郭瑩瑩　霍姿含　王　震　劉　冰

(吉林大學白求恩第一醫(yī)院,長春130021)

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1 350例新生兒溶血三項試驗的血清學檢測分析

郭瑩瑩霍姿含王震①劉冰

(吉林大學白求恩第一醫(yī)院,長春130021)

目的：探討由母嬰血型不合引起的新生兒溶血病(HDN)的血型分布及其溶血三項試驗在HDN診斷中的價值。方法：對2014年1月到2016年1月臨床送檢的O型或Rh陰性的產婦臍帶血標本及高膽紅素血癥的新生兒血液標本用微柱凝膠檢測卡進行溶血三項試驗，并對結果進行統(tǒng)計學分析。結果：(1)1 350例標本中，母嬰血型不合者占918例，確診為HDN的有569例， 陽性率為62.0%。569例HDN三項試驗結果為：直抗試驗陽性率為27.9%(159/569)，游離抗體試驗陽性率為86.5%(492/569)，抗體釋放試驗均為陽性。其中直抗陰性+游離陽性+釋放陽性的組合與其他各組合相比有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。(2)918例血型不合標本中，ABO HDN陽性率為73.8%(551/747)，Rh HDN陽性率為10.5%(18/171)，兩者差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(3)747例ABO血型不合標本中，A型陽性率為80.0%(280/350)，B型陽性率為68.3%(271/397)，兩者差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(4)171例Rh血型不合標本中，Rh D陽性率為17.7%(14/79)，Rh E陽性率為6.8%(4/59)，Rh C陽性率為0(0/33)，三者差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論：抗體釋放試驗敏感度最高，是判定HDN最有力的證據(jù)。母嬰ABO 血型不合引起的HDN發(fā)生概率明顯高于Rh不合，A型血患兒發(fā)生HDN的概率明顯高于B型血患兒，Rh D不合引起的HDN發(fā)生概率明顯高于Rh E和Rh C。

新生兒溶血病； 直接抗人球蛋白試驗； 游離抗體試驗； 抗體釋放試驗

新生兒溶血病(Hemolytic disease of newborn,HDN)是指母嬰血型不合而引起的胎兒或新生兒的免疫性溶血性疾病。胎兒的紅細胞進入母體循環(huán)中，致使母體產生相應的IgG抗體，該類抗體通過胎盤作用于胎兒的紅細胞，使其產生不同程度的溶血現(xiàn)象。臨床表現(xiàn)為胎兒水腫、貧血、早產或死胎，新生兒黃疸、貧血 、 肝脾腫大、水腫、 核黃疸后遺癥等。在人類30多個血型系統(tǒng)中，多數(shù)血型系統(tǒng)都能引起HDN 。在我國最常見的是母嬰ABO血型系統(tǒng)不合引起，人群中HDN發(fā)病率為15.6%[1]。在國外Rh血型系統(tǒng)不合發(fā)病率較高，其他罕見血型系統(tǒng)不合少有報道[2]。因此，準確的圍產期HDN 監(jiān)測可為早期防治提供依據(jù)，對優(yōu)生優(yōu)育、提高嬰兒生存質量具有重要的現(xiàn)實意義 。

對HDN的早期診斷與防治，現(xiàn)已成為臨床研究的熱點。HDN實驗室血清學檢測在早期診斷中廣泛應用，為臨床預防和診治HDN的發(fā)病提供重要參考價值。HDN的血清學檢測主要采用“三項試驗”，即直抗試驗(直接抗人球蛋白試驗)、游離試驗(游離抗體試驗)和釋放試驗(抗體釋放試驗)。近幾年國內對于當?shù)豀DN血清學檢測報道也不少，但可能由于樣本量不夠多，或地區(qū)血型分布不一，所得出結論不一。針對長春地區(qū)患者量最大的醫(yī)院，本實驗室對近兩年產科和新生兒科送來的1 350例疑似HDN的母嬰血液標本進行了相關檢測與統(tǒng)計，結果報道如下。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1標本來源選擇2014年1月到2016年1月，吉林大學白求恩第一醫(yī)院產科和新生兒科的1 350例疑似HDN的標本。包括O型和Rh陰性產婦(年齡20～46歲、孕齡36～40周)的臍帶血，以及出生3 d內發(fā)生高膽紅素血癥的新生兒的血液標本。血樣取自母嬰雙方，用EDTA-K2抗凝全血2～5 ml，抽血后即時送檢，3 h內完成檢驗。

