白艷紅+胡濤

【摘要】 目的 研究胃黏膜組織中LKB1和ARID1A基因表達(dá)與胃癌發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系。方法 32例手術(shù)切除的胃癌組織標(biāo)本、10例正常胃組織及18例胃炎組織標(biāo)本利用組織芯片技術(shù)， 通過(guò)免疫組織化學(xué)方法， 檢測(cè)LKB1和ARID1A的陽(yáng)性表達(dá)率。結(jié)果 在胃癌組織中LKB1和ARID1A陽(yáng)性率（15.63%、34.38%）較胃炎（66.67%、55.56%）和正常胃組織（80.00%、60.00%）明顯降低（P<0.05）。胃癌伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者LKB1和ARID1A陽(yáng)性率與胃癌無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；胃癌不同浸潤(rùn)深度LKB1和ARID1A陽(yáng)性率比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；胃癌不同病理組織分型LKB1和ARID1A陽(yáng)性率比較， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 LKB1和ARID1A在胃癌組織中的表達(dá)缺失， 與胃癌轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)密切相關(guān)， 且在胃癌發(fā)生發(fā)展的不同環(huán)節(jié)可能為相對(duì)獨(dú)立而又相互作用的調(diào)控基因。

【關(guān)鍵詞】 抑癌基因；LKB1；ARID1A；胃癌

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.25.028

獨(dú)有的分子生物學(xué)背景促使了胃癌的發(fā)展演變， 而新近發(fā)現(xiàn)LKB1和ARID1A兩種抑癌基因的突變率在胃癌相關(guān)組織中可高達(dá)70%～80% [1]。為進(jìn)一步探討LKB1和ARID1A兩種抑癌基因在胃癌組織中的表達(dá)及預(yù)后關(guān)系， 選取本院60例胃黏膜組織標(biāo)本， 采用組織芯片技術(shù)并通過(guò)免疫組織化學(xué)方法對(duì)LKB1和ARID1A進(jìn)行檢測(cè)分析， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 選取菏澤市榮軍醫(yī)院病理科2009～2013年經(jīng)石蠟包埋處理的胃癌組織樣本蠟塊共32例， 其中， 男22例， 女10例， 年齡18～55歲， 平均年齡（39.1±7.3）歲。所有入選患者的病理組織切片均符合國(guó)家胃癌協(xié)會(huì)合作組織復(fù)核標(biāo)準(zhǔn)， 另選10例正常胃組織及18例胃炎組織標(biāo)本作為對(duì)照。

1. 2 組織芯片制作方法 ①空心蠟塊的制作：向空心模具內(nèi)注入融化的石蠟， 待石蠟?zāi)毯笠淮涡灾谱鞒煽招南瀴K。②目標(biāo)組織的定位：先將選取好的樣本蠟塊用德國(guó)Leica病理切片機(jī)切片， HE染色， 光鏡下， 根據(jù)其形態(tài)學(xué)變化標(biāo)注目標(biāo)組織。③目標(biāo)組織取樣：將標(biāo)記好的目標(biāo)樣本蠟塊標(biāo)注部位入放組織芯片取樣機(jī)， 利用樣本取樣機(jī)鉆取蠟塊的目標(biāo)組織。④制備樣本蠟塊：將鉆取樣本組織放入組織芯片制備機(jī)中， 將已溶化的石蠟注入樣本蠟塊制備機(jī)中， 冷凝后， 目標(biāo)芯片蠟塊制備完成。

1. 3 判定標(biāo)準(zhǔn) 采用雙盲法對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行閱片， 陽(yáng)性表達(dá)主要以棕黃色顆粒存在于細(xì)胞的胞漿或胞膜， 無(wú)染色者（+）， 陽(yáng)性表達(dá)率<10%者（++）， >10%部分表達(dá)者（+++）， 全部細(xì)胞膜染色或>10%胞漿中度以上表達(dá)者（++++）。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 LKB1和ARID1A在不同胃黏膜組織中的表達(dá) LKB1陽(yáng)性表達(dá)率最高的是正常胃組織為80.00%， 其次是胃炎組織陽(yáng)性表達(dá)率為66.67%， 均顯著高于胃癌組織的15.63%（P<0.05）；ARID1A的陽(yáng)性表達(dá)率在胃癌組織中為34.38%， 顯著低于正常胃組織的60.00%和胃炎組織的55.56%（P<0.05）。

