萬小濤，鐘方財，葉幫芬，張有輝，袁　翊

(四川省內(nèi)江市第一人民醫(yī)院檢驗科　641000)

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·臨床研究·

醫(yī)院與社區(qū)獲得性耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的分子流行病學(xué)研究

萬小濤，鐘方財，葉幫芬，張有輝，袁翊

(四川省內(nèi)江市第一人民醫(yī)院檢驗科641000)

目的探討醫(yī)院與社區(qū)獲得性耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)產(chǎn)生耐藥的分子流行病學(xué)特征。方法采用培養(yǎng)法分離出MRSA，PCR法檢測mecA基因并分型。結(jié)果189株MRSA標(biāo)本甲氧西林決定因子(mecA)基因檢測有178株為陽性，進行mecA基因分型，SCCmecⅡ型24株，SCCmecⅢ型101株，SCCmecⅣ型51株，其他2株未能分型，分型結(jié)果存在差異。結(jié)論MRSA以SCCmecⅢ型為主，MRSA的產(chǎn)生與抗菌藥物的使用具有相關(guān)性。

耐甲氧西林金黃色葡萄球菌；甲氧西林決定因子A；醫(yī)院感染；社區(qū)感染

金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭染色陽性，是臨床感染的主要病原菌，并逐漸向社區(qū)擴展。采用傳統(tǒng)細菌鑒定及分型方法不能對其進行基因分型，尤其是對病原體溯源分析時，無法找出病原體變異的主要原因。本研究對分離出的耐甲氧西林金黃色葡萄球(MRSA)株進行基因分型，探討使用抗菌藥物與MRSA產(chǎn)生的相關(guān)性，為臨床用藥提供相關(guān)依據(jù)。

1　資料與方法

1.1一般資料2013～2015年該院住院和門診患者標(biāo)本，經(jīng)培養(yǎng)為MRSA的菌株，采集患者病歷資料分析抗菌藥物的使用情況。

1.2儀器與試劑低溫高速離心機，恒溫儀，ABI7500實時熒光定量擴增儀。甲氧西林決定因子(mecA)基因檢測試劑使用泰普生物有限公司試劑，SCCmec基因分型試劑由上海生工生物公司合成。

1.3方法

1.3.1金黃色葡萄球菌分離后mecA基因檢測使用特異性引物直接擴增金黃色葡萄球菌及mecA基因。

1.3.2葡萄球菌染色體盒(SCCmec)基因分型根據(jù)研究報道[1]，選擇4對PCR引物，PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性4 min，94 ℃變性40 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，30個循環(huán)。見表1、2。

1.3.3社區(qū)感染MRSA診斷標(biāo)準參照美國疾病預(yù)防控制中心診斷標(biāo)準， 患者在門診或入院48 h之內(nèi)分離MRSA菌株;1年內(nèi)無住院或與醫(yī)療機構(gòu)接觸史;無留置各種導(dǎo)管及其他穿透皮膚的醫(yī)用裝置。其他統(tǒng)計為醫(yī)院感染MRSA。

表1　　SCCmec分型擴增引物序列表

表2　　特異性基因片段與各型SCCmec關(guān)系

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以率表示，組間比較使用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

mecA基因檢測有178株陽性，11株為陰性，院內(nèi)感染115株，社區(qū)感染61株，其中院內(nèi)感染Ⅱ型和Ⅲ型共91株，社區(qū)感染為34株，院內(nèi)感染Ⅳ型為15株，社區(qū)感染為36株，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。SCCmec基因分型有2株未能分型成功。見表3、4。

表3　　178株mecA基因陽性SCCmec基因分型結(jié)果(n)

表4　　SCCmec基因分型結(jié)果在各臨床科室的分布情況(n)

3　討　　論

MRSA感染一般發(fā)生于嚴重基礎(chǔ)疾病、年老體弱者，且長期運用抗菌藥物類的住院治療患者。本研究結(jié)果表明，院內(nèi)感染是MRSA最主要傳播方式，如果因為監(jiān)測和控制不當(dāng)，可造成區(qū)域性的暴發(fā)流行，病死率非常高。

mecA基因作為MRSA的特征性耐藥基因，存于SCCmec，SCCmec為一種可移動盒式染色體，分子結(jié)構(gòu)主要包括mec基因復(fù)合體、CCr基因復(fù)合體及J區(qū)[2]。Ⅳ型除含有mecA耐藥基因外，未含有其他耐藥基因，而Ⅱ、Ⅲ型還含有CCr耐藥基因,可對紅霉素、壯觀霉素等耐藥。本研究未對SCCmecⅠ型和Ⅴ型進行分型，有2株未分型成功，不排除是Ⅰ型或Ⅴ型的可能，與有關(guān)研究基本一致[3]。本研究醫(yī)院感染的MRSA主要以SCCmecⅡ、Ⅲ型為主，而社區(qū)感染的MRSA則以SCCmecⅣ型為主(占59%)[4]，由于Ⅱ、Ⅲ型耐藥譜更廣，醫(yī)院感染的MRSA更難以選擇。本研究結(jié)果顯示，各科室SCCmecⅡ型共占13.6%,SCCmecⅢ型共占57.4%,SCCmecⅣ型占30.0%,與相關(guān)報道基本一致[5-6]。但Ⅱ、Ⅲ型的比例略有上升。門診菌株與總檢測菌株比較，SCCmecⅣ型占13.6%，而SCCmecⅡ、Ⅲ型占13.1%，門診分型結(jié)果顯示Ⅱ、Ⅲ型的比例也有上升，其原因可能與使用抗菌藥物增多有一定的相關(guān)性。由于Ⅱ、Ⅲ型還含有CCr耐藥基因，能對更多的抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性[7]。醫(yī)院感染的MRSA，SCCmecⅡ、Ⅲ型為79%，這要求臨床早期用藥時應(yīng)更多地了解患者病史。由于MRSA的產(chǎn)生與患者本身狀況密切相關(guān)，如基礎(chǔ)疾病、年老體弱等原因致住院時間較長，采用更多的抗菌藥物，所以認為抗菌藥物的長期運用是引起MRSA的主要原因，而SCCmec分型，是區(qū)分醫(yī)院感染和社區(qū)感染的一個重要指標(biāo)。醫(yī)院感染以耐藥譜更廣的SCCmecⅠ、Ⅱ、Ⅲ型為主，社區(qū)感染則以SCCmecⅣ、Ⅴ型為主，但目前社區(qū)感染的SCCmecⅡ、Ⅲ型有增加的趨勢，其產(chǎn)生的耐藥種類也更多，甚至耐萬古霉素金黃色葡萄球菌[8-9]。

綜上所述，MRSA的預(yù)防需要醫(yī)務(wù)人員和患者做到嚴格的消毒措施，可起明顯的防范作用；醫(yī)務(wù)人員加強對新入院及MRSA易感者的檢查，預(yù)防暴發(fā)流行，有早期治療的作用；同時探討MRSA的耐藥機制，尋找新藥的開發(fā)奠定科學(xué)基礎(chǔ)。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.053

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1673-4130(2016)19-2775-02

2016-02-21

2016-06-16)