1.1.2主要試劑和儀器戴安娜微柱凝膠檢測卡包括ABO-Rh血型檢測卡和抗人球蛋白卡由北京斑珀斯公司提供，配套的WADiana專用離心機和專用微柱孵育器也由北京斑珀斯公司提供；ABO標準紅細胞和酸放散試劑盒購自長春博迅生物技術有限責任公司。

1.2方法

1.2.1血型血清學檢測參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[3]，采用微柱凝膠技術對血液標本進行血型血清學檢測[4]，如下：測定母親及患兒ABO血型和Rh(D、C和E)血型，并對母嬰血型不合的患兒進行直接抗球蛋白試驗、游離抗體試驗和抗體釋放試驗。其中，抗體釋放試驗采用酸放散試劑盒進行檢測。

1.2.2結果判讀紅細胞留在微柱上端或分布在凝膠中為試驗結果陽性，紅細胞沉降至微柱底部為試驗結果陰性。

1.3統(tǒng)計學處理采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理，率的比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1母嬰血型鑒定結果1 350例標本中，母嬰ABO血型均為O型、Rh血型為母陽性嬰陰性或兩者完全同型的，共計432例。母嬰血型不合者共計918例，有母O型、嬰A型或B型，或母Rh某抗原陰性嬰Rh相應抗原陽性。

2.2溶血三項試驗結果經(jīng)檢測，母嬰血型不合的918例標本中，HDN陽性結果為569例， 陽性率為62.0%。569例HDN三項試驗陽性結果為：直抗試驗陽性為159例，陽性率為27.9%；游離抗體試驗陽性為492例，陽性率為86.5%；放散抗體試驗均為陽性。三項試驗各種組合情況如表1。陽性率從高到低依次為游離+釋放陽性、直抗+游離+釋放陽性、單項釋放陽性、直抗+釋放陽性。其中游離+釋放的陽性率與各項差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.3HDN血型分布結果母嬰血型不合的918例標本中，ABO系統(tǒng)不合者有747例，HDN陽性結果占551例，陽性率達73.8%；Rh系統(tǒng)不合者有171例，HDN陽性結果占18例，陽性率達10.5%，見表2。ABO HDN與Rh HDN的陽性率有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。747例ABO系統(tǒng)不合標本中，A型有350例， HDN陽性占280例，陽性率達80.0%；B型有397例， HDN陽性占271例，陽性率達68.3%，見表3；A型和B型HDN陽性發(fā)生率有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。171例Rh系統(tǒng)不合標本中，Rh D占79例， HDN陽性占14例，陽性率達17.7%；Rh E有59例， HDN陽性占4例，陽性率達6.8%；Rh C有33例，均為HDN陰性，見表4。D、C、E陽性率有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。

表1569例HDN陽性的三項試驗組合情況

Tab.1569 cases of HDN positive combination of three trials

Directanti-globulintestFreeanti-bodytestAntibdyrelea-sedtestn(%)--+68(12.0)-++342(60.0)+++150(26.4)+-+9(1.6)

Note：+.Positive；-.Negative.

