成小莉，王美菊，王玙

（天水市動物疫病預(yù)防控制中心，甘肅天水 741000）

天水市2014～2015年羊小反芻獸疫免疫抗體檢測與分析

成小莉，王美菊，王玙

（天水市動物疫病預(yù)防控制中心，甘肅天水 741000）

目的：掌握天水市羊小反芻獸疫免疫抗體水平和效果；方法：采用阻斷ELISA方法，對2014～2015年采自85個養(yǎng)殖場（戶）的1 340份羊血清進(jìn)行PPR抗體檢測。結(jié)果：個體陽性率為79.25%，免疫合格養(yǎng)殖場（戶）72個，合格率為84.71%。檢測養(yǎng)殖場47個，場免疫合格率為91.49%，散養(yǎng)戶38個，散養(yǎng)戶免疫合格率為74.36%。結(jié)論：場戶群體和個體免疫抗體合格率均達(dá)到農(nóng)業(yè)部要求70%以上的標(biāo)準(zhǔn)要求。

小反芻獸疫（PPR）；阻斷ELISA；抗體檢測

小反芻獸疫（PPR）是由小反芻獸疫病毒引起的小反芻獸的一種急性病毒性傳染病，以發(fā)熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征。世界動物衛(wèi)生組織將其列為A類動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。1993年，該病在中東和南亞出現(xiàn)，2003年在印度和尼泊爾爆發(fā)流行，全年有29個國家官方報告發(fā)生PPR疫情，其中亞洲國家11個。截止到2007年12月，全球累計有39個國家（地區(qū)）報告存在PPR疫情，其中16個為亞洲國家（地區(qū)）。2007年，我國西藏首次發(fā)現(xiàn)并確診PPR疫情。據(jù)農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局疫情公布數(shù)據(jù)顯示，2013年12月～2014年5月，全國先后有21個省市爆發(fā)PPR疫情。我省古浪縣于2014年1月發(fā)生一起羊疫情，死亡111只，撲殺951只羊，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。面對嚴(yán)峻的周邊疫情形勢，天水市小反芻獸疫免疫計劃對全市重點地區(qū)飼養(yǎng)的羊只實施了疫苗強(qiáng)制免疫，實行每年兩次集中免疫，每月一次補(bǔ)針免疫。為了掌握和評價天水市PPR免疫效果，筆者采集血清樣品進(jìn)行了抗體監(jiān)測，現(xiàn)將檢測結(jié)果報告如下。

1　材料與方法

1.1樣品來源

血清樣品采自全市進(jìn)行過PPR弱毒疫苗免疫且免疫時間在1月以上的85個養(yǎng)殖場戶（47個規(guī)模場、38個散養(yǎng)戶）。

1.2樣品采集時間

2014年11月140份、2015年2月900份、2015年5月108份、2015年11月192份，共計1340份（養(yǎng)殖場1156份，散養(yǎng)戶184份）。

1.3疫苗

新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)的小反芻獸疫活疫苗，疫苗批號為：2014052-1和2015023-1。

1.4檢測試劑

中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心國家外來動物疫病診斷中心生產(chǎn)的小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，批號為201418和201504。

1.5試驗方法

用阻斷ELISA抗體檢測試劑盒說明書進(jìn)行檢測。

1.5.1加樣在A1和B1孔中加入陽性血清50μL/孔，在C1和D1孔中加入陰性血清50μL/孔，在E1和F1孔中加入稀釋液50μL/孔；在其他樣品孔中加入稀釋液25μL/孔，在所有樣品孔中加入分別對應(yīng)的待檢血清25μL/孔。

1.5.2溫育37℃孵育60min，冼板4次，最后一次拍干。

1.5.3加酶結(jié)合物按1∶5倍稀釋酶標(biāo)單抗，每孔加50μL/孔，37℃孵育30 min；冼板4次，最后一次拍干。

1.5.4加底物每孔加底物溶液50μL；室溫避光10～15 min。

1.5.5測OD值每孔加終止液50μL，用450 nm波長測定各孔OD450 nm值。

1.6結(jié)果判定

按如下公式計算阻斷率（PB）：

當(dāng)陽性對照阻斷率（PB）大于60，陰性對照阻斷率（PB）小于或等于40，試驗有效。計算待檢樣品阻斷率（PB），待檢樣品阻斷率（PB）大于50判為陽性，小于等于50則判為陰性。統(tǒng)計陽性樣品數(shù)即為免疫合格數(shù)。

