廣西桂林食品藥品檢驗所（541012）蔣彥飛 張治軍 鐘名誠

維生素E為脂溶性酚類有機化合物，有較強的抗氧化作用，能清除出自由基，抵御人體過氧化產物自由基損害，保持組織完整性，提高機體免疫力、延緩衰老，另外，維生素E通過調整人體機能，對人類腫瘤細胞的生長和增殖有抑制作用[1][2][3]，所以，常用于老年營養(yǎng)保健食品的添加劑。保健食品中維生素E原料來源，有天然型維生素E和合成型維生素E兩種，均為α-生育酚苯環(huán)上酚羥基經(jīng)乙?；傻拇姿狨?，其中天然型維生素E為d-α-生育酚醋酸酯，合成型維生素E為dl-α-生育酚醋酸酯，其分子式均為C31H52O3。游離的α-生育酚分子式為C29H50O2，在其苯環(huán)上被取代官能團數(shù)目位置不同，又分為β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚三個同系物，其中β-生育酚、γ-生育酚分子式均為C28H48O2，δ-生育酚結構為C27H46O2。同系物的結構雖然相似，但其所具有的生物活性并不完全相同，其中α-生育酚的生物活性與抗氧化能力最強[4]。市場上的含維生素E保健食品種類繁多，產品標簽中配方原料來源，有天然維生素E，也有合成維生素E，并且價格差距較大。為科學分析評價保健食品中的維生素E，本文研究報道GC法同時測定維生素E、α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚含量。

1 實驗儀器、試劑與試藥

1.1 儀器 Agilent 7890A氣相色譜儀，具火焰離子化檢測器（美國）；數(shù)顯型漩渦混合器（Talboys，美國）；數(shù)顯恒溫水浴振蕩器（金壇市城西春蘭實驗儀器廠）。

1.2 試劑與試藥 維生素E（按C31H52O3計，含量為98.6%，中國食品藥品檢定研究院），α-生育酚(含量＞99.9%，Supelco公司，美國），γ-生育酚(含量＞98.5%，Supelco公司，美國），δ-生育酚(含量＞93.7%，Supelco公司，美國），正三十二烷（含量＞96.0%，梯希愛上海發(fā)展有限公司）；含維生素E保健食品產地分別為廣東、山東、浙江、北京、廣西等省、市、自治區(qū)的市售品；正己烷為色譜純；鹽酸為優(yōu)級純；無水乙醇為分析純；水為娃哈哈飲用純凈水。

2 方法、結果與分析

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 DB-1彈性石英毛細管柱（30m×0.32mm×1μm）；進樣口溫度290℃；柱溫280℃；FID檢測器，檢測器溫度290℃；分流進樣，分流比30∶1，進樣量1μL；載氣為高純氮氣，流量2.0mL·min-1；正三十二烷內標物與維生素E分離度R，R應不小于1.5。

2.2 內標溶液制備 精密稱取正三十二烷1000.18mg，置1000mL量瓶中，加正己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為內標溶液。

2.3 試樣溶液的制備 取膠囊劑的內容物，混合均勻，片劑則研細混勻，根據(jù)樣品維生素E含量稱取試樣0.5～4g(精確到0.1mg)于50mL棕色容量瓶中，加入15mL50℃的0.5mol·L-1鹽酸溶液，充氮排除空氣，蓋上瓶塞，在漩渦混合器上漩渦1min，置于50℃振蕩器中振蕩10min后，冷至室溫，加入15mL無水乙醇，漩渦混勻1min，精密加入10mL內標溶液，再漩渦混勻2min，強力振蕩30s后，靜置，上清液用微孔濾膜濾過，收集濾液備用。

2.4 對照溶液的制備 分別精密稱取對照品維生素E40.51mg、α-生育酚40.70mg、γ-生育酚30.30mg、δ-生育酚40.28mg，置同一10mL量瓶中，加內標溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照儲備液。

