王　彬，李國(guó)鋒，王　健，王光鎖，譚禮萍，岳化葵，湯倩華

(廣東省深圳市人民醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.胸外科；3.科教科　518020)

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·論著·

血清TK1水平檢測(cè)在非小細(xì)胞肺癌診斷中的應(yīng)用

王彬1，李國(guó)鋒2，王健2，王光鎖2，譚禮萍3，岳化葵1，湯倩華1

(廣東省深圳市人民醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.胸外科；3.科教科518020)

目的研究血清胸苷激酶1(TK1)水平變化對(duì)小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者臨床診斷價(jià)值。方法采用免疫印跡-增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)129例非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)住院患者及90例健康查體者血清TK1水平，并對(duì)76例NSCLC患者手術(shù)前后血清TK1水平變化狀況進(jìn)行比較。結(jié)果NSCLC患者血清TK1水平明顯高于健康對(duì)照組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；NSCLC血清TK1水平 Ⅲ>Ⅳ>Ⅰ+Ⅱ>Tis,兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；手術(shù)后30 d NSCLC患者血清TK1水平明顯低于手術(shù)前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)；血清TK1水平與NSCLC患者是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.01)，與病理類(lèi)型、年齡、性別、是否吸煙均無(wú)相關(guān)性(P>0.05)；NSCLC患者TK1檢測(cè)具有較高敏感度與特異性。結(jié)論血清TK1水平檢測(cè)對(duì)NSCLC患者病情診斷有重要臨床意義。

胸苷激酶1；非小細(xì)胞肺癌；診斷

原發(fā)性支氣管肺癌簡(jiǎn)稱(chēng)肺癌，是起源于支氣管黏膜或腺體的惡性腫瘤。肺癌新發(fā)病人數(shù)1.6萬(wàn)/年，死亡人數(shù)140萬(wàn)/年，發(fā)病率與病死率均高居全世界癌癥首位[1]。肺癌按組織病理學(xué)類(lèi)型分為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)與小細(xì)胞肺癌，其中NSCLC占總肺癌病例數(shù)的近85%,嚴(yán)重威脅人類(lèi)的幸福健康[2]。在我國(guó)，據(jù)統(tǒng)計(jì),既往30年內(nèi)記錄在案(不包括眾多未登記失聯(lián)病例)肺癌死亡病例已增加了464.8%，目前人數(shù)還在逐年增長(zhǎng)[3]。究其原因，早期診斷困難致使預(yù)后較差等值得廣泛關(guān)注，而NSCLC一旦發(fā)現(xiàn)并開(kāi)始治療時(shí)，常已達(dá)晚期，錯(cuò)過(guò)最佳治療時(shí)期，故雖再經(jīng)多學(xué)科治療，仍然預(yù)后較差。而腫瘤標(biāo)志物胸苷激酶1(TK1)水平在腫瘤組織中或血清中的增加和腫瘤細(xì)胞DNA的合成相一致，故其在臨床上NSCLC的輔助診斷中引起了廣泛興趣[4]。本文主要通過(guò)檢測(cè)在NSCLC患者不同臨床特點(diǎn)下的外周血TK1水平并相互對(duì)比，研究TK1在NSCLC患者臨床診斷中的應(yīng)用，并對(duì)手術(shù)療效等方面做一定的評(píng)估，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料NSCLC組129例，為2014年6月至2015年6月本院胸外科住院患者，均結(jié)合影像學(xué)特征、組織活檢或胸腔積液細(xì)胞學(xué)檢查等明確診斷為NSCLC，病理標(biāo)本取材方法不一，有通過(guò)手術(shù)、穿刺、纖維支氣管鏡夾取等。其中NSCLC組男78例，女51例，年齡27～83歲，中位年齡61歲；并按國(guó)際抗癌聯(lián)盟(ULCC)制定的肺癌最新分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，其中屬于Ⅳ期的有39例，Ⅲ期的有42例，Ⅱ期的有20例，Ⅰ期的有14例，Tis期的有14例；NSCLC患者中尚伴有81例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者；按病理類(lèi)型分，其中68例為腺癌，40例為鱗癌，21例為大細(xì)胞肺癌；129例NSCLC患者中76例選擇了手術(shù)治療。對(duì)照組90例為本院健康查體者，其中52例是男性，其余均為女性，其年齡跨度大，25～90歲不等，中位年齡59歲，均無(wú)白血病、淋巴瘤等血液病，無(wú)嚴(yán)重心腦血管疾病及糖尿病等病史，肝功能、腎功能等檢測(cè)大致正常。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集晨起空腹時(shí)抽取靜脈血2 mL，3 h內(nèi)以3 000 r/min離心8 min，分離血清，分裝入2個(gè)離心管(分別用于初次檢測(cè)和復(fù)檢)，放入-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2檢測(cè)方法血清TK1檢測(cè)方法為免疫印跡增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法，檢測(cè)儀器為CIS-1化學(xué)發(fā)光數(shù)字成像分析儀，試劑盒與儀器均由深圳華瑞同康生物技術(shù)有限公司提供。試驗(yàn)步驟由專(zhuān)人嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。具體步驟如下：(1)吸取標(biāo)準(zhǔn)品及待測(cè)血清各2 mL點(diǎn)樣到硝酸纖維素膜上，室溫下自然晾干；(2)用配置的TBS振蕩洗膜3次，用Tris緩沖液配制的6%脫脂奶粉封閉1 h后去除封閉液；(3)加入適量的TK1抗體，室溫振蕩反應(yīng)2 h；(4)用TBS振蕩漂洗3次，加入生物素化二抗，室溫振蕩反應(yīng)40 min，洗滌同前；(5)加入鏈霉親和素辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物，室溫下振蕩反應(yīng)1 h；(6)洗滌，加ECL發(fā)光試劑，過(guò)膜浸濕，精確反應(yīng)1 min，將膜片用吸水紙吸干；(7)將膜放入CIS 1型化學(xué)發(fā)光數(shù)字成像分析系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行分析。以標(biāo)準(zhǔn)品的TK1水平為橫坐標(biāo)，測(cè)量數(shù)據(jù)為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可計(jì)算出待測(cè)血清的TK1水平。 健康對(duì)照組以及NSCLC組于治療前檢測(cè)血清TK1水平，其中76例NSCLC手術(shù)患者分別于手術(shù)后(7±1)和(30±2)d再次檢測(cè)血清TK1水平。

