溫先勇,鄧　劍,李寶林

(西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,四川瀘州 646000)

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自身免疫反應(yīng)在丙型肝炎病變中的作用和影響

溫先勇,鄧劍,李寶林

(西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,四川瀘州 646000)

目的探討自身免疫反應(yīng)在丙型肝炎病變過(guò)程中的作用和影響。方法采用間接免疫熒光法和免疫印跡法對(duì)129例丙型肝炎、25例自身免疫性肝炎及30例健康體檢者血清中抗核抗體、抗線粒體抗體、抗可提取性核抗原抗體、抗肝抗原抗體進(jìn)行檢測(cè)；觀察丙型肝炎病變及治療前后的自身抗體的變化；探討自身抗體與HCV-RNA、肝功能指標(biāo)之間的關(guān)系。結(jié)果(1)丙型肝炎患者血清自身抗體總陽(yáng)性率為44.19%，明顯高于健康對(duì)照者(P<0.01)，但低于自身免疫肝炎患者(P<0.01)；自身抗體以單項(xiàng)和雙項(xiàng)陽(yáng)性、<1∶160的低滴度抗體為主。(2)丙型肝炎患者中，自身抗體總陽(yáng)性率按照急性、慢性、丙型肝炎后肝硬化和丙型肝炎后原發(fā)性肝癌組依次升高，慢性丙型肝炎明顯高于急性肝炎(P<0.05)；丙型肝炎后肝硬化和丙型肝炎后原發(fā)性肝癌兩組均高于慢性丙型肝炎(P<0.05)，但兩者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(3)自身抗體陽(yáng)性的丙型肝炎患者丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶等肝功能損害指標(biāo)明顯高于陰性患者(P<0.01)。(4)HCV-RNA陽(yáng)性患者自身抗體總陽(yáng)性率高于陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(5)在71例經(jīng)干擾素聯(lián)合利巴韋林治療的慢性丙型肝炎患者中，生化和血清學(xué)完全應(yīng)答的患者其體內(nèi)自身抗體陽(yáng)性率發(fā)生顯著下降(P<0.01)；而應(yīng)答不良患者，其體內(nèi)自身抗體陽(yáng)性率無(wú)明顯變化(P>0.05)。結(jié)論自身免疫反應(yīng)在丙型肝炎的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸過(guò)程中發(fā)揮了極為重要的作用。

丙型肝炎病毒；丙型肝炎；自身免疫反應(yīng)；自身抗體

近年來(lái)，自身免疫現(xiàn)象在丙型肝炎中的發(fā)現(xiàn)引起了臨床的高度重視，其發(fā)生機(jī)制目前尚不完全清楚[1-3]。為了解自身免疫反應(yīng)與丙型肝炎之間的內(nèi)在聯(lián)系，觀察129例不同臨床類(lèi)型的HCV患者病變及治療過(guò)程中自身抗體的變化，旨在探討自身免疫反應(yīng)在丙型肝炎病變中的作用和影響，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料本院門(mén)診及感染科2014年2月至2015年3月收治的丙型肝炎患者共147例，納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者符合2004年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)制訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，符合以上標(biāo)準(zhǔn)的患者129例，男70例，女59例，年齡15～76歲，平均(48.48±12.46)歲。其中包括：急性丙型肝炎23例，慢性病型肝炎71例，丙型肝炎后肝硬化22例，丙型肝炎原發(fā)肝癌13例；自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)組：25例，男14例，女11例，年齡13～75歲，平均(45.12±9.37)歲。AIH診斷依據(jù)國(guó)際AIH小組于2002修訂的AIH 診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。健康對(duì)照組：30例，門(mén)診健康體檢者，男17例，女13例，年齡13～72歲，平均(49.56±8.84)歲。排除標(biāo)準(zhǔn)，丙型肝炎組和自身免疫性肝炎組：排除其他型別的肝炎、肝膽及免疫性疾??；健康對(duì)照組：排除肝膽、免疫、血液系統(tǒng)疾??；所有對(duì)象排除腫瘤和病毒(非研究病毒)感染，3個(gè)月內(nèi)未使用免疫制劑。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均知情同意并簽署知情同意書(shū)。自身免疫性肝炎組、健康對(duì)照組與丙型肝炎組在年齡、性別構(gòu)成比方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1抗核抗體(ANA)、抗線粒體抗體(AMA)的檢測(cè)采用間接免疫熒光法，儀器為間接免疫熒光樣本前處理儀IF Sprinter(德國(guó)歐蒙公司),試劑購(gòu)自德國(guó)歐蒙公司。

