王楠楠　劉福定　白英龍　賈麗紅　翟玲玲　魏　薇

1.中國醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院兒少衛(wèi)生與婦幼保健學(xué)教研室，遼寧沈陽110122；2.鄂東醫(yī)療集團黃石市中心醫(yī)院質(zhì)量管理部，湖北黃石435000

豬油與植物黃油對脂肪組織IL-6表達影響的比較

王楠楠1#劉福定2#白英龍1▲賈麗紅1翟玲玲1魏薇1

1.中國醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院兒少衛(wèi)生與婦幼保健學(xué)教研室，遼寧沈陽110122；2.鄂東醫(yī)療集團黃石市中心醫(yī)院質(zhì)量管理部，湖北黃石435000

目的探究豬油與植物黃油飲食對不同部位脂肪組織IL-6表達水平的影響。方法49只Wistar雄性大鼠，按體重隨機分成3組（對照組、豬油組、植物黃油組），分別給予相應(yīng)飼料喂養(yǎng)8周，結(jié)束時按體重增加量將實驗組大鼠分為肥胖傾向組（豬油傾向組、植物黃油傾向組）與肥胖抵抗組（豬油抵抗組、植物黃油抵抗組）。比較各組大鼠體重增重、體脂肪系數(shù)以及不同部位脂肪組織IL-6表達水平。結(jié)果豬油和植物黃油高脂飼料致肥胖傾向大鼠體重增重明顯（P＜0.01）；豬油和植物黃油高脂飼料都使大鼠腎周脂肪蓄積顯著多于對照組（均P＜0.01）；除豬油抵抗組外，其余各組大鼠附睪周脂肪蓄積均較對照組明顯增多（均P＜0.01）；植物黃油喂養(yǎng)的大鼠皮下脂肪組織IL-6表達水平較對照組顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），除植物黃油抵抗組外，其余各組大鼠附睪周脂肪組織IL-6表達增多，與對照組比較，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01），兩種高脂飼料均可致實驗大鼠腎周脂肪組織IL-6表達水平升高（均P＜0.01）。結(jié)論豬油/植物黃油都可以導(dǎo)致脂肪組織炎性狀態(tài)的形成；與豬油相比，植物黃油能引起皮下、內(nèi)臟（附睪周、腎周）等部位脂肪組織IL-6生成增多。

豬油；植物黃油；脂肪組織；白介素-6

［Abstract］Objective To compare the effects of lard and margarine on the expression of IL-6 in different adipose tissue depots.Methods 49 male Wistar rats were assigned randomly to three groups：control（CON）group，lard group and margarine group.After given the appropriate diet for eight weeks，all rats of experimental groups were divided into the obesity prone group（L-OP，M-OP）and obesity resistant group（L-OR，M-OR）at the end of the experiment according to the weight gain.Body weight gain，body fat coefficients and the expression of IL-6 in adipose tissue were measured. Results Body weight gain of the obesity prone（OP）groups were significantly improved after given high fat diet of lard/ margarine（P<0.01）.Compared with CON group，the retroperitoneal adipose tissue weights of lard and margarine group were elevated（P<0.01）；the epididymal adipose tissue weights of L-OP，M-OP and M-OR groups were significantly improved besides L-OR group respectively（P<0.01）.Compared with CON group，IL-6 expressions were increased significantly in margarine groups in subcutaneous adipose tissue（P<0.05 or P<0.01），and which were significantly higher in epididymal adipose tissue of L-OR，L-OP and M-OP groups（P<0.01），but no significant difference was discerned in the M-OR group respectively；more IL-6 proteins were expressed in retroperitoneal adipose tissue induced by lard and margarine high fat chow than normal chow respectively（P<0.01）.Conclusion Lard/margarine can induce inflammation in adipose tissues.Comparing with lard，margarine can lead to IL-6 expression increasing in many depots such as subcutaneous and visceral（retroperitoneal and epididymal）fat tissues.

