楊 熠，高 超，任麗娟，帕力達(dá)·亞森，馬曉洋，米克熱木·沙衣布扎提

（新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，新疆 烏魯木齊 830052）

硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合用藥的急性毒效應(yīng)評(píng)價(jià)

楊 熠，高 超，任麗娟，帕力達(dá)·亞森，馬曉洋，米克熱木·沙衣布扎提

（新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，新疆 烏魯木齊 830052）

通過(guò)對(duì)小鼠進(jìn)行硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合應(yīng)用的急性毒效應(yīng)評(píng)價(jià)，初步探討這2種抗菌藥聯(lián)合應(yīng)用的合理性，以期為進(jìn)一步評(píng)價(jià)其安全指標(biāo)提供可靠依據(jù)。經(jīng)查證，硫酸卡那霉素對(duì)小鼠腹腔注射的LD50為1 973.95 mg/kg，其95%可信限為1 969.22～1 978.71 mg/kg；氟苯尼考對(duì)小鼠腹腔注射的LD50為636.68 mg/kg，其95%可信限為538.5～735.1 mg/kg，該試驗(yàn)利用等效應(yīng)線(xiàn)圖法求出硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合用藥時(shí)的LD50。試驗(yàn)表明，硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合用藥中，硫酸卡那霉素對(duì)小鼠腹腔注射的LD50為510.51mg/kg，其95%可信限為437.52～595.66 mg/kg；氟苯尼考對(duì)小鼠腹腔注射的LD50為765.60 mg/kg，其95%可信限為656.15～893.31 mg/kg。結(jié)果顯示，硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合應(yīng)用后的LD50劑量直線(xiàn)交點(diǎn)落在95%可信限上限之外，即這2種抗菌藥的聯(lián)合用藥產(chǎn)生毒效應(yīng)頡頏，初步認(rèn)為聯(lián)合使用具有一定的合理性與可靠性。

半數(shù)致死量；聯(lián)合用藥；硫酸卡那霉素：氟苯尼考

聯(lián)合用藥（drug combination）是指為了達(dá)到治療目的而采用的2種或2種以上藥物同時(shí)或先后應(yīng)用。因用藥品種多，可以使藥物相互作用的概率增加，可能增強(qiáng)或降低藥物療效，甚至產(chǎn)生不良反應(yīng)。一般認(rèn)為，化學(xué)物質(zhì)的聯(lián)合作用可分為相加作用、協(xié)同作用、頡頏作用和獨(dú)立作用4種類(lèi)型。聯(lián)合用藥在臨床上的應(yīng)用相當(dāng)普遍，如鈣離子頡頏劑聯(lián)用ACEI或ARB，在控制血壓還有逆轉(zhuǎn)左心室肥厚和重構(gòu)、抗動(dòng)脈粥樣硬化、保護(hù)血管內(nèi)皮功能、減少蛋白尿等方面均具有優(yōu)勢(shì)［1］；抗高血壓藥物與非降壓藥物如他汀類(lèi)降脂藥物、阿司匹林等藥物合用，可使患者減少動(dòng)脈硬化、血管栓塞等高血壓并發(fā)癥，對(duì)高血壓治療極為有益［2］。聯(lián)合用藥所引起的藥物相互作用可能使藥物效應(yīng)改變，這種改變既可能是效應(yīng)強(qiáng)度的變化，也可能是作用性質(zhì)的改變，從而對(duì)藥物的有效性和安全性產(chǎn)生影響［3］。因此，聯(lián)合用藥的基本原則是：①選擇藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)上可以互補(bǔ)的藥物；②避免聯(lián)合應(yīng)用降壓原理相近的藥物；③聯(lián)合治療應(yīng)較單藥治療提高療效，加強(qiáng)靶器官保護(hù)；④減少、抵消不良反應(yīng)；⑤長(zhǎng)效和長(zhǎng)效藥物聯(lián)合應(yīng)用；⑥簡(jiǎn)化治療方法，盡可能降低費(fèi)用［4］。聯(lián)合用藥可以發(fā)揮藥物的協(xié)同抗菌作用以提高療效、延遲或減少耐藥菌的出現(xiàn)、擴(kuò)大抗菌范圍，并且聯(lián)合用藥可減少個(gè)別藥物的劑量，從而減少毒副反應(yīng)。各種污染物進(jìn)入環(huán)境中幾乎都是以混合物的形式存在的，引起的聯(lián)合毒性作用越來(lái)越受到人們的關(guān)注。

