馬震川， 馬躍峰， 孔冉冉， 孫良璋， 喬 哲, 李少民

(西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院胸外科，西安 710004；*通訊作者，E-mail：li51487@163.com)

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OGT在食管癌中的表達及其與臨床預(yù)后的關(guān)系

馬震川， 馬躍峰， 孔冉冉， 孫良璋， 喬 哲, 李少民

(西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院胸外科，西安 710004；*通訊作者，E-mail：li51487@163.com)

目的 探討O-GIcNAc轉(zhuǎn)移酶(O-GicNAc transferase，OGT)在食管癌組織中的表達情況及其與預(yù)后的關(guān)系。 方法 收集66例食管癌組織標(biāo)本及其對應(yīng)癌旁組織標(biāo)本，利用免疫組化法測定OGT蛋白的表達，并與患者的臨床資料相結(jié)合。比較OGT表達與年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化和TNM分期之間的關(guān)系，并結(jié)合隨訪資料分析OGT表達和臨床預(yù)后的關(guān)系。 結(jié)果 66個腫瘤標(biāo)本中，51例(77.27%)陽性表達，15例(22.73%)陰性表達。癌旁正常組織中OGT陽性表達率為21.21%(14/66)。OGT的表達還與TNM分期、病理分化相關(guān)(P<0.001),與年齡、性別和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)。OGT陽性表達和陰性表達食管癌患者的3年生存率分別為43.7%和64.2%，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.003)。 結(jié)論 OGT可能被用作預(yù)測食管癌預(yù)后的良好指標(biāo)。

食管癌； OGT； 預(yù)后

食管癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，赫捷院士于2016年1月在CACancerJClin雜志上發(fā)表的《2015中國癌癥統(tǒng)計數(shù)據(jù)》顯示食管癌位于我國癌癥發(fā)病率排行榜第三位[1]。因此對食管癌發(fā)生發(fā)展機制的深入研究是早期診斷和治療食管癌、提高患者生存率的關(guān)鍵。O-GIcNAc 轉(zhuǎn)移酶(O-GIcNAc transferase，OGT)是調(diào)控氧連接的氮乙酰葡糖胺(O-GIcNAc)的重要蛋白，O-GIcNAc可以介導(dǎo)細胞漿和細胞核蛋白質(zhì)絲氨酸和蘇氨酸上的動態(tài)、可逆的翻譯后修飾，是一種磷酸化修飾[2]。本文旨在研究OGT蛋白在食管癌組織中的表達，并分析 OGT的表達與食管癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，評估 OGT作為食管癌的一種新型預(yù)后標(biāo)志物的潛力。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院胸外科2011-01～2013-12的66 例食管癌組織，并配對正常食管黏膜組織(距離病灶>5 cm，經(jīng)病理證實無腫瘤細胞浸潤)作為對照，所取標(biāo)本均由病理學(xué)證實為食管鱗狀細胞癌。66名病患中男性41例，女性35例，年齡40-80歲，平均年齡(54.24±7.41)歲；所有病患術(shù)中、術(shù)前均未接受放、化療及免疫治療，患者對實驗內(nèi)容均知情同意，并該研究獲得西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)學(xué)倫理委員會同意。

1.2 采用免疫組化檢測OGT表達

常規(guī)玻片脫蠟、水化；抗原修復(fù)：按試劑盒說明書進行操作,60 ℃脫蠟60 min；石蠟切片脫蠟水化；30 ml/L H2O2。室溫10 min以滅活內(nèi)源性酶；98 ℃微波抗原15 min；切片浸于30 ml/L H2O2中，室溫下滅活過氧化物酶10 min；一抗(1∶100稀釋)4 ℃孵育過夜，設(shè)置PBS代替一抗性做陰對照組；聚合HRP標(biāo)記二抗37 ℃孵育30 min；DAB顯色5 min；蘇木素復(fù)染2 min；組織切片依次經(jīng)過梯度酒精(70%,80%，95%，100%)脫水，二甲苯透明化，中性樹脂封片。

