時(shí)培文 ，白萬(wàn)富 ，周歡敏

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)生物制造重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古 呼和浩特010018）

牛咽部組織結(jié)構(gòu)的顯微觀察

時(shí)培文1，2，白萬(wàn)富1，2，周歡敏1，2

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)生物制造重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，內(nèi)蒙古 呼和浩特010018）

［目的］運(yùn)用組織學(xué)方法對(duì)3.5歲齡公牛咽部組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行了觀察與分析，以研究牛咽部不同部位顯微結(jié)構(gòu)。［方法］使用石蠟切片及HE和PAS染色在光學(xué)顯微鏡下觀察牛咽部不同部位組織形態(tài)及細(xì)胞類型。［結(jié)論］牛鼻咽部黏膜層屬于假?gòu)?fù)層柱狀纖毛上皮結(jié)構(gòu)，其間有大量的杯狀細(xì)胞，沒(méi)有角質(zhì)層；喉咽部和口咽部屬于復(fù)層扁平上皮結(jié)構(gòu)，其間沒(méi)有杯狀細(xì)胞，有角質(zhì)層。

牛；咽；HE染色；組織結(jié)構(gòu)

牛咽部是其呼吸道和消化道上端的共同通道，上寬下窄，前壁自上而下分別與鼻腔、口腔和喉相通，病原體容易通過(guò)呼吸及進(jìn)食引起感染，咽部引發(fā)的疾病很多，如慢性咽炎、由特異性病毒感染引起的咽結(jié)核、鼻咽癌、口蹄疫［1］等；咽壁分為黏膜層、肌層和外膜層，其中，黏膜層又分為黏膜上皮、固有層和黏膜下層，黏膜上皮由角質(zhì)層、顆粒層、棘層和基底層構(gòu)成［2］，其中，棘層與基底層被認(rèn)為是病毒復(fù)制的主要位點(diǎn)。咽部又分為鼻咽部、喉咽部和口咽部［3］，對(duì)咽部結(jié)構(gòu)的正確認(rèn)識(shí)，是研究咽部疾病發(fā)病機(jī)制的基礎(chǔ)［4］。目前，對(duì)牛咽部組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的顯微觀察研究較少，筆者從解剖及形態(tài)學(xué)角度研究牛鼻咽部、喉咽部及口咽部的組織形態(tài)及細(xì)胞類型，從而為牛咽部疾病的研究提供組織學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 實(shí)驗(yàn)用牛咽部組織樣品采自內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特市北亞清真屠宰場(chǎng)，分別采集鼻咽部、口咽部、喉咽部樣品若干，3.5歲齡，公牛。

1.2 制作石蠟切片 牛鼻咽部、口咽部、喉咽部組織樣品分別用4%多聚甲醛液固定，清水過(guò)夜沖洗，經(jīng)各級(jí)酒精脫水，二甲苯透明，浸蠟，包埋，連續(xù)切片，厚度5 μm，HE及PAS染色，光鏡觀察。

2 結(jié)果

牛咽部形態(tài)學(xué)分析：從牛鼻咽部、喉咽部、口咽部樣品中每隔5 μm取1張切片，每張切片取3個(gè)視野，光學(xué)顯微鏡下記錄各個(gè)部位的結(jié)構(gòu)，細(xì)胞的層數(shù)、上皮形態(tài)、上皮厚度及黏膜下腺體的形態(tài)等情況。

組織學(xué)觀察標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)細(xì)胞的形態(tài)、組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞的分化程度，牛咽部黏膜上皮分為2種類型的上皮。復(fù)層扁平上皮：主要分布于喉咽部及口咽部，細(xì)胞形狀不一，緊靠基底膜的細(xì)胞為矮柱狀；基底層以上為3～4層多邊形細(xì)胞，再向上為5～6層扁平或梭型細(xì)胞，上皮與深層結(jié)締組織的連接面凸凹不平，上皮外側(cè)有角質(zhì)層，游離面無(wú)纖毛存在。假?gòu)?fù)層柱狀纖毛上皮結(jié)構(gòu)：該種結(jié)構(gòu)主要分布于鼻咽部，由柱狀細(xì)胞、錐形細(xì)胞、梭形細(xì)胞和杯狀細(xì)胞構(gòu)成，其中以柱狀細(xì)胞最為常見(jiàn)，表面有大量的纖毛。這些細(xì)胞形態(tài)各異，高矮不一，細(xì)胞核的位置不在同一水平線上，但基底部均附著于基膜。