表2918例HDN結果比較

Tab.2Comparison of 918 HDN results

BloodgroupsystemTestcasesPositivecasesPositiverateABO74755173.80%Rh1711810.50%

表3747例ABO HDN結果比較

Tab.3Comparison of 747 ABO HDN results

BloodgroupTestcasesPositivecasesPositiverateA35028080.00%B39727168.30%

表4171例 Rh HDN結果比較

Tab.4Comparison of 171 Rh HDN results

BloodgroupTestcasesPositivecasesPositiverateRhD791417.70%RhE5946.80%RhC3300

3　討論

HDN 可由多種原因引起，以母嬰血型不合最為常見。其中ABO血型不合最常見，其次為Rh血型不合。國內文章大多報道ABO HDN，少有Rh HDN的概況。在本研究中，對ABO和Rh 血型系統(tǒng)均做檢測，得出ABO HDN陽性率73.8%遠遠高于Rh HDN陽性率10.5%。

HDN的發(fā)病與母親體內IgG血型免疫抗體種類和胎兒紅細胞表面抗原密切相關，只有IgG抗體可經(jīng)胎盤進入胎兒體內，引發(fā)溶血現(xiàn)象[5]。O型血人體內有IgG抗A和IgG抗B兩種抗體，ABO HDN多發(fā)生于懷有A型或B型胎兒的O型母親中，故臨床主要針對O型產婦和A型或B型嬰兒進行HDN檢測。自然界廣泛存在類A和類B，故ABO HDN多發(fā)生于第一胎。臨床上由抗-A 引起的HDN要比抗-B 常見[6]，由于胎兒紅細胞上的A位點(抗原決定簇)比B位點多，故A型HDN發(fā)病率比B型高[7]。本研究也發(fā)現(xiàn)，本地區(qū)A型HDN陽性率80%遠高于B型陽性率68.3%。與國內辛榮傳等[8]報道一致，在高膽紅素血癥新生兒中，A型血患兒發(fā)生HDN的概率明顯較B型血患兒高。

母嬰Rh血型系統(tǒng)不合是指母親為Rh抗原陰性、胎兒為Rh抗原陽性。Rh抗原存在于胎兒紅細胞膜上，其抗原數(shù)量隨著妊娠時間的延長而增加，其患病風險也隨之增高[9]。Rh HDN好發(fā)于多胎、多次輸血后的孕產婦。與ABO HDN相比，Rh HDN較少發(fā)生，但一旦發(fā)病，其溶血程度更為嚴重。Rh血型系統(tǒng)含有多種抗原，常見的有D、C、c、E和e，其中以D抗原的免疫原性最強，其溶血程度遠高于其他抗原[10]。在本研究中，對母嬰Rh血型的D、C和E三種抗原進行檢測。171例Rh系統(tǒng)不合標本中，Rh D引起的HDN陽性率17.7%遠高于Rh E陽性率6.8%，尚未發(fā)現(xiàn)Rh C不合引起的HDN。這與丁晶等[11]文獻中報道的Rh血型系統(tǒng)引起的HDN的比例一般為15%～20%，且D抗原在其發(fā)病總數(shù)中占多數(shù)相符。

HDN的確診依賴于溶血三項試驗包括直抗試驗、游離抗體試驗和抗體釋放試驗[12]。其中，直抗試驗是檢測新生兒的紅細胞是否已被母體IgG類抗體所致敏，在HDN診斷中有重要作用，陽性結果提示患兒紅細胞被抗體致敏， 陽性范圍提示發(fā)生溶血的相關程度[13]。但由于ABO HDN患兒紅細胞上抗體往往結合的很少，使直抗試驗常出現(xiàn)陰性的結果。在本研究中，直抗試驗陽性率僅占27.9%(159/569)得以印證。但在Rh HDN中，18例直抗試驗均為強陽性，足以說明Rh血型不合所致的HDN，其溶血程度更為嚴重，僅憑直抗試驗即可初步有效診斷Rh HDN。直接抗人球蛋白試驗陽性結果是區(qū)別ABO和Rh溶血病的重要標志[14]。

游離抗體試驗則檢測患兒血清中是否有IgG類抗體的存在，有助于觀察疾病的發(fā)展趨勢和治療。本研究中，游離試驗的陽性率高達86.5%(492/569)，說明大多檢測結果均為陽性。但HDN發(fā)病患兒的游離抗體也有部分檢測結果為陰性。這與母體IgG進入胎兒體內的量有關，如果進入量少吸附到紅細胞上，血漿中則無游離抗體，若有游離抗體，則提示病情嚴重。

