劉 薇，彭 誠，尚雷鵬，畢 潔，余純應(yīng)，李妙霞，霍家潤

（1.北京明正司法鑒定中心，北京100083；2.北京市公安局海淀分局刑偵支隊，北京100142）

訴訟與案例
Litigation and Case Report

家系性AMEL Y、DYS456、DYS576、DYS570同時缺失1例

劉 薇1，彭 誠2，尚雷鵬2，畢 潔1，余純應(yīng)1，李妙霞1，霍家潤1

（1.北京明正司法鑒定中心，北京100083；2.北京市公安局海淀分局刑偵支隊，北京100142）

法醫(yī)遺傳學；STR；Amelogenin；染色體；突變

1　案例

1.1簡要案情

某日，在某城中村附近的公園內(nèi)發(fā)生一起強奸案，嫌疑人逃逸，勘察人員隨即提取受害人陰道拭子進行精斑的檢驗，并提取受害人血樣作為對照。

1.2檢驗過程

檢材PSA試驗呈陽性，經(jīng)差異裂解法提取，用Identifiler Plus試劑盒（美國AB公司）在9700型擴增儀（美國AB公司）上進行復合擴增，PCR體系及條件按照試劑盒說明書，采用3130xl遺傳分析儀（美國AB公司）進行毛細管電泳檢測，用Gene Mapper ID V3.2軟件進行基因分析。檢驗結(jié)果表明，該分型AMEL基因座為X峰，RFU值與雜合子等位基因RFU值接近（見圖1，部分基因座省略）。該分型與受害人血樣的分型結(jié)果不符。經(jīng)重新提取并改用GoldeneyeTM20A試劑盒（北京基點認知生物有限公司）進行驗證，結(jié)果一致。隨后，用Y-filer及Y-filer Plus試劑盒（美國AB公司）進行Y-STR檢驗。Y-filer結(jié)果顯示DYS456、DYS458基因座丟失，Y-filer Plus結(jié)果顯示DYS456、DYS576、DYS570基因座丟失。用PowerPlex Y23（美國Promega公司）驗證，結(jié)果一致。用Goldeneye 17X試劑盒（北京基點認知生物有限公司）檢測，各基因座均為單峰。

圖1　AMEL X與相鄰基因座雜合子的峰高接近

參考NCBI最新Y染色體參考序列，重新設(shè)計DYS456、DYS570、DYS576和AMEL的PCR引物，將擴增產(chǎn)物分別延長至707bp、604bp、792bp、794bp后進行電泳檢測（見表 1），結(jié)果顯示在 DYS456、DYS570、DYS576和AMEL無電泳條帶，而對照男性的電泳結(jié)果正常。

表1　DYS456、DYS570、DYS576和AMEL的PCR引物序列

3　結(jié)果與討論

上述檢測結(jié)果證實現(xiàn)場檢材確系一男性個體所留。由于案發(fā)地位于城鄉(xiāng)結(jié)合部，人口復雜，為了縮小偵查范圍，偵查員對周圍城中村內(nèi)67戶不同父系的男性個體進行采血篩查，并進行Y-STR的檢驗，得到羅某義的Y-STR分型結(jié)果與現(xiàn)場檢材一致。經(jīng)查，羅某義的堂弟羅某洪有重大作案嫌疑。嫌疑人到案后對其血樣進行采集，經(jīng)比對，羅某洪的常染色體STR分型及Y-STR分型與現(xiàn)場檢材一致。至此，本案成功告破。

人牙釉質(zhì)蛋白基因（Amelogenin基因）檢測是法醫(yī)DNA性別鑒定的主要依據(jù)［1］，然而人牙釉質(zhì)蛋白基因突變或缺失的個體，常規(guī)的檢測手段往往容易造成性別誤判，甚至誤導偵查方向。通常情況下AMEL基因的分型是性別鑒定的有效手段，然而近年來AMEL基因缺失的案例在國內(nèi)外已有報道。陳愛萍等［2］研究表明中國人群AMEL基因的突變率為0.045%，且男性的AMEL基因突變率較女性高。AMEL基因的突變可以發(fā)生在X染色體或Y染色體，導致相應(yīng)的AMEL X或Y產(chǎn)物丟失。Shewale等［3］曾報道在7 000例男性個體中檢出3例AMEL X擴增產(chǎn)物缺失。Steinlechner等［4］在3萬名無關(guān)男性個體中檢出6例AMEL Y缺失的個體，國內(nèi)也有AMEL Y伴單個Y-STR基因座基因缺失的報道［5］。在實際檢案中，AMEL X缺失不至于影響性別的判斷，而AMEL Y缺失的個體往往容易造成性別的誤判，甚至誤導偵查方向。在檢驗這類個案時，通過檢測Y-STR有助于對AMEL Y缺失個體的性別判斷。