2. 2 胃癌有無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移LKB1和ARID1A陽(yáng)性率比較 胃癌無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移者LKB1陽(yáng)性率為36.36%（4/11）， 高于胃癌伴淋巴轉(zhuǎn)移者的4.76%（1/21）（P<0.05）；胃癌無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移者ARID1A的陽(yáng)性率為72.73%（8/11）， 高于胃癌伴淋巴轉(zhuǎn)移者的14.29% （3/21）（P<0.05）。

2. 3 胃癌不同浸潤(rùn)深度LKB1和ARID1A陽(yáng)性率比較 胃癌不同浸潤(rùn)深度LKB1和ARID1A陽(yáng)性率比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其陽(yáng)性表達(dá)與胃癌浸潤(rùn)深度負(fù)相關(guān)。見(jiàn)表1。

2. 4 胃癌不同病理組織分型LKB1和ARID1A陽(yáng)性率比較 胃癌不同病理組織分型LKB1和ARID1A陽(yáng)性率比較， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

LKB1主要使細(xì)胞增殖停滯在細(xì)胞周期的G1期， 從而促進(jìn)細(xì)胞的凋亡， 另外LKB1對(duì)胚胎血管形成還有細(xì)胞誘導(dǎo)等多個(gè)方面都是具有生物學(xué)意義， 同時(shí)其還是一種重要的抑癌基因。本研究中檢測(cè)到胃癌組織中LKB1基因存在表達(dá)下調(diào)， LKB1蛋白的缺失表達(dá)與胃癌關(guān)系緊密聯(lián)系， 且LKB1抑癌作用機(jī)制有可能出現(xiàn)一些負(fù)性的調(diào)節(jié)效果。在本研究中， 通過(guò)免疫組織化學(xué)方法驗(yàn)證了LKB1在胃癌發(fā)生發(fā)展中可能起著重要的抑制作用， 并且這種基因的表達(dá)可能對(duì)患者的預(yù)后有著重要的幫助作用， 對(duì)胃癌患者在延長(zhǎng)其術(shù)后總體生存時(shí)間方面也具有積極作用。

ARID1A基因?qū)δ[瘤的抑制作用需要P53蛋白的參與， 而P53蛋白又通過(guò)調(diào)節(jié)CDKN1A和SMAD3因子使一種染色質(zhì)重塑因子發(fā)生失活性突變導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的再生受到抑制， 從而抑制腫瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展[2]。本研究發(fā)現(xiàn)， 在胃癌組織中ARID1A基因蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于正常胃組織及炎癥組織， 分析認(rèn)為其陽(yáng)性表達(dá)與胃癌浸潤(rùn)深度和淋巴轉(zhuǎn)移負(fù)相關(guān)， 而胃癌不同病理組織分型LKB1和ARID1A陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

總之， 胃癌形成發(fā)展過(guò)程可能與胃癌組織中ARID1A基因凋亡調(diào)控作用減弱或消失有關(guān)。腫瘤的發(fā)生是多基因參與的復(fù)雜過(guò)程， 在胃癌發(fā)生發(fā)展中， ARID1A和LKB1可能為相對(duì)獨(dú)立而又相互作用的抑癌基因， 目前研究較為零散， 二者的抑癌機(jī)制仍需進(jìn)行系統(tǒng)研究。

參考文獻(xiàn)

[1] 夏雷， 莫伏根， 李剛， 等.胃癌中HER-2和HER-3的表達(dá)及臨床意義.實(shí)用老年醫(yī)學(xué)， 2013， 27（11）：903-907.

[2] 閆毓秀， 張淑萍， 滑靜. p53基因研究進(jìn)展.北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2009， 24（2）：74-77.

[收稿日期：2016-01-29]