［Key words］Lard；Margarine；Adipose tissue；IL-6

脂肪組織是體內(nèi)的重要器官，除了負責(zé)能量的儲存與代謝，還具有強大內(nèi)分泌的功能［1-3］。近來研究發(fā)現(xiàn)其分泌的白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）不僅在免疫調(diào)節(jié)方面作用廣泛，還與胰島素活性［4］、胰島素抵抗［5-6］及其并發(fā)癥［7］等方面存在著密切聯(lián)系。飲食是肥胖發(fā)生的重要危險因素，脂肪酸的構(gòu)成也對肥胖的發(fā)生發(fā)展起到關(guān)鍵作用［8-9］。豬油是我國傳統(tǒng)飲食的重要組成部分，隨著飲食西化的不斷推進，植物黃油在日常飲食中也越來越常見。以往人們多關(guān)注高脂飲食對血糖血脂的影響，但對其致脂肪組織炎性反應(yīng)的研究甚少。本研究采用含豬油或植物黃油的高脂飼料喂養(yǎng)實驗大鼠，制造肥胖動物模型，觀察不同部位脂肪組織IL-6表達水平的差異，探究不同類型高脂膳食對脂肪組織炎性反應(yīng)的影響。

1　材料與方法

1.1主要試劑與儀器

Anti-IL-6抗體（Abcam公司，美國），GAPDH抗體（Cell Signaling公司，美國），山羊抗小鼠-HRP抗體（北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司，中國），瓊脂糖免疫沉淀（Santa Cruz公司，美國），ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒（Millpore公司，美國）等。多功能成像儀（美國Azure公司），半干式轉(zhuǎn)膜儀（美國Bio-Rad公司），電泳儀（北京六一儀器廠）等。

1.2動物飼養(yǎng)及分組

健康初斷乳Wistar雄性大鼠49只，飼養(yǎng)環(huán)境溫度為20～24℃，相對濕度為40%～70%，每日維持12 h光照，晝夜循環(huán)，自由進食水。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，依據(jù)體重隨機分組：對照組（control group，CON）7只，喂基礎(chǔ)飼料；植物黃油組（margarine group，M）21只，喂含植物黃油高脂飼料；豬油組（lard group，L）21只，喂含豬油高脂飼料。喂養(yǎng)8周實驗結(jié)束，M組和L組大鼠按體重增加量由高至低排序，體重增加位于上游的前1/3大鼠判定為肥胖傾向大鼠（obesity prone，OP），體重增加位于下游的后1/3大鼠判定為肥胖抵抗大鼠（obesity resistant，OR），位于中游的1/3大鼠棄去［10］。

1.3飼料的配制

基礎(chǔ)飼料由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物部提供，豬油、植物黃油飼料自行配制，具體配方見表1。配制植物黃油和豬油飼料時，每公斤飼料另添加鹽酸硫胺素15 mg，核黃素15 mg，鹽酸吡哆醇10 mg，葉酸10 mg，維生素K310 mg，泛酸鈣50 mg，尼克酸20 mg，氯化膽堿1 mg，肌醇0.5 mg。3種飼料營養(yǎng)成分及熱量對比見表2。

表1　飼料主要成分對比（g/100 g）

表2　飼料營養(yǎng)成分及熱量對比（g/100 g）

1.4樣品的采集與處理

大鼠乙醚麻醉后處死，剝離全部附睪周脂肪、腎周脂肪并稱重；稱取皮下以及附睪、腎周脂肪組織100～150 mg于-80℃深凍冰箱中凍存，用于后續(xù)蛋白表達檢測。

1.5腎周和附睪周體脂肪系數(shù)計算

體脂肪系數(shù)=某部位脂肪重量（g）/體重（g）×100%。 1.6 Western blot檢測皮下、附睪、腎周脂肪組織IL-6表達水平

取凍存組織融化后勻漿，提取組織總蛋白，使用紅外微定量分析儀測定其蛋白濃度；每個樣品取50 μg總蛋白，加入IL-6一抗2 μL，于4℃搖床上孵育1 h，再加入免疫磁珠20 μg，于4℃搖床過夜，第2天2500 r/min離心5 min收集沉淀，用PBS反復(fù)清洗3遍，加入loading buffer，煮沸5 min使蛋白變性；進行聚丙烯酰胺凝膠電泳（12%分離膠和5%濃縮膠），上樣體積為每孔50 μg；轉(zhuǎn)膜，封閉液封閉1 h；分別加入IL-6一抗（1∶3000）、二抗（1∶2000）孵育，按ECL發(fā)光試劑盒說明進行化學(xué)發(fā)光檢測。

