李娟紅，趙子賢，曾鳳群，利雯秀，陳世豪，葉青云，李敬紅(南方醫(yī)科大學(xué)附屬新會(huì)醫(yī)院檢驗(yàn)科、輸血科、內(nèi)分泌科，廣東江門5900)

·論著·

兩種方法檢測(cè)超敏C反應(yīng)蛋白診斷2型糖尿病患者頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度的價(jià)值

李娟紅1，趙子賢2，曾鳳群1，利雯秀1，陳世豪1，葉青云1，李敬紅3
(南方醫(yī)科大學(xué)附屬新會(huì)醫(yī)院檢驗(yàn)科1、輸血科2、內(nèi)分泌科3，廣東江門529100)

目的探討兩種方法檢測(cè)超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)對(duì)2型糖尿病(T2DM)患者頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度（IMT）增加的診斷價(jià)值。方法選擇2013年4月至2015年4月我院收治的84例T2DM患者，以彩色多普勒超聲診斷儀檢查患者頸動(dòng)脈的結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，按IMT＜0.9mm和IMT≥0.9mm分成頸動(dòng)脈正常組40例和頸動(dòng)脈增厚組44例。同期另選42例健康查體者為正常對(duì)照組，分別采用乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法和顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法檢測(cè)所有受檢者的全血hs-CRP和血清hs-CRP的水平，用受試者工作特征(ROC)曲線評(píng)價(jià)兩種方法檢測(cè)hs-CRP對(duì)T2DM患者IMT增加的診斷效能。另用總膽固醇(TC)聯(lián)合全血hs-CRP檢測(cè)評(píng)價(jià)對(duì)T2DM患者IMT增加的診斷效能。結(jié)果兩種方法顯示IMT增厚組的全血[(4.78±1.04)mg/L]和血清hs-CRP水平[(4.43±0.95)mg/L]均高于IMT正常組[(1.85±0.78)mg/L和(1.70±0.89)mg/L]和正常對(duì)照組[(0.98±0.67)mg/L和(0.87±0.59)mg/L]，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。用ROC曲線分析得全血hs-CRP的診斷靈敏度(76.2%)較高，而特異性(47.1%)較低，曲線下面積為0.612，而顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法檢測(cè)血清hs-CRP的診斷靈敏度(69.0%)較低，特異性(52.9%)較高，曲線下面積為0.596；全血hs-CRP聯(lián)合總膽固醇(TC)診斷的靈敏度(83.3%)和特異性(64.7%)，曲線下面積為0.732，均高于hs-CRP單項(xiàng)指標(biāo)診斷效能。結(jié)論T2DM患者IMT增加時(shí)，血液中hs-CRP水平升高；乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法檢測(cè)hs-CRP對(duì)T2DM患者IMT增加的診斷效能優(yōu)于顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法；全血hs-CRP聯(lián)合TC檢測(cè)能提高對(duì)T2DM患者IMT增加的診斷靈敏度和特異性。

乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法；顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法；2型糖尿??；超敏C反應(yīng)蛋白；頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度；總膽固醇；診斷

隨著人們生活條件和環(huán)境的改善，2型糖尿病(type 2 diabetesmellitus，T2DM)的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，而糖尿病大血管病變是T2DM患者的主要死因。它發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前認(rèn)為動(dòng)脈粥樣硬化和慢性炎癥是其病理基礎(chǔ)，用超聲診斷技術(shù)檢查頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度(IMT)增厚是反映T2DM患者頸動(dòng)脈粥樣硬化的重要指標(biāo)。超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)是常見炎癥標(biāo)志物之一，有研究表明hs-CRP水平的升高能反映頸動(dòng)脈粥樣硬化的形成[1-2]。然而hs-CRP檢測(cè)方法較多，乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法和顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法因存在不同的影響因素從而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果存在差異。本文旨在比較該兩種方法檢測(cè)患者血液中的hs-CRP水平，評(píng)價(jià)其檢驗(yàn)hs-CRP對(duì)T2DM患者IMT增加的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取本院內(nèi)分泌科2013年4月至2015年4月收治的T2DM患者84例，所有患者均符合1999年世界衛(wèi)生組織2型糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)病史排除惡性腫瘤患者、免疫系統(tǒng)疾病、感染性疾病、結(jié)締組織疾病。其中男性49例，女性35例，平均病程(4.90±5.23)年。以彩色多普勒超聲診斷儀檢測(cè)所有患者雙側(cè)頸動(dòng)脈，并根據(jù)IMT大小分為頸動(dòng)脈正常組(IMT＜0.9 mm)40例和頸動(dòng)脈增厚組(IMT≥0.9mm)44例，另選擇42例年齡、性別、體質(zhì)量相符的健康查體者為正常對(duì)照組進(jìn)行比較。