筆者通過(guò)收集大量用藥處方，發(fā)現(xiàn)在臨床上聯(lián)合應(yīng)用抗菌藥是應(yīng)對(duì)多重感染等疾病的常用方法。筆者查閱大量文獻(xiàn)后發(fā)現(xiàn)，在各種抗菌藥聯(lián)合用藥上，目前還沒(méi)有硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合用藥的研究。為了探討這2種抗菌藥聯(lián)合用藥時(shí)的效果，并對(duì)硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合用藥的安全性給予客觀評(píng)價(jià)，筆者分別找出2種抗菌藥的LD50和95%可信限范圍，即硫酸卡那霉素對(duì)小鼠腹腔注射的LD50為1 973.95 mg/kg，其95%可信限為1 969.22～1 978.71 mg/kg；氟苯尼考對(duì)小鼠腹腔注射的 LD50為 636.68 mg/kg，其 95%可信限為538.5～735.1 mg/kg，并利用等效應(yīng)線(xiàn)圖法求出聯(lián)合用藥時(shí)的LD50，然后對(duì)硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合用藥的急性毒效應(yīng)進(jìn)行了初步探討，以期為今后進(jìn)一步開(kāi)展這2種抗菌藥聯(lián)合用藥的研究提供可信依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)藥物：10 mL∶1.0 g硫酸卡那霉素注射液（上海騎驃動(dòng)物保健品有限公司），批號(hào)：（2011）090161211；10 mL∶1.5 g 氟苯尼考注射液（上海騎驃動(dòng)物保健品有限公司），批號(hào)：（2012）090162547。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康昆明系小鼠100只，雌雄各半，體重16～21 g，由新疆地方病學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.3 器材：PL2002電子天平［梅勒特—托利多儀器（上海）有限公司］。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 預(yù)試驗(yàn)：挑選健康昆明系小鼠50只，雌雄各25只，等分為2大組，各大組隨機(jī)等分為5小組，每小組5只，進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，硫酸卡那霉素和氟苯尼考腹腔注射，按估計(jì)劑量給藥，確定正式試驗(yàn)的劑量梯度。找出100%與0的半數(shù)致死量為試驗(yàn)的上下限劑量。

1.2.2 正式試驗(yàn)：挑選健康昆明系小鼠50只，于試驗(yàn)前饑餓6～10 h，雌雄各25只，等分為2大組，各大組隨機(jī)等分為5小組，每小組5只。

注射前先用蒸餾水將藥物配成公比為1.4的一定濃度的溶液，采用硫酸卡那霉素腹腔注射（5個(gè)劑量組：1 000、714、510、364、260 mg/kg）和氟苯尼考腹腔注射 （2個(gè)劑量組：1 500.00、1 071.42 mg/kg）方式進(jìn)行（見(jiàn)表 1、表 2）。

注射后3 h再喂食，但可以喂水。注射時(shí)如有立即死亡的，要另補(bǔ)小鼠。給藥后觀察記錄小鼠的死亡情況，觀察時(shí)間為1周，對(duì)死亡小鼠及時(shí)進(jìn)行大體剖解。

表1 硫酸卡那霉素用藥劑量

表2 氟苯尼考用藥劑量

1.2.3 數(shù)據(jù)處理：按照寇氏法［5］計(jì)算LD50及其95%可信限。1931年，Karber提出寇氏法，由于它計(jì)算復(fù)雜，當(dāng)時(shí)并沒(méi)有得到廣泛推廣。1963年，孫瑞元設(shè)計(jì)了合理的試驗(yàn)，改進(jìn)并發(fā)展了寇氏法，使其計(jì)算簡(jiǎn)化，即為L(zhǎng)D50的綜合計(jì)算方法，后稱(chēng)之為改良寇氏法［6］。

當(dāng)含有0和100%死亡率，各組動(dòng)物數(shù)相等，各劑量組的組距等比或劑量對(duì)數(shù)等差時(shí)，即用下述基本公式計(jì)算LD50：

