張國(guó)輝　王龍　任永權(quán)

摘要：2014—2015年，在貴州省黔東南州太子參（Radix pseudostellariae）發(fā)現(xiàn)了2種新的真菌病害和1種生理性病害。經(jīng)實(shí)地調(diào)查、組織分離和顯微鑒定，在發(fā)病塊莖上得到主要致病菌博寧刺盤孢（Colletotrichum boninense）和尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum），在病葉上得到的致病菌為茄匐柄霉（Stemphylium solani），同時(shí)還發(fā)現(xiàn)因棚內(nèi)光照過強(qiáng)導(dǎo)致生理性病害高溫日灼病。

關(guān)鍵詞：太子參；腐爛?。缓职卟。桓邷厝兆撇?；病原

中圖分類號(hào)： S435.675 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2016）07-0177-03

太子參（Pseudostellaria heterophylla）為石竹科植物異葉假繁縷的塊根，別稱孩兒參、童參、四葉參等，屬常用滋補(bǔ)類藥材，具有補(bǔ)氣益血、生津、補(bǔ)脾胃等作用。太子參已被我國(guó)衛(wèi)生部列入"可用于保健食品的中藥材名單"，為名貴中藥材。近年來，太子參在治療肝炎、糖尿病、冠心病、白細(xì)胞減少癥、甲亢、淋巴結(jié)核等疑難病癥方面取得了新的進(jìn)展[1]。由于市場(chǎng)需求量的增加，貴州省黔東南州的太子參種植面積和區(qū)域迅速擴(kuò)大，連作面積不斷增加，塊莖、葉片常出現(xiàn)真菌病害，某些真菌病害危害逐年加重，導(dǎo)致太子參減產(chǎn)15%～50%[2]。對(duì)太子參真菌病害進(jìn)行深入研究具有重要意義。太子參病毒病、白絹病、立枯病、根腐病、葉斑病是太子參的常見病害[3-8]。2014—2015年，貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司太子參種植地發(fā)生了腐爛病、褐斑病2種真菌病害以及高溫日灼病，其中褐斑病、高溫日灼病是首發(fā)病害，給太子參產(chǎn)業(yè)造成一定的經(jīng)濟(jì)損失，本研究現(xiàn)對(duì)3種病害進(jìn)行報(bào)道。

1 材料與方法

室外調(diào)查于2014年4月至2015年3月在貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司太子參種植地進(jìn)行。室內(nèi)試驗(yàn)在中國(guó)科學(xué)院遺傳所實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。2014年4月至2015年3月在貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司太子參種植地調(diào)查和采集標(biāo)本，記錄病害發(fā)生的特點(diǎn)和癥狀，并采集新鮮標(biāo)本用于病原分離和鑒定。

1.1 材料

PSA培養(yǎng)基、高壓蒸汽滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱、移植針、顯微鏡、電磁爐、微波爐等。工業(yè)乙醇、70%乙醇、0.1% HgCl2溶液、95%鏈霉素。

1.2 方法

1.2.1 癥狀的觀察和描述 觀察并描述太子參病組織的表面病斑形態(tài)、顏色、大小及危害程度等，并對(duì)發(fā)病部位進(jìn)行拍照。

1.2.2 病原菌的分離純化和培養(yǎng) 采用組織分離法對(duì)太子參發(fā)病塊莖進(jìn)行病原菌分離，切取塊莖病組織3塊，倒置于37 ℃培養(yǎng)2～3 d。挑菌落并繼續(xù)分離純化，直至獲得純培養(yǎng)。對(duì)顯微鏡下病原菌進(jìn)行拍照，并對(duì)菌絲和孢子大小進(jìn)行測(cè)量、記錄。切取病葉組織4～5 mm小塊，置于70%乙醇中浸2～3 s，接著將病組織移入0.1% HgCl2溶液中浸2 min；最后將病組織轉(zhuǎn)移到無菌水中漂洗3遍，并將組織移到PSA培養(yǎng)基上培養(yǎng)。將培養(yǎng)皿置于28 ℃電熱恒溫箱里培養(yǎng)3～5 d，挑取組織周圍的菌絲放進(jìn)加有鏈霉素的培養(yǎng)基平板上繼續(xù)培養(yǎng)5～7 d，獲得純培養(yǎng)，再對(duì)顯微鏡下的病原菌進(jìn)行拍照，并測(cè)量、記錄菌絲、孢子大小。

1.2.3 生理性病害的診斷 因發(fā)病部位沒有致病菌，所以主要觀察發(fā)病癥狀并調(diào)查環(huán)境條件。

2 結(jié)果與分析

2.1 太子參腐爛病

2.1.1 太子參腐爛病的癥狀觀察與描述 太子參腐爛病發(fā)病的主要部位為地下根部。病部首先出現(xiàn)褐色水漬狀病斑，病斑很快擴(kuò)展凹陷，病部呈黃褐色，長(zhǎng)約0.5 cm，病健交界處明顯。此病害發(fā)展迅速，可導(dǎo)致太子參根部腐爛變質(zhì)，田間發(fā)病時(shí)，以發(fā)病部位為中心向四周迅速蔓延（圖1）。

