河北中醫(yī)學(xué)院河北省中藥配方顆粒工程技術(shù)研究中心

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方 藥 研 究

白芍配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高研究*

河北中醫(yī)學(xué)院河北省中藥配方顆粒工程技術(shù)研究中心

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提要目的：通過定性鑒別和定量分析研究，提高白芍配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制。方法：采用薄層色譜方法以白芍對照藥材作為對照，對白芍配方顆粒進(jìn)行多信息定性鑒別；利用高效液相色譜法同時(shí)測定芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷含量，增加含測控制指標(biāo)。結(jié)果：薄層鑒別中，白芍配方顆粒供試品色譜與白芍對照藥材色譜相應(yīng)位置顯相同顏色的主斑點(diǎn)；含量測定中，芍藥苷在0.068～0.678 μg范圍內(nèi)，呈線性關(guān)系( r2=0.999 8)；以測定的峰面積為縱坐標(biāo)，芍藥內(nèi)酯苷在0.068～0.676 μg范圍內(nèi)，呈線性關(guān)系(r2=0.999 8)，線性關(guān)系良好；平均回收率分別為99.35%和101.53%(n=6)準(zhǔn)確度良好。結(jié)論：本方法可行，重復(fù)性良好，完善和提高了白芍配方顆粒的質(zhì)量控制。

白芍配方顆粒；全息薄層色譜；芍藥苷；芍藥內(nèi)酯苷；高效液相色譜法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

白芍配方顆粒為符合炮制規(guī)范白芍飲片(毛莨科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall.的干燥根)經(jīng)過提取、濃縮、干燥和制粒等現(xiàn)代制藥技術(shù)加工所得，作為傳統(tǒng)中藥飲片的有益補(bǔ)充，被應(yīng)用于臨床。目前在全國范圍內(nèi)各生產(chǎn)企業(yè)皆用其內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行中藥配方顆粒的質(zhì)量控制，白芍配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對芍藥苷單一指標(biāo)進(jìn)行了鑒別和含量測定。2015年12月食品藥品監(jiān)管總局發(fā)布《中藥配方顆粒管理辦法(征求意見稿)》公告，未來監(jiān)管部門將逐步放開中藥配方顆粒生產(chǎn)市場，中藥配方顆粒在臨床的應(yīng)用越來越廣泛。《中藥配方顆粒管理辦法(征求意見稿)》要求應(yīng)體現(xiàn)多成份和整體質(zhì)量控制，因此進(jìn)一步完善和提高白芍配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)很有意義。本研究按照2015版《中國藥典》一部，參考有關(guān)的文獻(xiàn)[1-3]，以白芍對照藥材為對照，采用薄層指紋色譜方法對白芍配方顆粒進(jìn)行多信息的定性鑒別；基于高效液相色譜法同條件同時(shí)測定白芍配方顆粒中的芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷活性成分，保證了配方顆粒對中藥材信息傳承控制，提高了白芍配方顆粒質(zhì)量控制水平。

1　儀器與試藥

1.1儀器高效液相色譜儀：島津LC-15C液相色譜儀，SPD-15C 型紫外檢測器，SIL-10AF自動(dòng)進(jìn)樣器、CTO-15C柱溫箱、島津高效液相色譜LC工作站；電子分析天平：TB-215、BSA2245-CW(賽多利斯)；硅膠G板(青島海洋化工廠)；乙腈為色譜純、水為純化水，其他試劑均為分析純。

1.2試藥芍藥苷購自中國藥品生物制品檢定所(批號：110736-201438)；芍藥內(nèi)酯苷購自上海源葉生物科技有限公司(批號：20120816)；白芍對照藥材(批號：120905-201109)購自中國食品藥品檢定研究院；白芍配方顆粒(批號：14070911、14081921、14101511)由石家莊神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供。

2　方法與結(jié)果

2.1定性鑒別實(shí)驗(yàn)

2.1.1供試品溶液的制備：取白芍配方顆粒粉末適量，稱定0.5 g，加甲醇溶液3 mL溶解，超聲處理10 min，濾過，即得供試品溶液。

2.1.2對照藥材溶液的制備：取白芍對照藥材適量，稱定0.3 g，加甲醇3 mL，超聲處理10 min，濾過，作為對照藥材溶液。

2.1.3薄層色譜鑒別：按照《中國藥典》2015年版薄層色譜法(附錄IV B)試驗(yàn)方法，吸取供試品溶液和對照藥材溶液各5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，將三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸試液(40︰5︰10︰0.2)作為展開劑，展開8 cm，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱105℃至薄層板上斑點(diǎn)顯色清晰。

2.1.4鑒別結(jié)果：白芍配方顆粒供試品與白芍對照藥材在色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)。見圖1。

圖1薄層色譜鑒別結(jié)果

2.2含量測定

2.2.1對照品溶液的制備：取在80℃條件下干燥至恒重的對照品芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷約10 mg，精密稱定，分別放置于10 mL容量瓶中，分別加甲醇溶解至刻度，搖勻，得芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷對照品母液；精密量取芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷對照品母液0.3 mL，放置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得每1 mL含30 μg的芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷混合對照品溶液。

2.2.2供試品溶液制備：取供試品白芍配方顆粒粉末約0.1 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶，精密加入稀乙醇溶液50 mL，稱定重量，超聲30 min，取出，放冷；再次稱定重量，補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，即得。