1.3 結(jié)果的判讀

免疫組化染色結(jié)果由西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院兩個未接觸過患者臨床病理資料的病理科醫(yī)生以雙盲法分別進行評估。染色強度具體標(biāo)準(zhǔn)如下：-(陰性)，+(弱黃色)，++(黃色或深黃)和+++(褐色或深褐色)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 18.0進行處理。采用檢驗OGT在食管黏膜組織中陽性表達率的差異；采用Kaplan-Meier方法進行生存分析，并采用Log-rank檢驗比較兩組生存率；P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 食管癌組織和癌旁正常組織中OGT蛋白表達

運用免疫組化(SP法)檢測66例食管癌組織和對應(yīng)癌旁正常組織中OGT的陽性表達,可見棕黃色為陽性染色，OGT的陽性染色主要定位于細胞核，在胞質(zhì)中也有少量陽性表達(見圖1)。免疫組化檢測結(jié)果顯示，在食管癌組織中，OGT的陽性表達率為77.27%(51/66)，而癌旁正常組織OGT的陽性表達率為21.21%(14/66)，兩者比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

A.食管癌組織陽性表達 B.癌旁組織陰性表達 圖1 免疫組化顯示OGT蛋白在食管癌組織和癌旁組織中的表達 (×200)Figure 1 The expression of OGT of esophageal cancer tissue and paracancerous tissue by immunohistochemistry (×200)

2.2 OGT的陽性表達率與臨床病理特征的關(guān)系

食管癌組織中OGT在高分化癌的陽性表達為70.0%(14/20)，在中低分化癌的陽性表達為80.4%(37/46)，兩者間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。OGT陽性表達與TNM分期有關(guān)，在不同TNM分期間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)：Ⅰ期65.0%(13/20)，Ⅱ期76.0%(19/25)，Ⅲ期86.7%(13/15)，Ⅳ期100.0%(6/6)。OGT表達量在不同性別、不同年齡和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，見表2)。

表1 OGT表達與臨床病理特征的關(guān)系例(%)

Table 1 Relationship between OGT expression and clinicopathological features cases(%)

臨床病 理參數(shù) nOGT陽性陰性χ2P性別0.7210.132 男4132(78.0)9(22.0) 女2519(76.0)6(24.0)年齡(歲)2.430.261 <602721(77.8)6(22.2) ≥603930(76.9)9(23.1)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移0.9340.351 有2822(78.6)6(21.4) 無3829(76.3)9(23.7)腫瘤分化19.250.000 高分化2014(70.0)6(30.0) 中、低分化4637(80.4)9(19.6)TNM分期14.410.000 Ⅰ2013(65.0)7(35.0) Ⅱ2519(76.0)6(24.0) Ⅲ1513(86.7)2(13.3) Ⅳ6 6(100.0)0(0.0)

2.3 OGT表達與食管癌患者生存時間的關(guān)系

為了說明OGT與食管癌預(yù)后的關(guān)系，我們對基于Kaplan-Meier對66例患者進行生存分析，結(jié)果顯示：OGT陽性表達和陰性表達食管癌患者的3年生存率分別為43.7%和64.2%，兩者間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.13，P=0.003，見圖2)。

圖2 食管癌組織中OGT表達陽性組和陰性組的生存曲線圖Figure 2 The postoperative survival curves of esophageal cancer patients with positive or negative OGT expression

多因素分析顯示，腫瘤分化(P=0.006)、TNM分期(P<0.001)和OGT陽性表達(P<0.001)是食管癌患者總生存期的獨立預(yù)后因素(見表2)。

表2 食管癌患者總生存期多因素Cox回歸分析

Table 2 Survival analysis of 66 esophageal cancer patients by Log-rank

因素 陽性率[例(%)]χ2dfP腫瘤分化6.33210.006 高分化14(70.0) 中和低分化37(80.4)TNM分期15.57330.000 Ⅰ13(65.0) Ⅱ19(76.0) Ⅲ13(86.7) Ⅳ6(100.0)OGT表達14.53210.000 陽性51(77.3) 陰性15(22.7)

