經(jīng)血管或淋巴進(jìn)入循環(huán)、躲避免疫攻擊達(dá)到新的靶器官[5]。而腫瘤細(xì)胞到達(dá)新靶器官后先形成一個無血管的微小轉(zhuǎn)移病灶，然后出現(xiàn)新血管形成，進(jìn)而發(fā)展成為可見的轉(zhuǎn)移病灶。由此可見，新生血管形成在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[6]。血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管內(nèi)皮相關(guān)因子在血管形成中發(fā)揮重要作用，比如：VEGF可以刺激血管和淋巴管的內(nèi)皮細(xì)胞增生，進(jìn)而刺激血管和淋巴管的生長。EGFL7與血管形成有關(guān)，但是其是否與淋巴管形成有關(guān)不確切[7-8]。其與鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系也研究較少，因此，本研究探討鼻咽癌EGFL7表達(dá)情況，并觀察EGFL7與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

本研究顯示，說明鼻咽癌組織中會存在EGFL7高表達(dá)，分析其原因可能為[9-10]：EGFL7可以促進(jìn)新血管形成，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長和繁殖，因此會在惡性腫瘤組織中出現(xiàn)高表達(dá)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是腫瘤轉(zhuǎn)移的常見途徑，是多數(shù)腫瘤轉(zhuǎn)移的首要途徑。腫瘤分期與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移具有較大關(guān)系，腫瘤出現(xiàn)侵襲轉(zhuǎn)移時腫瘤分期也會出現(xiàn)變化，因此觀察腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和腫瘤分期情況可以推測腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移情況[11]。EGFL7與年齡、性別和EB病毒無關(guān)(P＞0.05)，與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，說明EGFL7與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移存在一定關(guān)系，EGFL7促進(jìn)血管形成在一定程度上促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，腫瘤細(xì)胞增殖過度轉(zhuǎn)移的可能性也會增加，腫瘤轉(zhuǎn)移后EGFL7促進(jìn)新血管形成進(jìn)而使轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞穩(wěn)定生長，因此EGFL7與腫瘤轉(zhuǎn)移侵襲存在一定關(guān)系。EGFL7高表達(dá)者M(jìn)VD顯著高于低表達(dá)者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者M(jìn)VD、LVD均顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，Ⅲ+Ⅳ期者M(jìn)VD、LVD均顯著高于Ⅰ+Ⅱ期者，與其他研究結(jié)果具有相似性[12]，說明腫瘤出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分期較高者M(jìn)VD和LVD也會相應(yīng)表達(dá)增加，EGFL7高表達(dá)者僅會出現(xiàn)MVD高表達(dá)，LVD無明顯差異，推測EGFL7在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用僅與血管形成有關(guān)，而與淋巴管是否形成無關(guān)。本研究證實，EGFL7與MVD呈正相關(guān)關(guān)系，與LVD無相關(guān)關(guān)系，充分證實EGFL7與VEGF不同，EGFL7僅僅刺激新血管形成，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移，而不刺激淋巴管形成。

綜上所述，EGFL7在鼻咽癌組織中會出現(xiàn)高表達(dá)，且EGFL7高表達(dá)與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)，EGFL7可以刺激血管形成進(jìn)而促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移，對淋巴管形成與否無明顯影響。

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Expression of EGFL7 in nasopharyngeal carcinoma and its relationship w ith tumor invasion and metastasis.

CHEN Shun-jin1,CHEN Jing2,WU Xiao-ying1,LIRun-qiu1.Departmentof ENT1,Departmentof Pathology2,Dongguan People'sHospital,Dongguan 523000,Guangdong,CHINA

Objective To detect the expression of epidermalgrow th factor like domain 7(EGFL7)in nasopharyngeal carcinoma,and to observe its correlation w ith tumor invasion and metastasis,in order to provide the basis for clinical diagnosis and treatment.M ethods Fifty patientsw ith nasopharyngeal carcinoma in our hospitalwere selected as observation group from January 2014 to January 2016.Fifty patientsw ith nasopharyngitis of the same period were selected as the control group.The expression levels of EGFL7,m icrovessel density(MVD)and lymphatic vessel density (LVD)of two groups were detected using immunohistochemical analysis,and the relationship between EGFL7 and pathologic features,MVD and LVD were observed.Results The high expression rate of EGFL7 in the observation group was38.0%(19/50),significantly higher than 10.0%(5/50)in the controlgroup,and the differencewas statistically significant(P＜0.05).EGFL7 had nothing to do w ith age,sex and EB virus(P＞0.05),butwas associated w ith clinical stage and lymph nodemetastasis(P＜0.05).EGFL7 and MVD were positively correlated(P＜0.05),and therewasno correlation between EGFL7 and LVD(P＞0.05).Conclusion EGFL7 is related to themetastasisof nasopharyngeal carcinoma and the formation of blood vessels,butnotcorrelated to the formation of lymphatic vessels.

Epidermalgrow th factor like domain 7(EGFL7);Nasopharyngeal carcinoma;Nasopharyngitis；Relationship

R739.63

A

1003—6350（2016）16—2618—03

2016-02-17)

doi∶10.3969/j.issn.1003-6350.2016.16.013

陳順金。E-mail：gdqyb77@163.com