當(dāng)不含0和100%死亡率時(shí)，即用下述公式計(jì)算LD50：

以上各式中，i為組距，即相鄰2組劑量對(duì)數(shù)劑量之差；Xm為最大劑量對(duì)數(shù)；P為各劑量組死亡率（死亡率均用小數(shù)表示）；Pm為最高死亡率；Pn為最低死亡率；q為各組劑量存活率，q=1-p；∑p為各劑量組死亡率之和；n為各組動(dòng)物數(shù)，此處單位為只；Sx50為 lg LD50的標(biāo)準(zhǔn)誤［7］。

等效應(yīng)線(xiàn)圖法以縱坐標(biāo)表示一種化學(xué)毒物的劑量范圍，以橫坐標(biāo)表示另一種化學(xué)毒物的劑量范圍，分別將2種化學(xué)毒物在縱坐標(biāo)與橫坐標(biāo)上的LD50值及95%可信限的上下限值連成一條直線(xiàn)，此后再以等效應(yīng)劑量通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)求出2個(gè)化學(xué)毒物混合后的LD50值，分別在相應(yīng)的坐標(biāo)線(xiàn)上找到各自劑量的位置，并由相應(yīng)劑量點(diǎn)作垂直線(xiàn)，視其交點(diǎn)所落的位置，進(jìn)行評(píng)定。如交點(diǎn)正好落在2個(gè)化學(xué)毒物的95%可信限的上下兩條線(xiàn)之間，表示為相加作用；如交點(diǎn)落到95%可信限以下，則表示為協(xié)同作用；如若交點(diǎn)落到95%可信限上限直線(xiàn)之外，則表示頡頏作用［8］。

表3 硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合用藥中硫酸卡那霉素的LD50測(cè)定結(jié)果

表4 硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合用藥中氟苯尼考的LD50測(cè)定結(jié)果

2 結(jié)果

經(jīng)數(shù)據(jù)處理可知，硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合用藥對(duì)小鼠腹腔注射的LD50分別為510.15 mg/kg（見(jiàn)表 3）和 765.60 mg/kg（見(jiàn)表 4）。評(píng)定硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合用藥的等效應(yīng)線(xiàn)圖見(jiàn)圖1。

圖1 硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合用藥的等效應(yīng)線(xiàn)圖

在進(jìn)行硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合用藥給小鼠腹腔注射時(shí)，小鼠發(fā)生死亡的時(shí)間與劑量濃度相關(guān)，濃度最高的劑量組注射后2～3 min便開(kāi)始有小鼠死亡，隨著濃度的遞減，死亡數(shù)量也呈遞減趨勢(shì)。再對(duì)死亡小鼠及時(shí)進(jìn)行大體剖解，發(fā)現(xiàn)腎臟為暗灰色，心臟為暗紅色，肝臟沒(méi)多大變化。耐藥抗過(guò)不死的小鼠采食和飲水均正常。

由表3和表4可以看出，硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合用藥中，硫酸卡那霉素對(duì)小鼠腹腔注射的LD50為 510.51 mg/kg，其 95%可信限為 437.52～595.66 mg/kg，氟苯尼考對(duì)小鼠腹腔注射的LD50為765.60 mg/kg，其 95%可信限為 656.15～893.31 mg/kg，硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合應(yīng)用后的LD50劑量直線(xiàn)交點(diǎn)所落的位置在95%可信限上限之外，即這2種抗生素的聯(lián)合用藥產(chǎn)生毒效應(yīng)頡頏。

3 討論

硫酸卡那霉素和氟苯尼考聯(lián)合用藥可產(chǎn)生毒效應(yīng)頡頏，初步認(rèn)為聯(lián)合用藥有一定的合理性。

聯(lián)合用藥會(huì)影響藥物在體內(nèi)的吸收，引起藥物或其代謝產(chǎn)物在血液或組織中濃度增加或減少［9］，改變藥物的藥代屬性，進(jìn)而影響藥效。隨著一些由于聯(lián)合用藥不當(dāng)所帶來(lái)的嚴(yán)重后果的出現(xiàn)，如醫(yī)療事故的發(fā)生、某些藥品的退市（米拉地爾、特非那定、阿司咪唑等）［10］，聯(lián)合用藥越來(lái)越受到人們的廣泛關(guān)注，在藥物發(fā)展過(guò)程中對(duì)于藥物間相互作用研究的需要也越來(lái)越迫切。如附子與甘草聯(lián)合應(yīng)用，甘草能夠顯著地降低附子中烏頭堿的含量，從而降低附子的毒副作用［11］；利托那韋和沙奎那韋聯(lián)合用藥能夠顯著提高它們抗病毒的作用［3］。聯(lián)合用藥可能通過(guò)影響與藥物吸收、分布、代謝、排泄等相關(guān)的酶、轉(zhuǎn)運(yùn)體等，以改變藥物的藥代屬性（生物利用度、分布特性等），調(diào)節(jié)體內(nèi)動(dòng)態(tài)藥效物質(zhì)的構(gòu)成，改變藥物的藥效（協(xié)同作用、頡頏作用、毒副作用等），從而對(duì)藥物的有效性、安全性產(chǎn)生影響［3］。