2.1 鼻咽部結(jié)構(gòu)顯微觀察 牛鼻咽部組織樣品經(jīng)HE及PAS染色后在光鏡下觀察，結(jié)果顯示，黏膜層屬于假?gòu)?fù)層柱狀纖毛上皮結(jié)構(gòu)（見(jiàn)圖1a），其中分布有多種細(xì)胞，柱狀細(xì)胞的表面具有纖毛，上層表面分布有大量明顯的高腳杯狀的杯狀細(xì)胞［5］，在PAS染色中，這些細(xì)胞被染成紅色［6］（見(jiàn)圖1b），沒(méi)有角質(zhì)層，沒(méi)有分泌腺，在黏膜層基底面與深部結(jié)締組織之間可見(jiàn)明顯的基膜。

圖1 光鏡下牛鼻咽HE染色（a）及PAS染色（b）結(jié)果（10×20）

2.2 口咽部結(jié)構(gòu)顯微觀察 牛鼻咽部組織樣品經(jīng)HE及PAS染色后在光鏡下觀察，結(jié)果顯示，黏膜層屬于復(fù)層扁平上皮結(jié)構(gòu) （見(jiàn)圖2a），細(xì)胞形態(tài)不一，沒(méi)有杯狀細(xì)胞，緊靠基膜的一層基底細(xì)胞排列緊密，為矮柱狀，往上為梭形細(xì)胞，淺層為幾層扁平細(xì)胞，淺層細(xì)胞比基底層細(xì)胞大，從基底層到淺層細(xì)胞核質(zhì)比逐漸降低，黏膜層的最外部為一層角化的復(fù)層扁平上皮，在黏膜層中間分布有分泌腺，黏膜層與深部結(jié)締組織連接凸凹不平。

圖2 光鏡下牛喉咽HE染色結(jié)果（a）及?？谘蔋E染色結(jié)果（b）（10×20）

2.3 喉咽部結(jié)構(gòu)顯微觀察 牛喉咽部組織樣品經(jīng)HE及PAS染色后在光鏡下觀察，結(jié)構(gòu)與口咽部相似（見(jiàn)圖2b），都為復(fù)層扁平上皮結(jié)構(gòu)，沒(méi)有杯狀細(xì)胞，角質(zhì)層比口咽部厚，黏膜層基底面與深部結(jié)締組織之間沒(méi)有明顯的基膜，喉咽部和口咽部的黏膜層比鼻咽部厚。

3 討論

該實(shí)驗(yàn)觀察了牛咽部細(xì)胞的類型及形態(tài)分布。研究結(jié)果表明，牛鼻咽部黏膜層為假?gòu)?fù)層柱狀纖毛上皮結(jié)構(gòu)，在黏膜層外側(cè)分布有大量杯狀細(xì)胞，杯狀細(xì)胞是黏膜上皮中的黏液分泌細(xì)胞，黏蛋白分泌后，與水結(jié)合形成黏液，有潤(rùn)滑和保護(hù)作用，在鼻咽部中的大量杯狀細(xì)胞可以防止鼻咽部黏膜層受到損傷［7］。