1.2.2抗可提取性核抗原(ENA)檢測(cè)應(yīng)用免疫印跡法檢測(cè)14種ENA：nRNP/Sm、Sm、SSA、Ro-52、SSB、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、Nucleosomes、Histones、Rib.P-Prot抗體；抗肝抗原抗體譜(AMA-M2、抗SLA抗體、抗LKM-1抗體和抗LC-1抗體)。儀器為全自動(dòng)蛋白印跡儀EUROBlotmaster(德國(guó)歐蒙公司)，試劑由德國(guó)歐蒙公司提供。

1.2.3HCV-RNA檢測(cè)采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測(cè)HCV-RNA，儀器為ABI7500 Fast 基因擴(kuò)增儀(美國(guó))，試劑由深圳凱杰生物工程有限公司提供。

1.2.4肝功能檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)在AVDIA 2400生化分析儀(德國(guó) Siemens公司)上測(cè)定。

2　結(jié)　果

2.1129例丙型肝炎患者自身抗體檢測(cè)結(jié)果總陽(yáng)性以自身抗體≥1項(xiàng)陽(yáng)性計(jì)算。丙型肝炎組患者自身抗體總陽(yáng)性率明顯高于健康對(duì)照組(P<0.01)，但低于自AIH組(P<0.01)；同時(shí)，丙型肝炎組患者自身抗體以單項(xiàng)和雙項(xiàng)陽(yáng)性(52/57，92.98%)和低滴度(<1∶160)為主(45/57，78.95%),僅有2例滴度大于1∶640，均為ANA，見(jiàn)表1。

2.2不同臨床類(lèi)型丙型肝炎患者自身抗體檢測(cè)結(jié)果比較丙型肝炎患者中，自身抗體總陽(yáng)性率按照急性、慢性、丙型肝炎后肝硬化和丙型肝炎后原發(fā)性肝癌組依次升高,慢性丙型肝炎明顯高于急性肝炎(P<0.05)，丙型肝炎后肝硬化和丙型肝炎后原發(fā)性肝癌兩組均高于慢性丙型肝炎組(P<0.05)，但兩者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。

2.3HCV-RNA陰性和陽(yáng)性患者組之間自身抗體檢測(cè)結(jié)果比較以5.00×102IU作為判斷標(biāo)準(zhǔn)，將129例丙型肝炎患者分為HCV-RNA陰性和陽(yáng)性組，HCV-RNA陽(yáng)性患者血清自身抗體檢出率為51.65%明顯高于HCV-RNA陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表3。

表1　129例丙型肝炎患者自身抗體結(jié)果[n(%)]

a：χ2=13.28,P<0．01，與自身免疫性肝炎組比較；b：χ2=17.53,P<0．01，與健康對(duì)照組比較。

表2　不同臨床類(lèi)型丙型肝炎患者自身抗體檢測(cè)結(jié)果比較[n(%)]

a：χ2=5.98，P<0.05，與急性丙型肝炎組比較；b：χ2=5.04、5.75，P<0.05，與慢性丙型肝炎組比較；c：χ2=0.31，P>0.05，與丙型肝炎后肝硬化組比較。