1.2 觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法采集受試者早晨空腹肘靜脈血，EDTA-K2抗凝管分別用于全血hs-CRP和糖化血紅蛋白(HbA1c)測(cè)試，促凝管分離獲取血清，分別檢測(cè)血清hs-CRP、空腹血糖(FPG)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)。全血hs-CRP采用乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法檢測(cè)(禾柏生物技術(shù)公司生產(chǎn)的HP-083/4型檢測(cè)儀)，HbA1c采用親和層析-高效液相色譜法檢測(cè)(美國(guó)Primus PDQ PLUS全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀)，用全自動(dòng)生化分析儀COBAS 6000(德國(guó)Roche公司生產(chǎn))檢測(cè)血清hs-CRP(采用顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法)、TC、TG。各儀器使用對(duì)應(yīng)配套的試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，各項(xiàng)目符合室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)控要求。用彩色多普勒超聲診斷儀(GE LOQIG 500)以6.0～11.0MHz的探頭頻率，測(cè)量受試者IMT，即頸總動(dòng)脈后壁內(nèi)膜表面與外膜分界線的距離，以IMT＜0.9mm歸入頸動(dòng)脈厚度正常組，IMT≥0.9mm歸入頸動(dòng)脈增厚度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s)表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩兩差異比較采用NK法，以P＜0.05為檢驗(yàn)水平。制作ROC曲線，分別計(jì)算曲線下面積AUC(area under ROC curve)，探討最佳診斷點(diǎn)即約登指數(shù)最大時(shí)的Cut-off值及相應(yīng)的靈敏度和特異性，對(duì)兩種方法檢測(cè)hs-CRP在2型糖尿病患者頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度增加的診斷效能進(jìn)行評(píng)價(jià)。

2 結(jié)果

2.1 三組受檢者一般臨床資料及血液學(xué)指標(biāo)比較T2DM患者IMT正常組和IMT增厚組血液學(xué)指標(biāo)中，F(xiàn)PG、HbA1c、TG與正常對(duì)照組比較，均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。IMT正常組與正常對(duì)照組比較，TC、IMT、全血hs-CRP、血清hs-CRP水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。IMT增厚組與正常對(duì)照組比較，TC、IMT、全血hs-CRP、血清hs-CRP水平均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 三組患者的一般臨床資料及血液學(xué)指標(biāo)比較(±s)

表1 三組患者的一般臨床資料及血液學(xué)指標(biāo)比較(±s)

注：與正常對(duì)照組比較，a P＜0.05；與IMT正常組比較，b P＜0.05；“-”表示無(wú)此數(shù)據(jù)。

項(xiàng)目F/χ2值P值男性(%)病程(年) BM I(kg/m2) FPG(mmol/L) HbA1c(%) TG(mmol/L) TC(mmol/L) IMT(mm)全血hS-CRP(mg/L)血清hS-CRP(mg/L) IMT正常組(n=40) 54.41 4.92±5.35 24.37±1.80 9.51±2.98a 8.59±2.14a 2.30±2.11a 4.35±1.01 0.67±0.13 1.85±0.78 1.70±0.89 IMT增厚組(n=44) 55.18 4.87±5.11 23.84±1.79 9.72±4.12a 8.91±2.61a 2.58±2.09a 5.13±1.11ab 1.34±0.35ab 4.78±1.04ab 4.43±0.95ab正常對(duì)照組(n=42) 53.21 -24.12±1.83 5.12±0.34 5.28±0.47 1.49±0.51 4.18±0.48 0.62±0.12 0.98±0.67 0.87±0.59 0.512 0.852 0.813 4.385 5.863 4.452 4.012 4.526 10.211 8.514 0.731 0.462 0.485 0.027 0.019 0.026 0.033 0.025 0.011 0.018

2.2 ROC曲線下兩種方法檢測(cè)hs-CRP對(duì)T2DM患者IMT增加的診斷效能比較在ROC曲線下得到的面積(AUC)是反映診斷效能的指標(biāo)，AUC越靠近1，表明診斷效能越好。乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法檢測(cè)全血hs-CRP的AUC為0.612(見圖1)，大于顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法檢測(cè)血清hs-CRP的AUC(0.596)(見圖2)。當(dāng)約登指數(shù)為最大值時(shí)所對(duì)應(yīng)的hs-CRP水平作為最佳診斷點(diǎn)，乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法檢測(cè)全血hs-CRP的最佳診斷點(diǎn)為4.78，敏感度為76.2%，特異度為47.1%，而顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法檢測(cè)血清hs-CRP的最佳診斷點(diǎn)為4.43，敏感度為69.0%，特異度為52.9%。結(jié)果顯示，乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法檢測(cè)全血hs-CRP對(duì)T2DM患者IMT增加的診斷效能優(yōu)于顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法，見表2。

