高曉娟，朱寧云，回世洋

（1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)2013級(jí)碩士研究生，遼寧 沈陽(yáng) 110032；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110032）

清亮飲對(duì)兔玻璃體積血中IL-6、TNF-α表達(dá)的影響

高曉娟1，朱寧云2，回世洋2

（1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)2013級(jí)碩士研究生，遼寧 沈陽(yáng) 110032；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110032）

目的：觀察清亮飲對(duì)兔玻璃體積血中IL-6、TNF-α表達(dá)的影響.方法：將40只實(shí)驗(yàn)兔隨機(jī)分為4組，A組10只為空白對(duì)照組，其余30只成功制造玻璃體積血模型后隨機(jī)分成3組各10只，B組為模型組，C組為中藥（清亮飲）組，D組為西藥（安妥碘）組。成功造模后于給藥4周及8周分別行玻璃體積血分級(jí)，各組治療8周后分別檢測(cè)玻璃體TNF-α、IL-6含量。結(jié)果：給藥8周后 C、D兩組玻璃體積血較前明顯減輕（P＜0.05），和A、B組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；B、 C、D三組中TNF-α、IL-6含量較A組明顯升高（P＜0.05），C組TNF-α、IL-6含量低于B、D組，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：清亮飲可促進(jìn)兔玻璃體積血中IL-6、TNF-α的吸收，對(duì)玻璃體積血后的視網(wǎng)膜具有保護(hù)作用。

玻璃體積血；兔模型；清亮飲；白介素-6 ；腫瘤壞死因子-α

玻璃體積血（vitreous hemorrhage）是眼外傷或多種視網(wǎng)膜血管性疾病的常見(jiàn)并發(fā)癥，因玻璃體內(nèi)無(wú)血管，代謝緩慢，積血后很難吸收，后期可表現(xiàn)為視網(wǎng)膜表面和玻璃體內(nèi)膜形成及過(guò)度增殖和纖維化， 導(dǎo)致增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變 （proliferative vitreoretinopa-thy， PVR）等嚴(yán)重并發(fā)癥［1-2］。目前主要用玻璃體切割、抗凝、止血、超聲波等方法治療，效果并不理想，多年來(lái)我們根據(jù)中醫(yī)辨證論治及臨床經(jīng)驗(yàn)，自擬中藥方清亮飲治療玻璃體積血取得了滿意療效。我們通過(guò)檢測(cè)兔玻璃體積血中IL-6、TNF-α含量，觀察清亮飲對(duì)促進(jìn)玻璃體積血的吸收作用及機(jī)制，總結(jié)如下。

1　材料與方法

1.1材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。健康純種日本大耳白兔40只，由沈陽(yáng)藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，兔齡2～3個(gè)月，雌雄各半，體質(zhì)量1.5～2kg，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，濕度適宜，動(dòng)物分籠開(kāi)架，保持通風(fēng)，自由攝食飲水。經(jīng)檢眼鏡、裂隙燈顯微鏡檢查眼前段及眼底均無(wú)明顯異常。

藥物。清亮飲組成為熟地、山藥、玄參、天花粉、黨參、黃芪、茺蔚子、白茅根，每劑藥煎好后濃縮至100mL放冰箱冷藏備用，藥物由遼寧省中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑科經(jīng)水煮醇沉濃縮為1.0g/mL。氯霉素滴眼液（8mL∶20mg），普羅碘銨注射液（安妥碘） 1支0.4g/2mL，復(fù)方托吡卡胺滴眼液（美多麗）1支10mL，1%丁卡因、氯胺酮、戊巴比妥鈉溶液等。

1.2方法

動(dòng)物造模與分組。檢眼鏡、裂隙燈顯微鏡檢查眼前段及眼底均無(wú)明顯異常。造模前給予0.25%氯霉素滴眼液消炎3天，并將40只兔編號(hào)，隨機(jī)抽取10只為A組即空白對(duì)照組。其余30只造模：造模前生理鹽水清潔結(jié)膜囊，氯胺酮1mL/kg肌注麻醉或30g/L戊巴比妥鈉溶液（30mg/kg）作靜脈麻醉，美多麗充分散瞳，1%丁卡因滴眼行結(jié)膜表面麻醉，局部消毒后用1mL一次性注射器從兔耳緣靜脈取血0.5mL備用；迅速于距角鞏膜緣3mm處，經(jīng)瞳孔直視下用7號(hào)針向著球心垂直刺入玻璃體腔，抽取玻璃體0.2mL后再注入自體血0.2mL，立即拔出針頭，輕壓針孔1min，點(diǎn)氯霉素滴眼液2滴。造模后3天繼續(xù)氯霉素滴眼液、美多麗滴眼液滴眼。24h后觀察眼底，對(duì)玻璃體積血進(jìn)行分級(jí)，確認(rèn)造模成功后再隨機(jī)分成3組，分別為B、C、D組。B組為模型組，C組為中藥（清亮飲）組，D組為西藥（安妥碘）組。