2.2.2 病原菌的形態(tài)特征 該菌菌落絮狀，平鋪，背面橘黃色；菌絲稀疏，初期白色，后期暗褐色，分生孢子單胞，無色，圓柱形，多數(shù)一端鈍圓，一端稍尖，內(nèi)有2個(gè)油球，具臍點(diǎn)，大小為（7.0～10.0）μm×（5.0～8.0）μm。采用16S rDNA測(cè)序和形態(tài)學(xué)鑒定的方法對(duì)所得菌株進(jìn)行鑒定[8]，結(jié)果表明，病原菌為博寧刺盤孢（Colletotrichum boninense）（圖2），屬于真菌門半知菌亞門黑盤孢目黑盤孢科刺盤孢屬真菌。

菌絲透明，具分隔，在側(cè)生的孢子梗上長(zhǎng)出孢子。大型孢子鐮刀形，略彎，向兩端均勻變尖，1～3個(gè)隔膜，多數(shù)為3個(gè)隔膜，大小為（21.0～28.0）μm×（2.5～4.0）μm。產(chǎn)孢細(xì)胞短，在菌絲上直接產(chǎn)生或者在分生孢子座上呈叢生狀。小型孢子圓形或橢圓形，單胞，數(shù)量多，假頭狀著生于產(chǎn)孢細(xì)胞上，大小為（5.0～12.0.0）μm×（2.0～3.5）μm。采用16S rDNA測(cè)序和形態(tài)學(xué)鑒定方法對(duì)所得菌株進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明，病原菌為尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）（圖3），屬于真菌門半知菌亞門從梗孢目瘤座孢科鐮刀菌屬真菌。

2.2 太子參褐斑病

2.2.1 太子參褐斑病的癥狀觀察與描述 太子參根腐病發(fā)病的主要部位為地上葉片，病部首先出現(xiàn)圓形至多角形灰白色葉斑，小而多，同時(shí)，病葉的葉尖或葉緣發(fā)病嚴(yán)重，病部呈黃褐色，病健交界處明顯（圖4）。

2.2.2 病原菌的形態(tài)特征 病原菌的分生孢子梗褐色，具隔，頂端稍膨大，單生或叢生，分生孢子著生于分生孢子梗頂端，褐色，壁磚狀分隔，擬橢圓形，頂端無喙?fàn)罴?xì)胞，中部橫隔處稍縊縮，大小（8～25） μm×（6～10） μm，分生孢子萌發(fā)后可產(chǎn)生次生分生孢子。分生孢子梗粗約4 μm，1～3個(gè)橫隔膜及0～2個(gè)縱隔膜，往往中隔處縊縮，表面光滑。采用16S rDNA測(cè)序和形態(tài)學(xué)鑒定方法對(duì)所得菌株進(jìn)行鑒定，結(jié)果表

明，病原菌為茄匐柄霉（Stemphylium solani）（圖5），屬半知菌亞門絲孢目暗色孢科匐柄霉屬真菌。上述3種病原菌分別接種健康的太子參塊莖和葉片后，第2天接種部位開始變暗褐色，5 d后接種部位病斑明顯，癥狀與田間癥狀基本一致，且再分離成功，表明分離物為病原菌。

2.3 太子高溫日灼病

2.3.1 癥狀觀察與描述 太子參主要發(fā)病部位為地上葉片。太子參日灼病與環(huán)境有關(guān)，常在高溫強(qiáng)光下出現(xiàn)。在強(qiáng)光照射區(qū)域太子參同時(shí)發(fā)病，無發(fā)病中心，為生理性病害。發(fā)病初期，被灼傷葉片的葉尖同時(shí)出現(xiàn)白色病斑，隨后部分泛黃變褐（圖6），發(fā)病后期，葉緣大面積變黃變褐后卷曲（圖7）。

太子參高溫日灼病為非侵染性病害，即生理性病害，發(fā)病部位無病原菌，因太子參種植地遮陽措施不當(dāng)，連續(xù)幾天高溫天氣，溫室內(nèi)溫度高達(dá)38 ℃左右，從而導(dǎo)致大面積暴發(fā)日灼病。

