熊秋萍，謝小蘭，何信，羅莉，孫琪

（四特酒有限責(zé)任公司，江西樟樹331200）

白酒中鄰苯二甲酸二丁酯檢測(cè)方法的研究

熊秋萍，謝小蘭，何信，羅莉，孫琪

（四特酒有限責(zé)任公司，江西樟樹331200）

研究開發(fā)了一種用于白酒中二甲酸二丁酯（dibutyl phthalate，DBP）的新的檢測(cè)方法：以氘代鄰苯二甲酸酯（D4-DBP）為內(nèi)標(biāo)的內(nèi)標(biāo)法。使用氣相色譜-質(zhì)譜儀為研究手段，和國標(biāo)中的外標(biāo)法做了對(duì)比，評(píng)估了內(nèi)標(biāo)法的精密度和準(zhǔn)確度。研究結(jié)果顯示，當(dāng)DBP濃度處于0.6 mg/kg以下時(shí)，內(nèi)標(biāo)法的精密度和準(zhǔn)確度與外標(biāo)法類似。DBP濃度高于0.6 mg/kg時(shí)，內(nèi)標(biāo)法測(cè)量數(shù)據(jù)比外標(biāo)法偏低。因此，內(nèi)標(biāo)法更適合在DBP濃度偏低時(shí)使用，在不影響測(cè)量結(jié)果的前提下，省去了配置標(biāo)準(zhǔn)曲線的步驟，比傳統(tǒng)外標(biāo)法操作更為便利。

內(nèi)標(biāo)法；外標(biāo)法；氣相色譜-質(zhì)譜；DBP；D4-DBP

白酒在中國歷史悠久，蘊(yùn)藏與傳承著深厚的中華文化。然而近年來白酒中的塑化劑問題引起人們的強(qiáng)烈關(guān)注。塑化劑是一類鄰苯二甲酸酯物質(zhì)，可干擾人體內(nèi)分泌系統(tǒng)，導(dǎo)致男性生殖能力減弱、引發(fā)女性性早熟，并且可能通過胎盤脂質(zhì)及鋅代謝影響胎盤發(fā)育，導(dǎo)致胚胎生長緩慢，甚至具有致癌性［1］。

由于塑化劑在乙醇中的遷移率與時(shí)間有關(guān)，白酒會(huì)在貯存、運(yùn)輸與包裝過程中與塑料制品接觸而產(chǎn)生鄰苯二甲酸酯物質(zhì)的遷移。目前白酒中的塑化劑問題已成為整個(gè)白酒行業(yè)面臨的問題。本研究參照國標(biāo)方法GB/T 21911—2008《食品中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定》，結(jié)合白酒的實(shí)際情況，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)中條件進(jìn)行優(yōu)化和摸索其他方法，得出適合白酒中塑化劑的檢測(cè)方法，對(duì)白酒塑化劑的檢測(cè)和白酒產(chǎn)品質(zhì)量的控制提供指導(dǎo)。

1　材料與方法

1.1材料、試劑及儀器

白酒：四特酒。

正己烷：色譜純（賽默飛）；標(biāo)準(zhǔn)品：鄰苯二甲酸二丁酯（DBP，純度≥99.6%），氘代鄰苯二甲酸二丁酯（D4-DBP，純度≥99.6%）；德國Dr.Ehrenstorfer GmbH公司。

儀器設(shè)備：氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS），7890A-5975C安捷倫公司；旋渦混合器。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1色譜條件

色譜柱：HP-5MS 30 m×25 μm×0.25 μm；載氣（氦氣純度≥99.999%）：流速為1.2 mL/min，尾吹3 mL/min；進(jìn)樣器溫度：280℃；四級(jí)桿溫度：150℃；柱箱二階升溫程序：60℃（保持1 min），20℃/min升至220℃（保持1 min），5℃/min升至280℃（保持4 min）。

進(jìn)樣量：1 μL。

1.2.2質(zhì)譜條件

色譜與質(zhì)譜接口溫度：280℃；四級(jí)桿溫度：150℃；電離方式：電子轟擊源（EI）；監(jiān)測(cè)方式：選擇離子掃描模式（SIM）；電離能量：70 eV；溶劑延遲：5 min。

1.2.3內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液和中間液的制備：準(zhǔn)確稱取100.0 mg標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)DBP（精確至0.1 mg），用正己烷定容至100 mL容量瓶中，配制為1000 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于冰箱保存待用。臨用時(shí)，準(zhǔn)確移取內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液1000 μL（精確至0.1 μL）于100 mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度制成10 mg/L的中間液。

內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液和中間液的制備：準(zhǔn)確稱取100.0 mg標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)D4-DBP（精確至0.1 mg），用正己烷定容至100 mL容量瓶中，配制為1000 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于冰箱保存待用。臨用時(shí)，準(zhǔn)確移取內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液1000 μL（精確至0.1 μL）于100 mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度即制成10 mg/L的中間液。

1.2.3.1外標(biāo)法

用移液槍準(zhǔn)確分別移取標(biāo)準(zhǔn)溶液中間液10 μL、20 μL、30 μL、50 μL、100 μL、200 μL加正己烷至最終體積為1000 μL，制備含DBP濃度為0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.3 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L或使用梯度稀釋法，進(jìn)樣后制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3.2內(nèi)標(biāo)法