2　結(jié)果

2.1個體檢測結(jié)果

2014～2015年，共對85個場（戶）的血清樣品分4次進(jìn)行了PPR抗體檢測，檢測1 340份，陽性1 062份，陽性率為79.25%；其中規(guī)模場檢測1 156份，陽性935份，陽性率80.88%；散養(yǎng)戶184份，陽性127份，陽性率69.02%；結(jié)果詳見表1。

2.3各時間段檢測結(jié)果

2014年11月、2015年2月、2015年5月和2015年11月檢測份數(shù)依次分別140份、900份、108份和192份，陽性份數(shù)依次分別為123份、702份、79份和158份，陽性率依次分別為87.86%、78.00%、73.15%和82.29%。

3　結(jié)果分析與討論

表1　天水市羊小反芻獸疫免疫檢測結(jié)果統(tǒng)計

2.2場（戶）免疫合格情況

85個場（戶）中72個場（戶）免疫抗體陽性率在70%以上，合格率為84.71%。47個規(guī)模場中43個場抗體陽性率在70%以上，合格率為91.49%；38戶散養(yǎng)戶中29戶抗體陽性率在70%以上，合格率為74.36%；結(jié)果詳見表2。

表　天水市規(guī)模場和散養(yǎng)戶羊群體免疫合格結(jié)果統(tǒng)計

檢測結(jié)果顯示，85個養(yǎng)殖場（戶）的1 340份樣品個體免疫抗體合格率為79.25%，場（戶）群體小反芻獸疫免疫抗體合格率為74.36%，均達(dá)到農(nóng)業(yè)部要求70%以上的標(biāo)準(zhǔn)要求。說明免疫效果良好，能較好地起到保護(hù)作用。

規(guī)模場免疫抗體合格率明顯高于散養(yǎng)戶。本次共檢測規(guī)模場47個，43個規(guī)模場抗體陽性率達(dá)到70%以上，合格率為91.49%；檢測散養(yǎng)戶38戶，29戶抗體陽性率在70%以上，合格率為74.36%；散養(yǎng)戶群體合格率雖然達(dá)標(biāo)，但僅為74.36%，處于中低保護(hù)水平，存在不能完全抵抗病毒感染的風(fēng)險。規(guī)模場合格率高可能與飼養(yǎng)管理和日常補(bǔ)免工作到位有關(guān)，而散養(yǎng)戶合格率低與養(yǎng)殖比較分散，日常補(bǔ)免工作難以到位，飼養(yǎng)管理措施跟不上有關(guān)。

從監(jiān)測的四個時間段分析，4次檢測結(jié)果變化沒有規(guī)律性。分析原因，可能和采樣方法有一定關(guān)系。本試驗中，各時間段采樣并不是固定于同一場戶或同群羊，由于不同羊群的個體差異，可能造成檢測結(jié)果的波動。

4　小結(jié)

檢測發(fā)現(xiàn)，雖然被檢測場戶的免疫抗體水平達(dá)到了比較理想的免疫效果，降低了疫情傳入天水市的風(fēng)險，但也反映出免疫中的薄弱環(huán)節(jié)，散養(yǎng)戶的防疫應(yīng)該引起足夠的重視。血清學(xué)抗體監(jiān)測無法區(qū)分免疫抗體和感染抗體，只能測出有沒有抗體或抗體效價的高低。因此，為更好地做好全市小反芻獸疫防控工作，要切實加強(qiáng)檢疫監(jiān)管和流行病學(xué)調(diào)查，綜合評估天水市小反芻獸疫疫情風(fēng)險；完善應(yīng)急機(jī)制，規(guī)范應(yīng)急程序，充實應(yīng)急物資儲備，做好各項應(yīng)急準(zhǔn)備工作；發(fā)現(xiàn)疫情或檢出陽性病例，立即采取應(yīng)急處置措施。爭取到2020年實現(xiàn)全市退出免疫的目標(biāo)。

［本文獲甘肅省首屆獸醫(yī)系統(tǒng)征文比賽二等獎］

（編輯：趙鵬飛）

S858.26

B

1006-799X（2016）17-0005-02

成小莉（1967-），女，甘肅秦安人，高級獸醫(yī)師，主要從事動物疫病防治工作。