1.2.3觀察指標(biāo)TK1>2.0 pmol/L判定為陽(yáng)性[5]。

2　結(jié)　　果

2.1各病期NSCLC患者血清TK1水平與健康對(duì)照組的比較研究結(jié)果表明，129例NSCLC患者血清TK1水平顯著高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中Ⅰ+Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期血清TK1水平高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，Tis期血清TK1水平與健康對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。血清中TK1水平Ⅲ>Ⅳ>Ⅰ+Ⅱ>Tis，各病期之間比較，Tis和Ⅰ+Ⅱ、Ⅰ+Ⅱ和Ⅲ、Ⅲ和Ⅳ差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，結(jié)果表明NSCLC患者血清TK1水平與TNM分期密切相關(guān)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　　各病期NSCLC患者血清TK1水平與健康對(duì)照組的比較

注：與健康對(duì)照組比較,*P<0.05,#P>0.05;與Ⅰ+Ⅱ比較，△P<0.05;與Ⅲ比較，▲P<0.05;與Ⅳ比較，○P<0.05。

2.2NSCLC患者血清中TK1水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理類(lèi)型的關(guān)系淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者血清TK1水平明顯大于淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.872，t=-7.989,P=0.000)。鱗癌、腺癌、大細(xì)胞癌NSCLC患者之間血清TK1水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明NSCLC患者血清TK1水平同淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)，同病理類(lèi)型無(wú)關(guān)。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.376例NSCLC組術(shù)前、術(shù)后7 d與術(shù)后30 d血清中TK1水平比較129例NSCLC組患者中有76例患者進(jìn)行了手術(shù)治療，本研究隨訪該76例患者手術(shù)后7和30 d的血清TK1水平，詳見(jiàn)圖1。