Y-STR位于Y染色體非重組區(qū)，為男性個體所特有的遺傳標記，與X染色體不發(fā)生重組，符合單倍體連鎖遺傳，父傳子、子傳孫，在排除突變的前提下，同一父系男性個體的Y-STR分型相同。因此，在家系排查中有著重要的價值。本案中，男性嫌疑人及其堂弟的AMEL Y基因發(fā)生了丟失，且Y-STR檢測結(jié)果中DYS456、DYS576和DYS570三個遺傳標記未檢出分型，反映出嫌疑人的重要父系特征，因此在本案中最大限度地縮小了偵查范圍，為偵查提供有效線索的同時，節(jié)約了辦案經(jīng)費和時間。

本案的檢測過程中除上述丟失的等位基因外，其余峰型良好，可以排除DNA模板質(zhì)量及擴增非特異性引起的丟失。而重新設(shè)計PCR引物后仍無法擴增出目標片段，表明本案中家系的AMEL Y和DYS456、DYS570、DYS576基因座丟失不是由于引物結(jié)合部位的點突變導致的。因此，考慮本案中的家系在Yp11.2發(fā)生了大片段的丟失。在NCBI參考序列中檢索相關(guān)基因座的物理位置后不難發(fā)現(xiàn)，丟失片段的范圍涵蓋了Y染色體短臂末端非重組區(qū)的起始部分，即從DYS456上游至DYS458上游引物結(jié)合部位附近的最少3.5Mb，其結(jié)果可以通過DNA測序的方法直接證實。

本案中的檢材經(jīng) Y-filer Plus試劑盒檢測DYS458基因座分型為23，而Y-filer試劑盒未檢出分型，這可能是由于兩種試劑盒在該基因座的引物設(shè)計存在細微差別，后者的引物結(jié)合部位存在點突變或位于上述缺失的片段內(nèi)，導致序列特異性引物無法同模板DNA結(jié)合，進而導致Y-filer試劑盒DYS458基因座擴增失敗，出現(xiàn)無效等位基因。由于AB公司這兩種試劑盒的引物設(shè)計未對外公開，這一機制有待進一步研究。

綜上，當試驗結(jié)果的性別判定與案情相?；蚯昂竺軙r，應(yīng)當考慮Amelogenin基因丟失的可能，這種結(jié)果與引物結(jié)合部位稀有性突變或性染色體上大片段的丟失有關(guān)，應(yīng)當重新設(shè)計引物進行檢驗，檢測X-STR、Y-STR亦有助于性別的判定。

［1］Balbuena，P García-Vázquez.A Rapid and Quantitative DNA Sex Test:Fluorescence-Based PCR Analysis of X-Y Homologous Gene Amelogenin［J］.BioTechniques，1993，（15）：637-641.

［2］陳愛萍，陳勇，王會品，等，中國人群Amelogenin基因的突變頻率和突變類型，中華醫(yī)學遺傳學雜志，2007（6）:615-619.

［3］Shewale J G，Richey S L，Sinha S K.Anomalous Amplification of the Amelogenin Locus Typed by AmpFLSTR［R］Profiler Plus［TM］Amplification Kit［EB/OL］.（2000-10-01）［2015-08-01］.http://go.galegroup.com/ps/anonymous？id=GALE| A137921528.

［4］Steinlechner M，Berger B，Niederstatter H，et al.Rare Failures in the Amelogenin Sex Test，Int legal Med，2002，（116）：117-120.

［5］陶曉嵐，聶笑聯(lián).家系性男性Y-Amelogenin及DYS458基因同時缺失1例［EB/OL］.（2011-03-29）［2011-03-29］.http: //www.legalmed.org/web/paper/73.htm.

（本文編輯：李成濤）

DF795.4

Bdoi:10.3969/j.issn.1671-2072.2016.05.017

1671-2072-（2016）05-0099-02

2015-09-10

劉薇（1989—），女，法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)DNA檢驗鑒定工作。E-mail:695152589@qq.com。