表3　丙型肝炎患者HCV-RNA與自身抗體的關(guān)系[n(%)]

a：χ2=6.98，P<0.01，與 HCV-RNA陰性組比較。

表4　肝功能指標(biāo)與自身抗體的關(guān)系比較±s，μ/L)

a：t=7.17、3.20、4.99、7.32，P<0.01，與自身抗體陰性組比較。

表5　71例慢性丙型肝炎患者治療前后自身抗體變化比較[n(%)]

a：χ2=8.75,P<0.01，與完全應(yīng)答組治療前比較；b：χ2=0.05,P>0.05，與應(yīng)答不良組治療前比較。

2.4129例未經(jīng)治療的丙型肝炎患者肝功能與自身抗體之間的關(guān)系自身抗體陽(yáng)性的丙型肝炎患者其ALT、AST、ALP、GGT等多項(xiàng)肝功能損害指標(biāo)均明顯高于陰性患者(P<0.01)，見(jiàn)表4。

2.571例慢性丙型肝炎患者治療前后自身抗體的變化比較71例接受干擾素聯(lián)合利巴韋林治療48周的丙型肝炎患者,結(jié)束后依據(jù)療效將其分為完全應(yīng)答組：治療結(jié)束時(shí)，生化指標(biāo)(ALT、AST、ALP、GGT)恢復(fù)正常和血中HCV-RNA<5.00×102IU；應(yīng)答不良組：治療結(jié)束時(shí)生化指標(biāo)(ALT、AST、ALP、GGT)仍高于參考值和(或)HCV- RNA仍然≥5.00×102U，兩組患者血中自身抗體變化見(jiàn)表5。

3　討　論

研究表明，病毒感染與自身免疫關(guān)系密切，通過(guò)觀察自身抗體變化可了解患者體內(nèi)的自身免疫狀態(tài)。

HCV感染機(jī)體后，與宿主之間的免疫反應(yīng)是導(dǎo)致丙型肝炎致病的主要原因，其病理過(guò)程一般經(jīng)過(guò)急性期、慢性期、丙型肝炎后肝硬化、丙型肝炎后原發(fā)性肝癌的演變過(guò)程；但近年的文獻(xiàn)報(bào)道，約1/3的HCV感染者血清中可檢測(cè)到多種類(lèi)型的自身抗，對(duì)機(jī)體造成自身免疫損傷[1-3，6]。本研究顯示，44.19%的丙型肝炎患者至少檢測(cè)出一項(xiàng)或一項(xiàng)以上自身抗體陽(yáng)性，較健康對(duì)照組明顯增高(P<0.01)，但明顯低于自身免疫性肝病(P<0.01)；且自身抗體以單項(xiàng)陽(yáng)性和低滴度為主，僅有2例滴度大1∶640，以ANA的陽(yáng)性率最高，而AIH患者血清中ANA的陽(yáng)性率明顯高于丙型肝炎患者，且ANA以高滴度為主與文獻(xiàn)報(bào)道相似[7-8]。提示HCV感染可誘發(fā)丙型肝炎患者機(jī)體內(nèi)自身免疫反應(yīng)的產(chǎn)生。在不同臨床類(lèi)型丙型肝炎中，按急性丙型肝炎、慢性丙型肝炎、丙型肝炎后肝硬化、丙型肝炎后原發(fā)性肝癌順序，患者體內(nèi)的自身抗體總陽(yáng)性率也從13.04%、46.48%、68.18%、69.23%依次升高，慢性丙型肝炎明顯高于急性丙型肝炎(P<0.05)；丙型肝炎后肝硬化、丙型肝炎后原發(fā)性肝癌兩組總陽(yáng)性率均高于慢性丙型肝炎(P<0.05)，但兩者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

