藍養(yǎng)金　鄔良賢　福建省龍巖市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測中心　364000

龍巖市地方優(yōu)良種禽原種場禽白血病p27抗原檢測與分析

藍養(yǎng)金鄔良賢福建省龍巖市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測中心364000

用酶聯(lián)免疫吸附試驗法對長汀河田雞原種場、武平象洞雞原種場、龍巖山麻鴨原種場共686份蛋清樣本及801份泄殖腔棉拭子進行禽白血病p27抗原檢測。結(jié)果為：龍巖山麻鴨的蛋清樣本和泄殖腔棉拭子均未檢出ALV核酸；雞蛋清樣本陽性率為12.8%（80/626），明顯高于泄殖腔棉拭子陽性率8.9%（66/741）；雞原種場180日齡蛋清樣本和泄殖腔棉拭子陽性率均最高，平均陽性率分別為15.0%和11.3%。表明：龍巖市境內(nèi)地方優(yōu)良雞原種場中有禽白血病感染現(xiàn)象。

禽白血病p27抗原ELISA檢測

禽白血病是由禽白血病病毒（Avian Leukosis Virus，ALV）和禽肉瘤病病毒（Avian Sarcoma Virus，ASV）引起的禽類多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱。在臨床上感染率很高且危害嚴(yán)重，到目前為止，還沒有合適的疫苗和有效的藥物加以對抗。p27是AL病毒群（A，B，C，D，E和J亞群）的主要群特異性抗原（gs），高度保守，因而p27抗原檢測是ALV抗原檢測的基礎(chǔ)。筆者選擇在龍巖市轄區(qū)內(nèi)的3個原種禽場：武平象洞雞某原種場、長汀河田雞某原種場和山麻鴨某原種場，采集同批不同日齡泄殖腔棉拭子801份，蛋清樣本686份，用禽白血病抗原試劑盒檢測ALV-p27抗原，了解在自然條件下龍巖市禽原種場ALV感染情況，現(xiàn)將初步檢測結(jié)果報告如下。

1　材料與方法

1.1檢測試劑和方法ALV-Ag（p27）檢測試劑盒為美國IDEXX公司生產(chǎn)，批號為：99-09254BK775，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

檢測方法：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）方法，嚴(yán)格按照試劑盒的操作步驟說明對采集的蛋清樣本及泄殖腔棉拭子樣本進行檢測。

1.2主要檢測儀器酶標(biāo)儀（北京普良，型號：DNM-9602）；洗板機（芬蘭雷勃Wellwash 4MK2）；微量移液器（德國Eppendorf）。

1.3樣品來源2014年在龍巖市3個原種禽場采集泄殖腔棉拭子801份、蛋清樣本686份。其中新羅山麻鴨原種場蛋清樣本60份、泄殖腔棉拭子60份，武平象洞雞原種場蛋清樣本317份、泄殖腔棉拭子360份，長汀河田雞原種場蛋清樣本309份、泄殖腔棉拭子381份。

2　檢測結(jié)果

2.1三個原種禽場禽白血病p27抗原檢測情況結(jié)果表明：龍巖市新羅山麻鴨原種場并未受到ALV感染，而本地優(yōu)良雞種均受到ALV感染。武平象洞雞原種場蛋清樣本陽性率13.9%（44/317）、泄殖腔棉拭子樣本陽性率9.7%（35/360），均高于長汀河田雞原種場蛋清樣本陽性率11.7%（36/309）、泄殖腔棉拭子樣本陽性率8.1%（31/381）；同一雞品種蛋清樣本陽性率明顯高于泄殖腔棉拭子。見表1。

2.2武平象洞雞原種場及長汀河田雞原種場不同日齡雞群禽白血病p27抗原檢測情況結(jié)果表明：象洞雞原種場、河田雞原種場的蛋清樣本陽性率和泄殖腔棉拭子樣本陽性率均隨著日齡增加而增加，于180日齡達到峰值后逐漸下降。見表2。

3　分析與討論

1）山麻鴨原種場未檢出ALV-p27抗原陽性，表明鴨場未感染ALV，符合禽白血病自然情況下只感染雞的結(jié)果［1］。

2）龍巖市境內(nèi)地方品種雞群中有禽白血病感染現(xiàn)象。ALV是自然存在、引進外來雞種污染或是使用被ALV污染的疫苗所致，有待進一步調(diào)查核實。

3）通過對泄殖腔棉拭子樣本和蛋清樣本ALV-p27抗原檢測發(fā)現(xiàn)，蛋清樣本檢出率明顯高于泄殖腔棉拭子樣本檢出率。表明在執(zhí)行ALV監(jiān)測和凈化計劃時，應(yīng)以蛋清樣本的檢測結(jié)果進行判定較為科學(xué)可靠。

4）象洞雞原種場、河田雞原種場的蛋清樣本陽性率和泄殖腔棉拭子樣本陽性率均隨著日齡增加而增加，于180日齡達到陽性檢出率峰值后逐漸下降。印證在臨床上ALV的危害是漸進發(fā)展過程，以垂直傳播為主、水平傳播為次，在達到性成熟時期多表現(xiàn)臨床發(fā)病，而后因高低不等的發(fā)病死亡淘汰后逐漸歸于平穩(wěn)。

5）本次ALV病原核酸的檢測結(jié)論與境內(nèi)武平縣部分雞場禽白血病J亞群抗體和A、B亞群抗體的檢測結(jié)論具有較高的關(guān)聯(lián)性［2-4］。

6）本次調(diào)查受品種、場數(shù)及范圍的限制，檢測項目較單一，樣本的采集分類等均還有待改進和完善，龍巖市優(yōu)良地方雞種原種場的ALV凈化工作仍任重道遠。

表1　三個原種場ALV-p27抗原檢測結(jié)果

［1］趙振華.禽白血?。跰］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006.

［2］劉輝蘭.武平縣部分雞場禽白血病J亞群抗體和A、B亞群抗體的檢測結(jié)果分析報告［J］.福建畜牧獸醫(yī)，2014，36（5）：14-15.

［3］甘孟候.中國禽病學(xué)［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2000.

［4］卡爾尼克B W.禽病學(xué)［M］.高福，蘇敬良，譯.10版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1999.

Detection and analysis of p27 antigen of avian leucosisvirus in local original breeding poultry farm of Longyan city

Lan Yangjin Wu Liangxian
（Longyan quality inspection of agricultural products monitoring center，Longyan 364000）

In order to investigate the positive rate for antigen P27 of avian leukosis virus（ALV）by ELISA in egg whites（n=686）and cloacal swabs（n=801）from three breeding poultry farms，including Changting Hetian chicken farm，Wuping Xiangdong chicken farm and Longyan sheldrake farm.The results showed that，in Longyan sheldrake farm，the ALV-p27 antigen was not detected in egg whites and cloacal swabs.In other two breeder farms，the ALV-p27 antigen positive rates of egg whites were 12.8%（80/626）.It was significant higher than that of cloaca swabs 8.9%（66/741）.In a 180-day chincken flock，the positive rates of ALV-p27 in egg whites and cloacal swabs were highest，the average positive rates were 15.0%and 11.3%，respectively.The results suggested that breeder farms are at risk of ALV infection in longyan city.

Avian leukosis p27 antigen ELISA

表2　原種場不同日齡雞群ALV-p27抗原檢測結(jié)果

A

1003-4331（2016）05-0024-02