1.7統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，當方差齊性時，用LSD-t檢驗進行兩兩比較；當方差不齊時，組間兩兩比較采用Dunllett's T3檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組大鼠體重比較

與CON組比較，豬油和植物黃油高脂飼料致OP大鼠體重增加明顯，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（均P< 0.01），但OR大鼠體重較CON組增加不顯著（P> 0.05）。見圖1。

2.2各組大鼠體脂肪比較

進食高脂飼料8周后，M-OR和M-OP大鼠內(nèi)臟的附睪周和腎周部位脂肪沉積較多，與CON組比較，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.01）；L-OP大鼠以上兩個部位脂肪增長也較快，與CON比較差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.01），L-OR的腎周脂肪蓄積較CON組明顯增多（P<0.01）。見表3。

圖1　豬油與植物黃油高脂飼料喂養(yǎng)致大鼠體重增重比較

表3　各組大鼠體脂肪系數(shù)比較（）

表3　各組大鼠體脂肪系數(shù)比較（）

注：與CON組比較，**P<0.01；CON：對照；L-OP：豬油高脂飼料喂養(yǎng)肥胖傾向；L-OR：豬油高脂飼料喂養(yǎng)肥胖抵抗；M-OP：植物黃油高脂飼料喂養(yǎng)肥胖傾向；M-OR：植物黃油高脂飼料喂養(yǎng)肥胖抵抗

組別只數(shù)附睪周脂肪系數(shù)腎周脂肪系數(shù)CON組L-OR組L-OP組M-OR組M-OP組77777 0.57±0.09 0.80±0.26 0.92±0.16**1.12±0.15**1.19±0.38**0.51±0.13 0.82±0.12**1.06±0.25**1.30±0.18**1.24±0.40**

2.3各組大鼠不同部位脂肪組織IL-6表達水平比較

Western blot結(jié)果顯示，植物黃油高脂飼料喂養(yǎng)的M-OP和M-OR組大鼠皮下部位IL-6表達水平較CON組顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P< 0.01）；L-OP、L-OR和M-OP組大鼠附睪周IL-6表達增多，與CON比較，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（均P< 0.01）；豬油和植物黃油高脂飼料均可致實驗大鼠腎周IL-6表達升高，與CON比較，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.01）。大鼠皮下M-OP、M-OR組IL-6表達水平高于L-OP、L-OR組（均P<0.05）；附睪部位M-OP組IL-6表達水平高于L-OP組，M-OR組IL-6表達水平低于L-OP組（均P<0.05）；腎周部位脂肪組織L-OP、L-OR組IL-6表達水平分別較M-OP、M-OR組顯著升高（均P<0.05）。見圖2。

3　討論

肥胖的發(fā)生受多種因素影響，其中高脂飲食是肥胖發(fā)生發(fā)展的主要原因［11］，而且食物中脂肪酸的類型也對肥胖發(fā)生發(fā)展起到重要作用［8，12］。脂肪組織作為體內(nèi)強大的內(nèi)分泌器官可以分泌多種激素、趨化因子、脂肪因子等，其中IL-6與肥胖及其并發(fā)癥的進展關(guān)系密切［6］，如IL-6水平的升高與胰島素抵抗相關(guān)，并會增加糖尿病患病風(fēng)險［13-14］。鑒于有研究已證實不同部位脂肪組織的代謝及內(nèi)分泌功能方面也存在著明顯差異［15-16］，為了解不同類型高脂飼料對脂肪組織IL-6生成的影響，本研究采用含豬油/植物黃油的高脂飼料誘導(dǎo)肥胖動物模型，觀察對外周（皮下）和內(nèi)臟（腎周脂肪、附睪周）脂肪組織IL-6表達水平的影響。