HCV可能通過(guò)以下方式激活了人體自身免疫系統(tǒng)：(1)HCV與細(xì)胞或者細(xì)胞之外具有相同或者相似的抗原，激發(fā)人體對(duì)病毒的應(yīng)答導(dǎo)致攻擊人體正常細(xì)胞。(2)通過(guò)使宿主細(xì)胞抗原暴露、釋放、改變或插入等誘發(fā)機(jī)體的自身免疫反應(yīng)。(3)HCV將基因可整合到宿主基因中，使肝細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，導(dǎo)致機(jī)體的免疫系統(tǒng)把自身的肝細(xì)胞誤認(rèn)為異物或自身抗原。(4)HCV將肝細(xì)胞膜抗原摻入其包膜中，誘導(dǎo)肝細(xì)胞膜抗原的反應(yīng)。以上因素導(dǎo)致患者的自身免疫功能被激活和放大，在臨床上表現(xiàn)為患者機(jī)體全身性自身免疫損傷：在肝內(nèi)加重患者肝功能的損害，甚至誘發(fā)自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化等自身免疫性肝?。辉诟瓮饪蓪?dǎo)致混合性冷球蛋白血癥、關(guān)節(jié)肌肉疼痛、唾液腺炎及其他部分結(jié)締組織和淋巴增生性疾病的發(fā)生[9]。急性感染期患者如未能在3個(gè)月內(nèi)治愈，則可發(fā)展為慢性丙型肝炎。患者體內(nèi)自身抗體攻擊破壞肝或其他自體細(xì)胞并導(dǎo)致?lián)p傷[10]。隨著病程延長(zhǎng)，這種自身免疫性損傷反復(fù)作用，其結(jié)果之一是肝臟結(jié)構(gòu)和功能受到損害,逐漸發(fā)展經(jīng)肝纖維化到肝硬化、肝細(xì)胞的癌變過(guò)程。因此自身免疫反應(yīng)在丙型肝炎向慢性肝炎、肝硬化、肝癌演變中起了重要的推進(jìn)作用。

丙型肝炎病毒是自身免疫反應(yīng)的誘發(fā)因素。本研究結(jié)果顯示，HCV-RNA陽(yáng)性患者其自身抗體陽(yáng)性率顯著高于HCV-RNA陰性患者(P<0.01)，自身抗體陽(yáng)性患者肝功能損害指標(biāo)高于陰性患者(P<0.01)，提示自身免疫反應(yīng)發(fā)生與HCV復(fù)制及肝功能損害程度顯著相關(guān)[11]，與王蓉等[12]報(bào)道一致。

干擾素聯(lián)合利巴韋林是目前丙型肝炎治療的標(biāo)準(zhǔn)方案[13]。此方案對(duì)低滴度自身抗體的HCV患者療效較好，但干擾素治療可能會(huì)誘發(fā)或加劇已存在的自身免疫反應(yīng)，特別是高滴度自身抗體的HCV患者[14-15]，可能因?yàn)闊o(wú)法忍受強(qiáng)烈的不良反應(yīng)而停用干擾素。本試驗(yàn)顯示，在經(jīng)過(guò)48周的慢性丙型肝炎患者治療結(jié)束后，生化和血清學(xué)完全應(yīng)答的患者體內(nèi)自身抗體陽(yáng)性率下降非常顯著(P<0.01)；而應(yīng)答不良患者自身抗體卻無(wú)明顯變化(P>0.05)。提示隨HCV水平降低或清除，患者體內(nèi)亢進(jìn)的自身免疫反應(yīng)得到了有效的抑制或終止。因此，HCV感染者自身抗體及病毒載量檢測(cè)，有助于了解患者自身免疫狀態(tài)及指導(dǎo)臨床選擇治療方案。

綜上所述，自身免疫反應(yīng)是丙型肝炎致病的一個(gè)重要方面，在丙型肝炎的發(fā)展、轉(zhuǎn)歸、免疫損傷及治療方面發(fā)揮了重要作用。

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溫先勇(1964-),副主任技師，本科，主要從事分子生物學(xué)、免疫學(xué)研究。

·經(jīng)驗(yàn)交流·doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.26.033

R446.62

B

1671-8348(2016)26-3704-04

2016-03-18

2016-05-26)