給藥方法。A、B組不給藥。C、D組造模24h后開(kāi)始給藥，C組予清亮飲，按6mL/kg灌胃，每日2次。D組予安妥碘肌肉注射，每次0.125g，每日1次。

指標(biāo)檢測(cè)。各組治療4周后觀察眼底行玻璃體積血分級(jí)，先以1% 阿托品滴眼散瞳，然后用檢眼鏡檢查并按Forrester 五級(jí)分類法記錄積血變化［3］。Ⅰ級(jí)為玻璃體完全不透明；Ⅱ級(jí)為有輕微光反射，但觀察不清眼底；Ⅲ級(jí)為可見(jiàn)部分眼底；Ⅳ級(jí)為玻璃體中央透明，周圍見(jiàn)少量不透明物，大部分眼底清楚；Ⅴ級(jí)為清晰玻璃體，眼底清晰可見(jiàn)。治療8周后，觀察眼底行玻璃體積血分級(jí)后收集玻璃體及眼球壁標(biāo)本， 玻璃體積血分級(jí)方法同上。從玻璃體組織中檢測(cè)TNF-α、IL-6含量。抽出玻璃體液0.5mL予5000r/min離心5min后，立即貯存于-70℃待統(tǒng)一檢測(cè)，TNF-α、IL-6采用放射免疫分析方法。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較用單因素方差分析，組間兩兩比較用最小顯著差（LSD）法，等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

各組給藥4周玻璃體積血程度分級(jí)比較見(jiàn)表1。

表1　各組給藥4周玻璃體積血程度分級(jí)比較

各組給藥8周玻璃體積血程度分級(jí)比較見(jiàn)表2。

表2　各組給藥8周玻璃體積血程度分級(jí)比較

各組給藥8周TNF-α、IL-6含量比較見(jiàn)表3

表3　各組給藥8周TNF-α、IL-6比較（）

表3　各組給藥8周TNF-α、IL-6比較（）

注：與空白組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與西藥組比較，cP＜0.05。

組別眼數(shù)T N F -α（n g / m L） I L -6（p g / m L）A（空白組）2 0 1 . 6 0 1 ± 0 . 4 9 1 1 6 0 . 0 3 ± 3 2 . 9 7 B（模型組）2 0 2 . 8 6 6 ± 0 . 4 2 2a2 9 0 . 6 9 ± 3 1 . 0 5aC（中藥組）2 0 2 . 2 6 3 ± 0 . 5 5 9abc2 0 0 . 4 3 ± 3 4 . 0 8abcD（西藥組）2 0 2 . 4 0 5 ± 0 . 4 7 4ab2 5 6 . 3 1 ± 4 1 . 4 5

由上表所示，B、C、D各組TNF-α、IL-6含量均較A組增高（P＜0.01），說(shuō)明玻璃體積血可導(dǎo)致炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-6的大量釋放，從而促使PVR的發(fā)生；C、D兩組TNF-α、IL-6含量均低于B組（P＜0.05），說(shuō)明清亮飲及安妥碘均可促進(jìn)炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-6的吸收，從而促進(jìn)玻璃體積血吸收而保護(hù)視網(wǎng)膜；C、D兩組間TNF-α、IL-6含量比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中C組TNF-α、IL-6降低更顯著，說(shuō)明清亮飲組對(duì)促進(jìn)兔玻璃體積血中TNF-α、IL-6的吸收優(yōu)于安妥碘組。將TNF-α、IL-6兩組數(shù)據(jù)行Pearson相關(guān)性分析，得出r=0.599，P＜0.05，提示玻璃體積血與炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-6的釋放呈正相關(guān)，二者協(xié)同促進(jìn)玻璃體積血中纖維增殖、機(jī)化，從而引發(fā)PVR。

3　討論

玻璃體積血是一種嚴(yán)重的玻璃體病變，病因復(fù)雜［4］，多因外傷和眼底血管病變引起，也可因全身疾病引起，大量的玻璃體積血可影響眼底的觀察，如果積血長(zhǎng)時(shí)間不吸收，會(huì)引起纖維增殖、機(jī)化膜形成，?？蓪?dǎo)致PVR的發(fā)生而致盲［5］，其中炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-6在PVR的發(fā)生、發(fā)展及演變中起重要作用［6］，Karthikeyan等也研究發(fā)現(xiàn)IL-6、TNF-α 等細(xì)胞因子在PVR發(fā)生的各時(shí)期均有不同程度的高表達(dá)，其與PVR的發(fā)生有相關(guān)性［7］。玻璃體內(nèi)TNF-α在PVR的啟動(dòng)和調(diào)控中起重要的作用，且IL-6可誘導(dǎo)PVR發(fā)生，在PVR初期起著免疫和炎癥反應(yīng)的放大作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示B、C、D各組兔模型在8周后玻璃體組織中TNF-α、IL-6的含量均明顯高于空白組，故促進(jìn)兔玻璃體積血中炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-6的吸收對(duì)玻璃體積血的治療及預(yù)后至關(guān)重要，清亮飲和安妥碘均可促進(jìn)TNF-α、IL-6的吸收，且清亮飲組促進(jìn)此二者吸收作用較安妥碘組顯著（P＜0.05），說(shuō)明清亮飲促進(jìn)玻璃體積血吸收及防治PVR發(fā)生效果顯著。