2.5 線性范圍考察 取混合對照儲備液逐級分別用內標溶液稀釋2、2、2、5、2、5倍，依次制成混合對照系列1、2、3、4、5、6、7溶液，進樣前用0.45μm濾膜過濾，按2.1項下色譜條件分別測定峰面積，以對照品的峰面積與內標物的峰面積比值為縱坐標Y，對照品的濃度為縱坐標X，分別繪制標準曲線，回歸方程見附表1。

維生素E混合對照溶液及某魚油樣品圖見附圖。

2.6 精密度試驗 精密吸取同一混標對照溶液（系列5），連續(xù)測定6次，分別計算對照品的峰面積與內標物的峰面積比值，維生素E、α-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的精密度（n=6）RSD值分別為0.8%、0.7%、0.5%、 0.3%。

2.7 重復性試驗 對同一樣品（某魚油2號樣品，不含維生素E）平行稱取7份，各約2g，精密稱定，按2.3項下方法同法制備，并按2.1項下色譜條件進行測定，從各標準曲線讀法對應成分濃度，分別計算試樣中各組分含量，α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚含量的RSD值分別為1.7%、1.7%、2.0%（n=7），結果表明重復性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗 取同一試樣溶液（某魚油2號樣品，不含維生素E），按2.1項下色譜條件，分別在0，8，16，24，30，35h測定，分別計算對照品的峰面積與內標物的峰面積比值，α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚與各對應內標物比值的RSD值分別為0.6%、0.6%、0.5%。結果表明，供試品溶液配制在35h內穩(wěn)定。

2.9 方法檢出限 精密稱取陰性樣品4.0128g，精密加入2.5項下混合對照系列1溶液（維生素E濃度：0.009895mg/mL，α-生育酚濃度：0.01016mg/mL，γ-生育酚濃度：0.007461mg/mLδ-生育酚濃度：0.009436mg/mL）4mL，于45℃水浴中通氮氣緩緩吹盡正己烷，按2.3項下方法同法制備并進行測定，以待測物響應值為3倍左右計，試樣最低檢出濃度為：維生素E9.9mg/kg，α-生育酚10.1mg/kg，γ-生育酚7.4mg/kg，γ-生育酚9.4mg/kg。

2.10 回收率試驗 取已知各組分含量的某魚油樣品6份，各約1g，精密稱定，精密加入混和對照液（維生素E：1.9618mg/mL，α-生育酚濃度：2.0030mg/mL，γ-生育酚濃度：1.5809mg/mL，δ-生育酚：1.5245mg/mL）1mL，按2.9項下方法同法制備，并按2.1項下色譜條件進行測定，以標準曲線法計算回收率，維生素E、α-生育酚、γ-生育酚和δ-生育酚的平均回收率為98.2%、99.1%、100.3%、96.7%，RSD分別為1.5%、2.0%、1.7%、2.2%。

附表1 四種成分線性關系分析結果表

附表2 25批含維生素E樣品調查檢測結果

附表3 25批保健食品維生素E狀況結果表

附表4 25批保健食品維生素E結果分析表

附圖 維生素E與生育酚混合對照溶液及某魚油樣品色譜圖（A：混合對照；B：某魚油樣品）

2.11 樣品測定 對不同來源不同批次含維生素E的樣品，按2.4項下方法測定含量，結果見附表2。

3 結果與討論

3.1 關于維生素E的定義問題 維生素E作為維生素類藥品，自《中國藥典》1977年版起，歷版均有收載，分子式均為C31H52O3，在2000年版前為dl-α-生育酚醋酸酯， 2005年版后分為天然型（d-α-生育酚醋酸酯）或合成型維生素E（dl-α-生育酚醋酸酯）。GB 19191-2003《食品添加劑 天然維生素E》中維生素E分為d-α-生育酚、混合生育酚（d-α-、d-β-、d-γ-和d-δ-生育酚）、d-α-醋酸生育酚、d-α-琥珀酸生育酚，GB 14756-2010《食品安全國家標準 食品添加劑 維生素E（dlα-醋酸生育酚）》中維生素E為dl-α-醋酸生育酚，GB 29942-2013《食品安全國家標準 食品添加劑 維生素E(dl-α-生育酚)》中維生素E為dl-α-生育酚，GB/T 5009.82-2003《食品中維生素A與維生素E的測定》中維生素E為d-α-、d-γ-和d-δ-生育酚，GB 54139-2010《食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中維生素A、D、E 的測定》中維生素E為α-生育酚。由此可知，維生素E在不同行業(yè)、不同標準，其定義也不同，保健食品配方中維生素E為功效成分之一，筆者建議維生素E定義應以《中國藥典》規(guī)定為準。