3 討論

OGT基因位于X染色體上的Xq13.1區(qū)域，同時存在于細胞核和細胞質(zhì)中，細胞核中豐度較高[3,4]。O-GIcNAc糖基化需要兩個酶的參與：β-N-乙酞氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶(OGT)和β-N-乙酞氨基葡萄糖普酶(OGA)。其中OGT負責(zé)O-GIcNAc的添加，OGA負責(zé)O-GIcNAc的移除[5]。腫瘤細胞利用葡萄糖的速率顯著增加，而O-GIcNAc修飾水平則可以調(diào)控進入細胞的葡萄糖濃度。O-GIcNAc糖基化可以影響腫瘤細胞的增殖、糖酵解途徑和磷酸戊糖代謝途徑[6]。多種癌基因和抑癌基因參與調(diào)控O-GIcNAc糖基化修飾，如P53、c-Myc、FOXO和CREB1等[7,8]。研究表明，OGT在乳腺癌[9]、結(jié)腸癌[10]、甲狀腺癌[11]、前列腺癌[12]等惡性腫瘤中高表達。OGT的高表達不但與腫瘤的增殖有關(guān)，而且與腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在肝癌患者中，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的患者OGT水平明顯升高，提示OGT與肝癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[13]。

本研究運用免疫組化方法檢測食管癌組織及癌旁組織中OGT蛋白的表達，結(jié)果提示OGT主要表達于食管癌細胞中，而在癌旁組織中主要呈陰性表達，這與OGT在多種類型腫瘤陽性表達相符合。此外，我們分析了OGT的表達與臨床病理特征的相關(guān)性，結(jié)果表明，OGT與病理分化和TNM分期密切相關(guān)。高分化鱗癌中陽性率明顯低于中低分化鱗癌，而食管鱗狀細胞癌分化程度越低，其惡性程度越大，這提示OGT在食管癌的分化、增殖中起重要作用。隨著TNM分期變晚，OGT陽性表達率逐漸增加，提示OGT在食管癌的侵襲、轉(zhuǎn)移中起重要作用。OGT陽性表達率與性別、年齡和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性。OGT陽性表達和陰性表達食管癌患者的3年生存率分別為43.7%和64.2%，這說明OGT的陽性表達提示食管癌的預(yù)后不良。多因素生存分析表明，腫瘤分化、TNM分期和OGT表達是食管癌患者總生存期的獨立預(yù)后因素。

綜上所述，OGT蛋白在食管癌中表達上調(diào)，與病理分化、TNM分期和預(yù)后密切相關(guān)。因此，OGT可作為判斷食管癌侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后的新靶點。

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Expression of OGT in esophageal cancer and its relationship with clinical outcome

MA Zhenchuan, MA Yuefeng, KONG Ranran, SUN Liangzhang, QIAO Zhe, LI Shaomin*(DepartmentofThoracicSurgery,SecondAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity,Xi’an710004,China;*Correspondingauthor,E-mail：li51487@163.com)

ObjectiveTo investigate the expression of O-GIcNAc transferase(OGT) in the esophageal cancer and its relationship with prognosis.MethodsEsophageal cancer tissues and the corresponding paracancerous tissues were collected from 66 esophageal cancer patients. The expression of OGT was measured by immunohistochemistry and the correlation between OGT expression and clinicopathological parameters and prognosis were analyzed.ResultsOf the 66 tumor specimens,51(77.27%) were positive and 15(22.73%) were negative. The positive rate of OGT was 21.21%(14/66) in paracancerous tissues. The overexpression of OGT was also positively associated with TNM stage and differentiation(P<0.001). However, it was not significantly associated with age, gender and lymph node metastasis(P>0.05). The 3-year survival rate in patients with high OGT expression was lower than that with low expression(43.7%vs64.2%,P=0.003).ConclusionOGT may be used as a novel biomarker for predicting the prognosis of esophageal cancer.

esophageal cancer; OGT； prognosis

陜西省科技攻關(guān)基金資助項目(2015SF058)

馬震川，男，1987-09生，碩士，住院醫(yī)師， E-mail:sxxa1316@sina.com

2016-04-28

R735.1

A

1007-6611(2016)09-0826-04

10.13753/j.issn.1007-6611.2016.09.010