2.2.3色譜條件：色譜柱, Diamosil C18柱(4.6×150 mm，5 μm)；流動(dòng)相, 乙腈-0.1%磷酸溶液(15︰85)；流速,1 mL/min；檢測波長，230 nm；柱溫, 40℃；理論板數(shù)按芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2.4專屬性試驗(yàn)：分別取供試品溶液、混合對照品溶液和空白溶劑，按照“2.2.3”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣采集。結(jié)果表明，混合對照品溶液和供試品溶液色譜中芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷保留時(shí)間一致，且陰性對照無干擾峰, 如圖2。

圖2白芍配方顆粒、混合對照品和空白試劑HPLC圖

2.2.5線性關(guān)系：精密吸取混合對照品溶液2、4、8、12、20 μL按“2.2.3”項(xiàng)色譜條件測定。測定的峰面積作為縱坐標(biāo)，以芍藥苷的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在0.068～0.678 μg范圍內(nèi)，呈線性關(guān)系，回歸方程為：Y=174 336X-119 111，r2=0.999 8；以測定的峰面積為縱坐標(biāo)，芍藥內(nèi)酯苷的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在0.068～0.676 μg范圍內(nèi)，呈線性關(guān)系，回歸方程為：Y=145 830X-107 146，r2=0.999 8，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3，芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷線性關(guān)系良好。

2.2.6精密度：精密吸取芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷混合對照品溶液10 μL，依照“2.2.3”項(xiàng)所述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷色譜峰面積RSD分別為0.40%和0.36%，小于2%，說明儀器精密度良好。

圖3對照品芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密稱取供試品白芍配方顆粒(批號：14101511)約0.1 g，按上述供試品溶液制備方法制備。精密吸取白芍配方顆粒供試品溶液10 μL，分別在0、2、4、8、12、18 h進(jìn)樣，按“2.2.3”項(xiàng)所述色譜條件分別進(jìn)樣測定，計(jì)算芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷峰面積RSD分別為1.88%和1.53%(n=6)，小于2%，結(jié)果表明白芍配方顆粒供試品溶液在18 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8重復(fù)性考察：精密稱取同一批供試品樣品(批號：14101511)6份，每份約0.1 g，按供試品溶液制備方法制備，精密吸取10 μL，依照“2.2.3”項(xiàng)所述色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算得供試品溶液芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷含量RSD分別為1.76%和1.83%(n=6)，小于2%，結(jié)果表明樣品測定重復(fù)性良好。

2.2.9準(zhǔn)確度考察：采用加樣回收法，按照對照品溶液制備方法分別得含芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷80%、100%和120%的樣品3份；按照供試品制備方法得同一批(批號：14101511)樣品9份，每份約0.1 g，精密稱定，精密加入一定量混合對照品，依照供試品溶液制備方法制備。依照“2.2.3”項(xiàng)所述色譜方法測定，芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷平均回收率分別為99.35%和101.53%(n=6)，RSD分別為1.09%和1.36%，小于2%，符合規(guī)定，方法準(zhǔn)確度良好。

2.2.103批樣品含量測定：采用上述色譜方法，對本品3批樣品芍藥苷含量為17.21、17.18、17.32 mg/mL，RSD值分別為1.79%、0.25%和0.18%；芍藥內(nèi)酯苷含量為26.68、26.48、26.91 mg/mL，RSD值分別為0.19%、1.38%和1.87%。3批配方顆粒芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷含量RSD值均小于2%，符合規(guī)定，含量測定結(jié)果可靠，本方法適用于芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷兩指標(biāo)同時(shí)測定。

3　討論

本研究依據(jù)《中國藥典》2015版一部中白芍的薄層鑒別方法，并參考有關(guān)文獻(xiàn)，[2]以白芍對照藥材代替芍藥苷對照品作為對照，更能體現(xiàn)和控制配方顆粒對白芍藥材的信息傳承；改進(jìn)展開條件，采用了白芍總苷有效部位指紋薄層色譜方法，不僅有芍藥苷紫色斑點(diǎn)，同時(shí)還有其他苷類信息，體現(xiàn)信息更加豐富；供試品色譜斑點(diǎn)清晰、分離度佳，重現(xiàn)性亦良好。本方法更好控制了白芍配方顆粒鑒別信息，進(jìn)一步保證了配方顆粒與藥材的一致性。

近期有關(guān)白芍現(xiàn)代研究表明，[4-6]芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷均為白芍的入血成分，是白芍發(fā)揮藥效的活性成分。同時(shí)，白芍總苷體內(nèi)代謝研究[6]表明芍藥苷在體內(nèi)可能部分轉(zhuǎn)化為芍藥內(nèi)酯苷。因此，芍藥內(nèi)酯苷也是白芍的重要活性成分，將芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷同時(shí)作為白芍配方顆粒的質(zhì)量控制指標(biāo)具有重要意義。本研究以藥典方法為基準(zhǔn)，采用液相色譜方法同條件同時(shí)測定了芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷兩個(gè)成份含量，將芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷同時(shí)作為含測指標(biāo)，加強(qiáng)了白芍配方顆粒的質(zhì)量控制。

本方法簡便、快捷、有效，很好體現(xiàn)目前質(zhì)量控制的新要求，從整體方面和多成份方面控制質(zhì)量，能夠提升白芍配方顆粒的質(zhì)量控制水平，保障配方顆粒白芍藥材信息的傳承。

[1]中國藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典[S]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2010. 68-69

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(2016-06-12收稿)

牛麗穎，女，教授，碩士研究生導(dǎo)師。

R284.2

A

1007-5615(2016)03-0046-03

*河北省高等學(xué)校科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目：No.ZD2015001；河北省中醫(yī)藥管理局資助項(xiàng)目：No.2015006；河北中醫(yī)學(xué)院青年基金項(xiàng)目：No.QN2015030

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