用移液槍準(zhǔn)確分別移取標(biāo)準(zhǔn)溶液中間液10 μL、20 μL、30 μL、50 μL、100 μL、200 μL加正己烷至最終體積為990 μL，再分別加標(biāo)準(zhǔn)溶液中間液10 μL內(nèi)標(biāo)中間液制備為含DBP濃度為0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.3 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L或使用梯度稀釋法，進(jìn)樣后制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.4樣品前處理

外標(biāo)準(zhǔn)確稱取樣品2.00 g，加入正己烷2.0 mL，在漩渦混合器上振蕩1 min，靜置分層，取上層清液進(jìn)行分析。內(nèi)標(biāo)法準(zhǔn)確稱取樣品2.00 g，加入20 μL內(nèi)標(biāo)中間液，再加入正己烷2.0 mL，在漩渦混合器上振蕩1 min，靜置分層，取上層清液進(jìn)行分析。

2　結(jié)果與分析

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線

按照安捷倫工作站操作程序由安捷倫工作站自動(dòng)生成，見圖1。

監(jiān)測(cè)的主要碎片離子及保留時(shí)間見表1，離子圖見圖2。

2.2樣品測(cè)定

抽取10個(gè)不同酒體或不同讀數(shù)的酒樣分別采用外標(biāo)法和內(nèi)標(biāo)法，用GC-MS進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見表2。

2.3精密度與準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

圖1　標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

表1　監(jiān)測(cè)結(jié)果

表2　測(cè)定結(jié)果

用2種實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定酒精度為35%vol～45%vol的10個(gè)四特酒樣，參照國家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)不含油脂類物質(zhì)中的塑化劑檢測(cè)精密度要求為：在重復(fù)性條件下測(cè)定的2次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的15%，結(jié)果見表3。以10個(gè)樣品中的DBP 2次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果為例，結(jié)果分析中的相對(duì)誤差均能滿足精密度要求。選擇樣品6進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性，外標(biāo)法回收率平均值為99.0%，內(nèi)標(biāo)法回收率平均值為94.0%，結(jié)果表明2種方法的精密度以及準(zhǔn)確度均能滿足實(shí)驗(yàn)要求，結(jié)果見表4。

將內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法所做平行樣的相對(duì)誤差作圖分析見圖3。

圖2　2種化合物離子圖

3　結(jié)論

本研究參照國標(biāo)GB/T 21911—2008《食品中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定》，開發(fā)了內(nèi)標(biāo)測(cè)定方法，為白酒中鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)檢測(cè)提供更多檢測(cè)方法。從精密度和準(zhǔn)確度與外標(biāo)法的對(duì)照實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以得出，在濃度為0.6 mg/kg以下的范圍是適用的。同時(shí)從數(shù)據(jù)分析可見在DBP濃度更高時(shí)，內(nèi)標(biāo)法測(cè)量數(shù)據(jù)比外標(biāo)法偏低，雖然能滿足準(zhǔn)確度要求，在含量更高的情況下應(yīng)再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來確定是否適用。

表3　塑化劑檢測(cè)精密度結(jié)果

表4　外標(biāo)法及內(nèi)標(biāo)法回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

塑化劑是指一類鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)，白酒中主要存在的塑化劑是DBP（鄰苯二甲酸二丁酯）和DEHP（鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯，這2種物質(zhì)在本文所研究的方法中能得到很好分離，內(nèi)標(biāo)法檢測(cè)開啟了白酒中塑化劑檢測(cè)的新思路，同樣也可以延伸至其他種類的鄰苯二甲酸酯類，為白酒中塑化劑檢測(cè)帶來更廣闊的思路。

圖3　內(nèi)標(biāo)法與外標(biāo)法平行樣的相對(duì)誤差圖

［1］靳秋梅，孫增榮.鄰苯二甲酸酯類化合物的生殖發(fā)育毒性［J］.天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2004（10）：15-18.

［2］國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.食品中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定：GB/T 21911—2008［S］.北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

Detection of Dibutyl Phthalate in Baijiu

XIONG Qiuping，XIE Xiaolan，HE Xin，LUO Li and SUN Qi
（Site Liquor Co.Ltd.，Zhangshu，Jiangxi 331200，China）

In this study，a new detection method of dibutyl phthalate in Baijiu by using deuterated phthalic acid ester（D4-DBP）as the internal standard has been developed.Compared with the external standard method in ISO Standards via GC-MS，the precision and the accuracy of both methods were close as DBP concentration was below 0.6 mg/kg，however，the detection data of internal standard method were comparatively lower than that of external standard method as DBP was above 0.6 mg/kg.Accordingly，internal standard method was more suitable as DBP concentration was low，which could shorten the operation time of preparing the standard curve without any adverse effects on the analytic results.

internal standard method；external standard method；GC-MS；DBP；D4-DBP

TS262.3；TS261.7；TS261.4

A

1001-9286（2016）10-0061-04

10.13746/j.njkj.2016205

2016-06-17

熊秋萍（1986-），女，江西宜豐人，主要從事白酒檢測(cè)及質(zhì)量控制。

優(yōu)先數(shù)字出版時(shí)間：2016-08-05；地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20160805.1337.004.html。