袁曉文,趙學(xué)峰,羅子源,邱　銓

(廣東省佛山市南海區(qū)人民醫(yī)院檢驗科　528200)

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·臨床研究·

南海區(qū)5 988例女性患者宮頸HPV感染的現(xiàn)狀研究

袁曉文,趙學(xué)峰,羅子源,邱銓

(廣東省佛山市南海區(qū)人民醫(yī)院檢驗科528200)

目的研究婦科患者人乳頭瘤病毒(HPV)感染的基因型、多重感染以及不同年齡段感染情況，為當(dāng)?shù)豀PV感染流行病學(xué)研究和宮頸癌早期防治提供理論依據(jù)。方法運用凱普分子雜交基因芯片技術(shù)對5 988例女性患者宮頸脫落細胞進行HPV基因分型檢測。結(jié)果5 988例標(biāo)本中，HPV感染率13.63%，其中高危型感染率11.25%，低危型感染率1.04%，多重感染17.13%。不同年齡分組中，小于30歲組HPV感染率最高。結(jié)論年輕女性HPV的篩查對發(fā)現(xiàn)宮頸癌及癌前病變很有價值。

人乳頭瘤病毒；基因分型；宮頸癌

宮頸癌是1種嚴重損害廣大婦女健康和生命而且高發(fā)的惡性腫瘤，根據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計分析，全世界每年確診的新發(fā)病例約47萬，死亡病例約21萬。特別是發(fā)展中國家，其宮頸癌的發(fā)病率約占全球的80%，并且呈上升和年輕化趨勢[1]。目前，篩查是防控宮頸癌的主要途徑。近年來研究發(fā)現(xiàn)，人乳頭瘤病毒(HPV)感染是導(dǎo)致宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變發(fā)生的重要因素，約99.7%的宮頸癌患者中存在HPV感染。近年來宮頸癌的防治研究中認為，高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的必要條件[2-3]。因此，HPV檢測也成為宮頸癌篩查的有效手段。目前已經(jīng)分離出130多種HPV亞型，HPV是1種經(jīng)性傳播的病毒，流行病學(xué)資料顯示，感染型別存在地區(qū)性差異。本研究通過對佛山市南海區(qū)5 988例女性宮頸脫落細胞進行HPV基因分型檢測，了解南海區(qū)HPV亞型的分布，為該地區(qū)HPV感染的診治和宮頸癌早期防治提供理論依據(jù)。

1　資料與方法

1.1一般資料收集2013年1月至2015年12月在本院婦科門診就診的女性患者5 988例為研究對象，年齡15～94歲，所有患者沒有做過子宮切除手術(shù)，3 d內(nèi)不使用陰道內(nèi)藥物或?qū)﹃幍肋M行沖洗，24 h內(nèi)不應(yīng)有性行為。標(biāo)本采集時不處于月經(jīng)周期，除去復(fù)查患者。全部標(biāo)本采集均由醫(yī)生征得患者同意并承諾保護患者隱私。

1.2儀器與試劑核酸分子快速雜交基因分型檢測系統(tǒng)，包括ABI7000核酸擴增儀由美國ABI公司生產(chǎn)，醫(yī)用核酸分子快速雜交儀由凱普生物科技有限公司生產(chǎn)，HPV-DNA提取試劑盒、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增試劑盒及雜交試劑盒購自凱普生物科技有限公司。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集與處理所有患者均由婦產(chǎn)科醫(yī)生以窺陰器或陰道擴張器暴露宮頸，用凱普公司配套專用宮頸刷至宮頸口，輕輕搓動宮頸刷，使其順時針旋轉(zhuǎn)5圈獲得足夠的上皮細胞，慢慢取出宮頸刷，將其放入標(biāo)有患者編號的裝有專用細胞保存液的取樣管中，擰緊瓶蓋，立即送檢，如不能馬上送檢，請于4 ℃存放，并在2周內(nèi)完成檢測，應(yīng)避免反復(fù)凍融。

1.3.2檢測方法采用凱普生物科技有限公司生產(chǎn)的檢測試劑盒進行樣品DNA的提取、擴增和分型檢測。凱普21種HPV分型檢測包括高危亞型13種，即HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV68；中國人常見亞型3種，即HPV53、HPV66、CP8304；低危亞型5種，即HPV6、HPV11、HPV44、HPV42、HPV43；中國人常見亞型3種，即HPV53、HPV66、CP8304。所有操作嚴格按照儀器和試劑盒說明書進行，同時對結(jié)果進行判斷。如出現(xiàn)2種或2種類型以上屬多重感染，對多重感染者，各亞型陽性率重復(fù)計算。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理所有數(shù)據(jù)采用Mirosoft Excel2003及SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

2.15 988例女性宮頸細胞HPV感染率和基因型分布本研究的5 988例患者中，HPV感染數(shù)813例，總檢出陽性率13.58%。21種HPV亞型均被檢出，共檢出HPV亞型974次，多重感染重復(fù)計數(shù)。高危型感染率13.21%(791/5 988),前5位的高危型由高到低依次為HPV16、HPV52、HPV58、HPV18、HPV39，分別占25.95%、21.40%、10.82%、7.50%、6.52%；低危型感染率為1.04%(62/5 988)，前3位低危型由高到低為HPV6、HPV11、HPV42，分別占2.58%、2.46%、1.48%。中國人常見型中，HPV53、HPV66和CP8304分別占5.78%、1.97%、9.59%。各種基因型分布見表1。