圖1 乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法檢測(cè)全血hs-CRP對(duì)T2DM患者頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度增加診斷的ROC曲線

圖2 顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法檢測(cè)血清hs-CRP對(duì)T2DM患者頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度增加診斷的ROC曲線

表2 兩種方法檢測(cè)hs-CRP對(duì)T2DM患者頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度增加診斷的效能比較

2.3 ROC曲線下全血hs-CRP聯(lián)合TC檢測(cè)對(duì)T2DM患者IMT增加的診斷效能評(píng)價(jià)全血hs-CRP聯(lián)合TC檢測(cè)對(duì)T2DM患者IMT增加診斷的ROC曲線AUC為0.732(見圖3)，敏感度為83.3%，特異度為64.7%，95%可信區(qū)間為0.582～0.883，均高于hs-CRP單項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的診斷效能。

圖3 全血hs-CRP聯(lián)合TC用于T2DM患者頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度增加診斷的ROC曲線

3 討論

目前研究認(rèn)為T2DM和動(dòng)脈粥樣硬化屬于系統(tǒng)性慢性炎癥反應(yīng)[3]。炎癥反應(yīng)介質(zhì)在介導(dǎo)糖脂蛋白質(zhì)代謝和胰島素抵抗中起到至關(guān)重要的作用。超敏C反應(yīng)蛋白是反映炎癥最為敏感的指標(biāo)蛋白之一，它可激活補(bǔ)體途徑等多種免疫或炎癥反應(yīng)機(jī)理從而損害動(dòng)脈內(nèi)膜，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的形成[4]；頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度(IMT)增加是公認(rèn)反映體內(nèi)動(dòng)脈粥樣硬化程度的指標(biāo)[5]。本文分析T2DM患者IMT正常組、IMT增厚組和正常對(duì)照組血液中hs-CRP水平結(jié)果顯示，IMT增厚組血液中hs-CRP水平均高于IMT正常組和正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示hs-CRP水平可反映T2DM患者IMT的變化情況。李宗鋒等[6]研究發(fā)現(xiàn)，老年T2DM患者頸動(dòng)脈斑塊組中hs-CRP水平高于正常對(duì)照組和內(nèi)膜增厚組，hs-CRP和IMT呈正相關(guān)。我們可通過檢測(cè)T2DM患者體內(nèi)hs-CRP水平來(lái)預(yù)測(cè)和評(píng)估IMT增加的情況，本研究利用在ROC曲線下，評(píng)價(jià)乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法和顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法檢測(cè)hs-CRP對(duì)T2DM患者IMT增加的診斷效能。

結(jié)果顯示，乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法稍優(yōu)于顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法。從方法學(xué)原理上分析兩者有所不同：hs-CRP的檢測(cè)是用CRP抗體連接微小(約1μL)的乳膠或顆粒后，在液相介質(zhì)中與相應(yīng)抗原(CRP)結(jié)合，產(chǎn)生濁度或散射光的變化從而檢測(cè)抗原含量[7]；散射比濁法是某固定波長(zhǎng)的光束沿水平方向照射，通過液體遇到抗原抗體復(fù)合物顆粒時(shí)，光線被其顆粒折射發(fā)生偏轉(zhuǎn)，偏轉(zhuǎn)的角度變化和發(fā)射光的波長(zhǎng)與抗原抗體復(fù)合物的顆粒大小與數(shù)量成正比；透射比濁法是檢測(cè)光束通過液體中抗原抗體復(fù)合物顆粒后到達(dá)探測(cè)器而未被吸收或散射的光束量，光通量與抗原含量成反比[8]。在低濃度時(shí)其濁度的變化對(duì)光束通量的透過影響不足夠大，從而相對(duì)降低顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法的靈敏度，這與文獻(xiàn)[9-10]報(bào)道相符。在抗原高濃度時(shí)，顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法存在鉤狀效應(yīng)使結(jié)果偏低。乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法檢測(cè)時(shí)，儀器上有探測(cè)抗原是否過量的檢測(cè)系統(tǒng)，更能提高對(duì)樣本檢測(cè)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。但剛等[11]認(rèn)為，在抗原低濃度和高濃度時(shí)，免疫散射比濁法比免疫透射比濁法更能獲得較為準(zhǔn)確的結(jié)果。