硫酸卡那霉素是臨床上常用的氨基糖甙類(lèi)抗生素［12］，對(duì)大多數(shù)革蘭陰性桿菌如大腸埃希菌、變形桿菌、沙門(mén)菌、多殺性巴氏桿菌等有強(qiáng)大抗菌作用，金黃色葡萄球菌和結(jié)核桿菌也對(duì)其敏感［13］。硫酸卡那霉素內(nèi)服可用于治療敏感菌所致的腸道感染；肌肉注射用于敏感菌所致的各種嚴(yán)重感染，如敗血癥、泌尿生殖道感染、呼吸道感染、皮膚和軟組織感染等［14］；生產(chǎn)中可用于緩解豬喘氣病癥狀［15］。氟苯尼考是動(dòng)物專(zhuān)用的氯霉素類(lèi)新型廣譜抗生素，它以甲砜基取代氯霉素分子結(jié)構(gòu)中的硝基，消除了不可逆性再生障礙性貧血的毒副作用；以氟基取代甲砜霉素分子結(jié)構(gòu)中α-甲基位上的羥基 （細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的主要結(jié)合位點(diǎn)）［16-17］，不僅抗菌活性增強(qiáng)，而且對(duì)大部分耐氯霉素和甲砜霉素的菌株仍有活性。氟苯尼考在畜禽細(xì)菌病防治上的研究應(yīng)用逐漸增多，但由于價(jià)格高、用量大，在一定程度上限制了其臨床應(yīng)用。

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Evaluation of the Acute Toxic Effects of Combined Medication of Kanamycin Sulfate with Florfenicol

YANG Yi，GAO Chao，REN Li-juan，Palida·Yasen，MA Xiao-yang，Mikeremu·Shayibuzhati
（Xinjiang Agricultural University，Urumqi 830052，China）

In order to evaluate the clinical rationality of combined medication of kanamycin sulfate with florfenicol and to provide solid basis for further assessment of its safety indicators,the acute toxic effects of the combined medication of these two drugs on mice was investigated.The reported LD50of kanamycin sulfate and florfenicol by intraperitoneal injection were 1 973.95 mg/kg and 636.68 mg/kg respectively,and the reported 95%confidence limit of kanamycin sulfate and florfenicol by intraperitoneal injection were 1 969.22-1 978.71 mg/kg and 538.5-735.1 mg/kg respectively.Based on these reported pharmacological parameters,the LD50of combined medication of kanamycin sulfate with florfenicol was determined by equivalent diagram method.The results showed that in the combined medication,the LD50of kanamycin sulfate by intraperitoneal injection in mice was 510.51 mg/kg and the 95%confidence limit ranged from 437.52 to 595.66 mg/kg;the LD50of florfenicol by intraperitoneal injection in mice was 765.60 mg/kg and the 95%confidence limit ranged from 656.15 to 893.31 mg/kg.Furthermore,the intersection of LD50dose line of combined medication of kanamycin sulfate and florfenicol fell outside the upper limit of 95%confidence limit,indicating that the combined medication of these two antibiotics produced antagonism of toxic effect.These results suggest the clinical rationality and reliability of combined medication of kanamycin sulfate with florfenicol.

LD50；drug combination；kanamycin sulfate；florfenicol

R969.2

A文章順序編號(hào)1672-5190（2016）03-0007-04

2016-03-14

項(xiàng)目來(lái)源：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（31460677）。

楊熠（1993—），女，碩士研究生，主要研究方向?yàn)楂F醫(yī)藥理與毒理。

米克熱木·沙衣布扎提（1960―），女，副教授，碩士，碩士生導(dǎo)師，主要研究方向?yàn)榛A(chǔ)獸醫(yī)學(xué)。

（責(zé)任編輯：慕宗杰）