表1　　5 988例女性宮頸細胞HPV感染率和基因型分布

續(xù)表1　　5 988例女性宮頸細胞HPV感染率和基因型分布

2.2不同年齡段女性HPV感染情況將5 988例女性患者分6個年齡段進行分析，<20歲組的HPV感染率遠遠高于其他組(P<0.05)，感染率30.00%。其他組間兩兩比較，HPV感染率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表2　　不同年齡段女性HPV感染情況

2.3不同年齡段女性HPV亞型單一感染和多重感染狀況在813例感染標(biāo)本中，單一感染標(biāo)本672例，占82.66%(672/813)；多重感染標(biāo)本為141例，占17.13%(141/813)，以二重感染為主，共110例，占多重感染的78.57%，詳見表3。

表3　　不同年齡段女性HPV亞型單一感染和

3　討　　論

宮頸癌是全球女性比較常見的婦科惡性腫瘤之一，根據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，我國每年約有13.5萬新發(fā)宮頸癌病例，占全球1/3以上[4]。近年來，隨著對宮頸癌病因?qū)W研究的不斷發(fā)展，研究已證實高危型HPV持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的必要條件，約99.7%的宮頸癌患者中存在HPV感染。因此，HPV檢測也成為宮頸癌篩查的有效手段。本研究采用凱普導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)對佛山市南海區(qū)5 988例女性宮頸HPV感染進行檢測，發(fā)現(xiàn)HPV感染813例，感染率13.58%，感染率與李毅堅等[5]報道的感染率25.00%(252/1 008)有差異，這可能是由于研究選取的樣本量不一致。

岑堯等[6]研究發(fā)現(xiàn)，HPV高危型別在我國不同地區(qū)及不同人群中的分布存在一定差異。中國HPV高危型分布分別是：HPV16、HPV52、HPV58、HPV33、HPV18型，其中HPV16和HPV52型是南方感染率最高的前2位型別。而北方則以HPV16和HPV58型最為常見，HPV16型是我國最為常見的感染型別。本研究中，HPV 21種亞型均被檢出，感染率最高的前10位分別是HPV16(25.95%)、HPV52(21.40%)、HPV58(10.82%)、CP8304(9.59%)、HPV18(7.50%)、HPV39(6.52%)、HPV53(5.78%)、HPV33(5.29%)、HPV51(5.17%)、HPV68(4.43%)。這一結(jié)果與本地區(qū)的雷金菊[7]報道有一定程度的差異，可能是研究者所選的研究對象、研究標(biāo)本數(shù)量以及研究方法之間存在一定程度的差異導(dǎo)致的。但是以HPV16、HPV52和HPV58為最主要感染亞型，與本地區(qū)的其他報道一致。

本研究顯示，<20歲組的HPV感染率遠遠高于其他組，感染率30.00%，這可能和年輕女性性生活狀況、生活習(xí)慣有關(guān)。所以，加強女性特別是年輕女性HPV篩查，以預(yù)防宮頸癌和宮頸癌前病的發(fā)生具有重要意義。HPV多重感染率在世界范圍內(nèi)的差異很大，本研究中，單一感染標(biāo)本為672例，占82.66%(672/813)；多重感染患者141例，占17.13%(141/813)。

宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展是1個由量變到質(zhì)變，漸變到突變的病理過程，所以在癌前病變階段能早發(fā)現(xiàn)、早診治，是降低宮頸癌發(fā)病率和死亡率的有效方法。本研究通過檢測初步得知，佛山市南海區(qū)女性HPV感染的現(xiàn)狀與HPV型別分布狀態(tài)，HPV感染的高峰是<20歲的人群，所以，要加強對該年齡段女性人群普及HPV感染相關(guān)知識，提高早期自我防護意識；同時也要做好HPV易感人群的監(jiān)測和隨訪，定期檢查，及時發(fā)現(xiàn)，及時治療。

[1]Denny L.Cytological screening for cervical cancer prevention[J].Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol,2012,26(2):189-196.

[2]Munoz N,Bosch FX,De Sanjose S,et al.Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer[J].N Engl J Med,2003,348(6):518-527.

[3]Trottier H,Burchell AN.Epidemiology of mucosal human papillomavirus infection and associated diseases[J].Public Health Genomics,2009,12(5/6):291-307.

[4]Michelli E,Téllez L,Mendoza JA,et al.Comparative analysis of three methods for HPV DNA detection in cervical samples[J].Investigación Clínica,2011,52(4):344-357.

[5]李毅堅，王堃成，袁健生，等．佛山市南海區(qū)婦女子宮頸人乳頭狀瘤病毒感染現(xiàn)狀及相關(guān)因素分析[J]．現(xiàn)代醫(yī)院，2011，11(12)：20-22．

[6]岑堯，張翠英，張雅麗，等．中國女性人乳頭瘤病毒感染狀況及高危型別分布的Meta分析[J]．癌癥進展，2013，11(1)：75-81．

[7]雷金菊．佛山市1 638例女性HPV基因分型狀況分析[J]．國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(3)：370-371．

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.18.056

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1673-4130(2016)18-2640-02

2016-04-03

2016-06-29)