在高倍鏡下可以看到喉咽部和口咽部黏膜層淺層細(xì)胞為扁平梭型，在HE染色下細(xì)胞核被染成藍(lán)色，黏膜層厚度大于鼻咽部，喉咽部及口咽部在形態(tài)上差別不大，黏膜層均為復(fù)層扁平上皮結(jié)構(gòu)，該種結(jié)構(gòu)具有較強(qiáng)的再生修復(fù)能力，對(duì)摩擦和損傷的耐受力較強(qiáng)。在鼻咽部黏膜層外層未觀察到角質(zhì)層，口咽部和喉咽部黏膜層外層有明顯的角質(zhì)層，并且喉咽部的角質(zhì)層比口咽部的角質(zhì)層厚，口咽部和喉咽部的角質(zhì)層能抵御外界摩擦、防止液體外滲和化學(xué)物質(zhì)滲入，能夠有效保護(hù)內(nèi)部的黏膜層、肌層及外膜層細(xì)胞。

在酒精逐級(jí)脫水過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)鼻咽部脫水時(shí)間少于口咽部與喉咽部，透明時(shí)間也少于口咽部與喉咽部，透明時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)使包埋在石蠟塊中的組織變脆，在后期切片過(guò)程中會(huì)難以得到完整的組織切片，在以后制作牛鼻咽部石蠟切片過(guò)程中應(yīng)注意酒精逐級(jí)脫水時(shí)間與二甲苯透明時(shí)間。

該研究運(yùn)用組織學(xué)方法研究了牛咽部的組織形態(tài)及細(xì)胞類型，為牛咽部疾病的研究提供了組織學(xué)依據(jù)。

［1］高閃電，獨(dú)軍政，周建華，等.口蹄疫病毒受體研究進(jìn)展［J］.生物技術(shù)通報(bào)，2007（3）：67-71.

［2］劉斌.組織學(xué)與胚胎學(xué)［M］.北京：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2005：30-32.

［3］孟運(yùn)蓮.現(xiàn)代組織學(xué)與細(xì)胞學(xué)技術(shù)［M］.武漢：武漢大學(xué)出版社，2004：27-28.

［4］陳茂懷，宗永生.鼻咽假?gòu)?fù)層纖毛柱狀上皮核的形態(tài)定量學(xué)研究［J］.中華腫瘤雜志，1992，11（2）：87-89.

［5］史玉蘭，段相林.杯狀細(xì)胞的研究進(jìn)展［J］.解剖科學(xué)進(jìn)展，2001，7（4）：358-361.

［6］GRANT T D，SPECIAN R D.Proliferation of goblet cell and vacuolated cells in the rabbit distal coicn［J］.Arat Rec，1998，252（1）：41.

［7］張新民，宗永生，張汝逢，等.鼻咽柱狀上皮中的細(xì)胞類型［J］.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，1986，2（2）：1-3.

（責(zé)任編輯：趙景娣）

Microscopic Observation of the Tissue Structure of Bovine Pharynx

SHI Pei-wen，BAI Wan-fu，ZHOU Huan-min
（1.College of Life Sciences，Inner Mongolia Agricultural University，Hohhot 010018，China；2.Inner Mongolia Biological Manufacturing Key Laboratory，Hohhot 010018，China）

In order to study the microstructure of different parts of the bovine pharynx,the histological structure of pharyngeal tissues of a 3.5-year-old bull was histologically observed.The bull pharynx tissue was collected and was used to prepare paraffin sections.The paraffin sections were subsequently stained using HE staining and PAS staining method to observe the tissue morphology and cell types of different parts of pharynx.Bovine nasopharynx mucosa layer belonged to pseudostratified columnar ciliated epithelium structure,among which,there were a large number of goblet cells but no cuticle;laryngopharynx and oropharynx belonged to stratified squamous epithelium structure,among which,cuticle was observed but goblet cells were absent.

bovine；pharynx；HE staining；histological structure

S858.232.16；Q954.5

A文章順序編號(hào)：1672-5190（2016）02-0005-021，21，21，2

2016-01-19

時(shí)培文（1990—），男，碩士研究生，主要研究方向?yàn)樯飳W(xué)與生物技術(shù)。

周歡敏（1959—），男，教授，博士生導(dǎo)師，主要研究方向?yàn)樯飳W(xué)與生物技術(shù)。