玻璃體積血在中醫(yī)古籍中早有認(rèn)識(shí)，在古典醫(yī)有“暴盲”、“云霧移睛”、“血灌瞳仁”、“目血灌瞳仁”、“血貫瞳神”、“血灌瞳人外障”等不同名稱?！妒?jì)總錄》謂：“目屬肝，肝受血而能視，則目之瞻視，必資血。茍因物損傷，致血脈散亂，則敗血侵睛，灌注瞳仁，害于瞻視，不早治或致喪明，故謂之血灌瞳仁?！薄蹲C治準(zhǔn)繩·血灌瞳神證》謂：”視瞳神不見(jiàn)其黑瑩，但見(jiàn)一點(diǎn)鮮紅，甚則紫濁色也，病至此亦甚危且急矣。”《銀海精微》謂：“血灌瞳人者，因毒血灌入金井瞳人水內(nèi)也，猶如水流入井中之狀，清濁相混，時(shí)痛澀，紅光滿目，視物蒙蒙，如隔絹看物，若云霧中然?！辈Ａw積血的治療，一要行，即活血利水祛瘀散結(jié)等法，是目前臨床上廣泛應(yīng)用的治療方法；二要養(yǎng)，即益氣滋陰養(yǎng)血等法，此法在臨床應(yīng)用比較局限，常因個(gè)人經(jīng)驗(yàn)不同斟酌應(yīng)用。清亮飲行而不傷氣，清熱祛瘀而不傷正。實(shí)驗(yàn)充分證實(shí)清亮飲治療玻璃體積血效果顯著。

［1］ 陶然，柯根杰.玻璃體積血成因分析及分期治療［J］.實(shí)用防 盲技術(shù)，2012，7（1）： 33-37.

［2］ 王建民，馬景學(xué)，葉存喜，等.非外傷性玻璃體大量積血的病因分析［J］.中國(guó)實(shí)用眼科雜志，2006（24）：100-103.

［3］ Forrester J V， Edger W， Millar W，et al. Enhancement of itreous clotly-sis by urokinase： made of action［J］. Exp Eye es，1982，34：895.

［4］ 羅文彬，游志鵬.玻璃體積血1263例病因分析［J］.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2014，22（4）： 66-70.

［5］ Goff MJ， Mcdonald HR，Johnson RN， et al. Causes and treatm ent of vitreous hemorrhage［J］. Compr Ophthalmol Update，2006，7（3）：97-111.

［6］ 劉蓓，鄭曰忠，趙秉水，等.增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變眼玻璃體液白細(xì)胞介素和腫瘤壞死因子的研究［J］. 中華眼底病雜志，2005，12（5）：327-328.

［7］ Karthikeyan B，Kalishwaralal K，Sheikpranbabu S，et al. Gold nanoparticles downregulate VEGF-and IL-1beta-induced cell proliferation through Src kinase in retinal pigment epithelial cells［J］.Exp Eye Res，2010，91（5）：769-778.

Objective：To observe the effect of Qingliangyin on the expression of IL-6， TNF-α of vitreous hemorrhage in rabbits. Method： 40 rabbits were randomly divided into 4 groups. 10 rabbits were group A （blank control group） while the remaining 30 rabbits after the successful production of vitreous hemorrhage were randomly divided into 3 groups， 10 rabbits in each group，group B the model group， group C Chinese medicine group（Qingliangyin group）， group D western medicine group（Prolonium iodide group）. It was detected in each group respectively after 8 weeks treatment that the content of TNF-α， IL-6 in vitreous. Result：After 8 weeks of administration， vitreous hemorrhage was significantly reduced in group C and group D compared with that of pretreatment（P＜0.05）and compared with that in group A and group B （P＜0.05）. The content of TNF-α， IL-6 in group B，group C and group D was significantly higher than that in group A （P＜0.05）. The content of TNF-α， IL-6 in the group C was less than that in group B and group D （P＜0.05）. The difference among groups was statistically significant （P＜0.05）. CONCLUSION： Qingliangyin could promote the absorption of IL-6，TNF-αin vitreous hemorrhage and has protective effect on retina of vitreous hemorrhage of rabbits.

Vitreous hemorrhage；Qingliangyin；Interleukin- 6 （ IL- 6） ，Tumor necrosis factor-α

R289.5

B

1004-2814（2016）02-0105-02

2015-08-15

沈陽(yáng)市科技局，沈陽(yáng)市科技創(chuàng)新專項(xiàng)資金-應(yīng)用基礎(chǔ)研究專項(xiàng)項(xiàng)目（F13-316-1-50）

朱寧云