兩種方法的ROC曲線下AUC均小于0.8，說明單項(xiàng)檢測(cè)hs-CRP對(duì)T2DM患者IMT增加的診斷效能不理想，可能與T2DM患者IMT增加的復(fù)雜致病機(jī)制有關(guān)。全血hs-CRP聯(lián)合TC檢測(cè)對(duì)T2DM患者IMT增加診斷的ROC曲線AUC為0.732，敏感性為83.3%，特異度為64.7%，均高于hs-CRP單項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的診斷效能。大量研究表明，血液中TC水平與心肌梗死、腦梗死等大動(dòng)脈血管事件密切相關(guān)[12-13]，且TC是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的重要因素。hs-CRP聯(lián)合TC檢測(cè)更有利于對(duì)T2DM患者IMT增加的預(yù)測(cè)和診斷。

綜上所述，T2DM患者IMT增厚時(shí)血液中hs-CRP水平升高，用乳膠增強(qiáng)免疫散射比濁法檢測(cè)hs-CRP比用顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁法有更高的診斷效能；全血hs-CRP聯(lián)合TC檢測(cè)對(duì)診斷T2DM患者IMT增厚有更好的靈敏度和特異性，能增強(qiáng)臨床對(duì)患者病情發(fā)展的預(yù)測(cè)和診斷能力。

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Diagnostic value of hs-CRP detected by two assays in determ ining carotid intima-media thickness of patients w ith type 2 diabetesmellitus.

LIJuan-hong1,ZHAO Zi-xian2,ZENGFeng-qun1,LIWen-xiu1,CHEN Shi-hao1,YE Qing-yun1,LIJing-hong3.Departmentof Laboratory1,Departmentof Blood Transfusion2,Departmentof Endocrinology3, XinhuiHospital Afiliated to Southern MedicalUniversity,Jiangmen 529100,Guangdong,CHINA

Objective To evaluate the value of hypersensitive C-reaction protein(hs-CRP)detected by two assays in diagnosing increased carotid intima-media thickness(IMT)of patientsw ith type2 diabetesmellitus.M ethods With the findingsof cervical vascular color Doppler ultrasound exam ination as standard,84 patientsw ith T2DM,who adm itted to ourhospital from April2013 to April2015,were chosen and divided into thenormal IMT group(n=40,IMT＜0.9mm)and the IMT increased group(n=44,IMT≥0.9mm)according to the IMT level.At the same time,42 healthy peoplewere chosen as the control group.Thewhole blood and serum concentration of hs-CRP in the patients of normal IMT group,IMT increased group and control group were detected by latex-enhanced immunonephelometry method and partied-enhanced turbidimetric immunoassay respectively.The application value of the two assays in the diagnosisof patientsof type 2 diabetesmellitusw ith increased carotid intima-media thicknesswas evaluated by the receiver operating characteristic(ROC) curve.In addition,the total cholesterol combined w ith hs-CRPwere detected to evaluate the application value of the diagnosis of patients of type 2 diabetesmellitus w ith increased carotid intima-media thickness.Results The two assays showed that the levelof hs-CRP in whole blood and serum of IMT increased group[(4.78±1.04)mg/L,(4.43±0.95)mg/L, respectively]were significantly higher than those of thenormal IMT group[(1.85±0.78)mg/L,(1.70±0.89)mg/L,respectively]and the healthy control[(0.98±0.67)mg/L and(0.87±0.59)mg/L](P＜0.05).The ROC curve analysis showed that the latex-enhanced immunonephelometrymethod had higher sensitivity(76.2%)and lower specificity(47.1%),w ith the areas under ROC curve for 0.612;the partied-enhanced turbidmetric method had lower sensitivity(69.0%)and higher specificity(52.9%),w ith the areas under ROC curve for 0.596.Compared to the single index test,the sensitivity of hs-CRP and total cholesterol combination detection had higher sensitivity(83.3%)and higher specificity(64.7%),w ith the areas under ROC curve for 0.732.Conclusion The blood hs-CRP level rises w ith the increase of IMT in the patients w ith T2DM.The latex-enhanced immunonephelometry method is better than the partied-enhanced turbidimetric immunoassaymethod in the diagnostic performance of increased carotid intima-media thickness of T2DM.The combination detection of hs-CRPand total cholesterolcan improve the diagnostic sensitivity and specificity.

Latex-enhanced immunonephelometrymethod;Partied-enhanced turbidimetric immunoassay;Type 2 diabetesmellitus(T2DM);Hypersensitive C-reaction protein(hs-CRP);Carotid intima-media thickness;Total cholesterol;Diagnosis

R587.1

A

1003—6350（2016）16—2615—04

2016-01-27)

doi∶10.3969/j.issn.1003-6350.2016.16.012

李娟紅。E-mail：224047632@qq.com