3 結(jié)論與討論

本研究對(duì)太子參的2種新病害進(jìn)行分離純化和培養(yǎng)，并采用16S rDNA測(cè)序和形態(tài)學(xué)鑒定方法對(duì)所得菌株進(jìn)行鑒定，得到病原菌博寧刺盤孢（Colletotrichum boninense）和尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）及致病菌茄匐柄霉（Stemphylium solani），根據(jù)分離的病原菌將太子參病害命名為腐爛病和褐斑病。博寧刺盤孢（Colletotrichum boninense）在太子參上首次發(fā)現(xiàn)，國(guó)內(nèi)對(duì)于它的研究多限于分類研究，關(guān)于致病性方面研究較少。該菌可導(dǎo)致塊莖腐爛變質(zhì)，同時(shí)氣候惡劣和土壤排水不暢也可導(dǎo)致病害嚴(yán)重。病原菌尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）主要可導(dǎo)致根腐病。桑維鈞等曾報(bào)道過太子參根腐病，但其病原菌為術(shù)賊鐮孢菌（Fusarium eguiseti），大多為大型分生孢子，鐮刀形，稍彎，無色，4～7隔膜[4]，與本研究結(jié)論不同。鐮刀菌多系弱寄生菌，從傷口或芽眼侵入。病菌在 5～30 ℃ 下均能生長(zhǎng)，貯藏條件差、通風(fēng)不良利于發(fā)病。另外，施肥對(duì)土壤微生物有較大影響，大量施用化肥尤其是氮肥可刺激土傳病菌中的鐮刀菌，從而加重了土傳病害的發(fā)生[9-10]。為防止該病菌的危害，在適量施用氮肥的前提下，在太子參的生長(zhǎng)后期注意排水，收獲時(shí)避免傷口，收獲后充分晾干，嚴(yán)防碰傷，保存時(shí)溫度控制在1～4 ℃，發(fā)現(xiàn)爛株及時(shí)汰除[11]。茄匐柄霉（Stemphylium solani）主要導(dǎo)致葉斑病或褐斑病，病菌隨病殘?bào)w在土壤中越冬，重病地或未經(jīng)消毒的舊床育苗發(fā)病重，苗床里通風(fēng)不及時(shí)，床內(nèi)溫濕度偏高，發(fā)病重。在南方，病菌靠分生孢子輾轉(zhuǎn)傳播蔓延；在寒冷地區(qū)，病菌以子囊座隨病殘?bào)w在土壤中越冬，產(chǎn)生子囊孢子進(jìn)行初侵染，后病部產(chǎn)生分生孢子進(jìn)行再侵染，借氣流傳播蔓延，做好土壤消毒有利于減少該病菌的危害。溫室大棚內(nèi)因光照過強(qiáng)導(dǎo)致的危害，不僅限于光照本身，更多是伴有棚內(nèi)高溫、水分不足，會(huì)加重光照過強(qiáng)危害的嚴(yán)重程度。光照過強(qiáng)對(duì)中藥材危害的部位主要是葉片，由于水分供應(yīng)不足，植物的蒸騰作用減弱，受光部位產(chǎn)生日灼傷，日灼傷的面積和大小及傷害程度與光照過強(qiáng)程度以及光照時(shí)間長(zhǎng)短密切相關(guān)。輕者葉片邊緣灼傷、變白、卷曲，重者整個(gè)葉片灼傷、變白、枯焦。成株期光照過強(qiáng)，會(huì)使太子參生長(zhǎng)受阻，產(chǎn)量下降。光照過強(qiáng)時(shí)采取部分遮陰或覆蓋遮陽網(wǎng)，避開陽光直射，遮光降溫。保護(hù)地溫室大棚加強(qiáng)通風(fēng)，降低棚內(nèi)溫度，可減輕危害。陽光直射時(shí)，溫室大棚內(nèi)溫度過高，植株失水過多，有可能發(fā)生灼傷，應(yīng)及時(shí)灌水，促進(jìn)葉面水分蒸騰，加速植株水分循環(huán)，降低植株體溫，避免造成灼傷[12]。太子參為名貴中藥材植物，在中藥材市場(chǎng)占據(jù)著重要的地位，然而植物病害一直是影響其優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的重要因素之一[13]。植物病害不僅直接造成太子參產(chǎn)量與品質(zhì)降低，而且部分病原真菌在侵染太子參過程中，可能分泌產(chǎn)生多種對(duì)人畜有害的毒素與次生代謝物產(chǎn)物，對(duì)人們身體健康構(gòu)成極大威脅[14-15]。鑒于太子參的藥用價(jià)值，其病害防治必須避免使用高殘留有毒農(nóng)藥，應(yīng)采取綜合措施進(jìn)行病害防治，同時(shí)改善栽培環(huán)境，減少生理性病害的發(fā)生，應(yīng)以生物防治（如芽孢桿菌）為主，農(nóng)業(yè)預(yù)防為重點(diǎn)，在做好種子消毒處理和土壤消毒[16-18]的基礎(chǔ)上，加強(qiáng)苗間管理，輔助化學(xué)防治和物理防治，在防治適期，可以使用安全、低毒殘留、高效實(shí)用農(nóng)藥交叉使用以減少太子參病蟲害耐藥性并結(jié)合生物制劑等生防制劑進(jìn)行綜合防治[19-20]。采用無病種參是防治病害最直接有效的方法。選擇新植地種植，參稻輪作也可以減輕病害[21]。

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