3.2 保健食品中維生素E類成分的狀況分析共檢測保健食品25批，有2批未檢出維生素E類成分，另23批依據(jù)檢出成分類型進行歸納分類統(tǒng)計，結果見附表3。

附表3統(tǒng)計結果表明，25批樣品中，17批樣品有標示量值，比例為68%，8批檢出維生素E，比例為32%，5批檢出維生素E與α-生育酚，比例為20%，10批檢出生育酚類，比例為40%；此外，標識成分為天然維生素E的15批樣品中，僅有4批為維生素E，約占27%，多數(shù)樣品檢出成分為生育酚類成分。說明目前含維生素E保健食品標示維生素E成分與實際投料較為混亂，特別是標示為天然維生素E的保健食品，在生產過程中有以生育酚為原料或人為摻假現(xiàn)象，不符合國家標準預包裝食品標簽通則及衛(wèi)生部保健食品標識規(guī)定的要求[5][6]。

3.3 保健食品中維生素E含量結果分析 依據(jù)測定數(shù)值折算為每粒（丸或片）含量，以每日最大服用量進行歸納分類統(tǒng)計，結果見附表4。

從附表4可知，除2批檢測結果為零外，23批樣品13批檢出維生素E，檢出率為52%，余下樣品檢出成分均為生育酚。參考《中國藥典》2015年版二部[7]，維生素E膠囊劑有5mg、10mg、50mg、100mg共4種規(guī)格，如以維生素E每次最小服用量5mg為限度，低于此限度的有2批，比例為9%，如以維生素E每次最大服用量100mg為高限，高于高限的有2批，比例為9%，說明多數(shù)樣品維生素E含量已達到治療劑量水平。如按食品添加劑使用標準[8]，維生素E最大使用量為0.2mg/g，除2批未檢出外，均超出標準。

3.4 測定方法的選擇 維生素E結構復雜，同系物多，準確分析測定比較困難[8]。近年來國內外致力于分析測定研究，開發(fā)的多種有效的分析方法，主要有：氣相色譜法[9]、高效液相色譜法[10]、液相色譜-串聯(lián)質譜法[11]等，這些方法各有優(yōu)缺點。針對目前維生素E的研究現(xiàn)狀和國內實驗室儀器使用情況，本研究采用了氣相色譜分析法，因其前處理簡單，結果準確可靠，成本較低，并在較短的分析周期內，完成維生素E、α-、γ-和δ-生育酚的分析。同時，在色譜柱選擇方面，對比HP-5，DB-5，DB-1三種色譜柱，DB-1柱能有效分離這幾種成分，故本法采用DB-1毛細管柱為分離柱，可滿足保健食品中維生素E及各種生育酚同系物的定量分析要求。

3.5 結論 保健食品作為特定人群食用的食品，除安全無毒外，尚含一定量功效成分，以調節(jié)機體功能。從本文測定25批含維生素E保健食品結果看，反映出目前保健食品市場混亂，質量參差不齊，有的功效成分含量過低，達不到調節(jié)機體功能，有的過高則對人體有害，更有摻雜使假。提示相關監(jiān)管部門應加強市場上保健品的衛(wèi)生監(jiān)管力度，除應針對衛(wèi)生指標中有毒有害成分的檢測外，還應對其營養(yǎng)成分加強監(jiān)測，以保護消費者利益。