圖2　豬油與植物黃油高脂飼料喂養(yǎng)致大鼠不同部位脂肪組織IL-6表達水平比較

高脂飼料誘導(dǎo)動物模型是研究肥胖相關(guān)發(fā)病機制的重要工具，其中體重增加是肥胖診斷的必要依據(jù)。本研究顯示含豬油或植物黃油的高脂飼料都可使OP大鼠的體重增加，這與Buettner等［8］的研究結(jié)果一致，提示能量密度相同而脂肪酸類型不同的高脂飼料對實驗大鼠具有相同的肥胖誘導(dǎo)作用。雖然兩種高脂飼料喂養(yǎng)的OR大鼠體重增重與CON組差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但分析體脂肪結(jié)果顯示附睪周和/或腎周脂肪系數(shù)均高于CON組，提示豬油和植物黃油高脂膳食均可致實驗動物體脂肪蓄積，導(dǎo)致肥胖。

IL-6作為重要的抗炎癥細胞因子之一，在正常水平時會對機體起到一定的保護作用。此外還具有致炎功能，體內(nèi)過多積累則會引起炎性損害［17］。脂肪組織是IL-6生成的主要場所，循環(huán)中IL-6總量的10%～35%都由脂肪組織分泌［15］。機體內(nèi)的脂肪組織存在著區(qū)域差異，其代謝特性顯著不同［18］。本實驗觀察到植物黃油高脂飼料喂養(yǎng)的大鼠皮下脂肪組織IL-6表達水平顯著高于CON，且M-OP、M-OR的IL-6表達水平分別顯著高于L-OP、L-OR，提示植物黃油較豬油更易引起皮下脂肪組織炎性反應(yīng)，鑒于皮下脂肪在機體分布范圍廣，推測這也可能是肥胖發(fā)生發(fā)展過程中引發(fā)胰島素抵抗等并發(fā)癥的原因之一。

本實驗觀察到豬油和植物黃油高脂飼料都使OP/OR組大鼠附睪脂肪組織IL-6生成增多，且M-OP組較L-OP組IL-6表達增多更顯著，提示植物黃油較豬油更易引起附睪脂肪組織炎癥狀態(tài)。附睪脂肪組織在機體生殖過程，特別是精子的形成過程中起到重要作用［19］，提示高脂飲食致附睪脂肪IL-6生成增多也可能是導(dǎo)致肥胖雄性生殖功能損害的原因之一。

肥胖相關(guān)性腎小球病是肥胖的重要并發(fā)癥之一，既往研究顯示，慢性炎癥與腎損害存在密切關(guān)聯(lián)，無論局部還是循環(huán)中IL-6水平都可能參與腎損傷的進展過程［20］。本實驗結(jié)果顯示，與CON比較兩種高脂飼料都使OP、OR組腎周脂肪組織IL-6水平顯著升高，提示豬油和植物黃油高脂飼料都會造成該部位炎性反應(yīng)，推測腎周脂肪組織IL-6水平的升高對高脂飲食誘導(dǎo)的腎臟損害可能起到一定的貢獻作用，該結(jié)果為肥胖相關(guān)性腎小球病的炎癥理論提供了有力證據(jù)［21］。此外該部位L-OP、L-OR的IL-6表達水平分別較M-OP、M-OR顯著升高，進一步提示豬油可能比植物黃油更易造成腎臟損害。

綜上所述，含豬油/植物黃油的高脂膳食都可以導(dǎo)致脂肪組織炎癥狀態(tài)的形成，與豬油相比，植物黃油能引起皮下、內(nèi)臟（附睪周、腎周）等更多部位脂肪組織IL-6生成增多，進而可能引發(fā)胰島素抵抗。

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Comparison of the effect of lard and margarine on the expression of IL-6 in adipose tissue

WANG Nannan1#LIU Fuding2#BAI Yinglong1▲JIA Lihong1ZHAI Lingling1WEI Wei1
1.Department of Child and Adolescent Health，School of Public Health，China Medical University，Liaoning Province，Shenyang110122，China；2.Department of Quality Management，Huangshi Central Hospital，E'dong Healthcare Group，Hubei Province，Huangshi 435000，China

R3

A

1673-7210（2016）09（c）-0004-05

2016-06-23本文編輯：程銘）

國家自然科學(xué)基金資助項目（81373018）。

#共同第一作者