在HDN的溶血三項試驗中，以抗體釋放試驗最為重要，是確診試驗[15]?？贵w釋放試驗是診斷ABO HDN最有力證據(jù)，陽性結果表明患兒紅細胞被母體IgG抗A(B)抗體所致敏[16]。本研究陽性率為100%(569/569)。統(tǒng)計三項試驗結果不同陰陽性組合發(fā)現(xiàn)，確診為ABO HDN的結果最常見的是直抗陰性、游離陽性和釋放陽性。確診為Rh HDN的結果為直抗、游離和釋放三項均呈陽性。也充分表明，Rh HDN一旦發(fā)病，其嚴重程度遠高于ABO HDN。

實驗室溶血三項試驗的血清學檢測為臨床上診斷新生兒溶血病提供了重要依據(jù)，此項試驗的開展和普及具有重要的臨床意義。對產科O型及Rh陰性產婦的臍帶血進行三項試驗的檢測，實現(xiàn)了早

期對HDN的篩查和預防。對高膽紅素血癥的新生兒進行三項試驗的檢測，可以快速實現(xiàn)對新生兒溶血病的確診，為患兒的治療爭取時間，提高治療效率，減少后遺癥的發(fā)生。

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[收稿2016-03-07修回2016-04-25]

(編輯張曉舟)

Analysis of three serological tests results of hemolytic disease of newborn in 1 350 cases

GUO Ying-Ying，HUO Zi-Han，WANG Zhen，LIU Bing.

The First Bethune Hospital of Jilin University,Changchun 130021，China

Objective:To explore blood type distribution of newborns hemolytic disease(HDN) caused by maternal and neonatal blood type incompatibility and analyze the value of hemolysis three trials in the diagnosis of HDN.Methods: Hemolysis three trials of type O or Rh negative maternal cord blood samples and hyperbilirubinemia of the newborn blood samples from January 2014 to 2016 were detected by micro-column gel test cards.Then the results were statistically analyzed.Results: (1) There were 918 cases of maternal and neonatal blood type incompatibility in all 1350 cases.569 cases were detected HDN positive with the rate of 62%(569/918).Among 569 cases,the positive rate of direct anti-globulin test,free antibody test and antibody released test were 27.9%(159/569),86.5%(492/569) and 100% respectively.There was statistical difference of the combination of direct anti-globulin test negative,free antibody test positive and antibody released test positive compared with other combinations(P<0.05).(2)There was statistical difference of HDN positive rate between ABO 73.8%(551/747) and Rh 10.5%(18/171)in 918 cases of blood type incompatibility.(3)There was statistical difference between A positive rate of 80%(280/350) and B positive rate of 68.3%(271/397) in 747 cases of ABO incompatibility.(4)There was statistical difference among RhD positive rate of 17.7%(14/79),RhE positive rate of 6.8%(4/59) and RhC positive rate of 0(0/33).Conclusion: Antibody released test was the most sensitive test in hemolysis three trials to diagnose HDN.The probability of HDN positive caused by maternal and neonatal ABO blood type incompatibility was significantly higher than Rh.The probability of HDN positive with type A newborns was significantly higher than type B.The probability of HDN positive caused by RhD blood type incompatibility was significantly higher than RhE and RhC.

Hemolytic disease of newborns;Direct anti-globulin test;Free antibody test;Antibody released test

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.09.025

郭瑩瑩(1984年-)，女，碩士，技師，主要從事輸血相容性檢測方面的研究。

及指導教師：劉冰(1962年-)，女，主任技師，主任，主要從事疑難血型鑒定及各項輸血相關檢測方面的研究。

R722.18

A

1000-484X(2016)09-1357-04

①吉林大學中日聯(lián)誼醫(yī)院,長春130000。