表2　　NSCLC患者血清中TK1水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理類(lèi)型的關(guān)系

注：與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比較，*P<0.01；與腺癌組比較，△P>0.05；與大細(xì)胞癌組比較，▲P>0.05；與鱗癌組比較，○P>0.05。

圖1　76例NSCLC患者術(shù)前、術(shù)后7 d與術(shù)后30 d血清中TK1水平比較

從圖1中看出，術(shù)后1周血清TK1水平[(2.798±0.678)pmol/L]比術(shù)前[(2.268±0.356)pmol/L]略高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；術(shù)后30 d血清中TK1明顯下降[(1.023±0.489)pmol/L]，與術(shù)前相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=7.287,t=-4.851,P=0.001)。結(jié)果表明外周血TK1水平對(duì)術(shù)后療效監(jiān)測(cè)具有重要價(jià)值。

2.4NSCLC患者血清腫瘤標(biāo)志物TK1水平的敏感度與特異度NSCLC患者外周血TK1檢測(cè)的敏感度與特異度顯示，靈敏度=99/(99+30)=76.7%,假陰性率=30/(99+30)=23.3%;特異度=78/(12+18)=86.7%;假陽(yáng)性率=12/(12+78)=13.3%。提示NSCLC患者血清TK1水平監(jiān)測(cè)具有較高的靈敏度與特異度，在一定程度上可輔助臨床診斷NSCLC。

2.5NSCLC患者血清TK1水平與NSCLC患者年齡、性別及是否吸煙的關(guān)系見(jiàn)表3。

表3　　NSCLC患者血清TK1水平與NSCLC患者基本情況的關(guān)系

注：與≥60歲年齡組比較，#P>0.05；與女性組比較，△P>0.05；與吸煙組比較，○P>0.05。

結(jié)果表明，血清TK1水平與NSCLC患者年齡、性別及是否吸煙均無(wú)相關(guān)性(P>0.05)，具有一定可信度。

3　討　　論

腫瘤標(biāo)志物是由惡性增殖細(xì)胞的細(xì)胞DNA轉(zhuǎn)錄、翻譯并合成分泌的，部分已被人們研究利用的具有惡性腫瘤診斷與療效監(jiān)測(cè)作用的1種特殊的外周血物質(zhì)。全世界已發(fā)現(xiàn)的惡性腫瘤數(shù)不勝數(shù)，而肺癌是當(dāng)中最常見(jiàn)的死亡原因。臨床上意欲提高肺癌患者生存率，則必須依賴(lài)于早期診斷與早期治療。當(dāng)前綜合運(yùn)用多種可行性的措施，包括了實(shí)驗(yàn)室顯微鏡下病理診斷、特征性的影像學(xué)診斷，再結(jié)合其臨床典型癥狀與體征等，期待能盡早分辨良、惡性腫瘤并及時(shí)制訂下一步治療方案。但是對(duì)于部分復(fù)雜肺癌，影像學(xué)表現(xiàn)特異性不足，而病理學(xué)取材不易或取材陽(yáng)性率有限。外周血腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)具有快速、準(zhǔn)確、不良反應(yīng)小、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)。故其作為一類(lèi)基本無(wú)創(chuàng)而有效的檢查，可以輔助肺癌的精確、全面診斷。本研究NSCLC患者血清中TK1水平明顯高于健康對(duì)照組，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示其在NSCLC的臨床診斷中具有重要參考意義。這一研究結(jié)果與許多其他學(xué)者的研究結(jié)果基本一致[6-8]。血清中TK1水平Ⅲ>Ⅳ>Ⅰ+Ⅱ>Tis，各病期之間比較，Tis和Ⅰ+Ⅱ、Ⅰ+Ⅱ和Ⅲ、Ⅲ和Ⅳ差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組患者血清TK1水平明顯大于淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.872,t=-7.989,P=0.000)；結(jié)果表明NSCLC患者血清TK1水平與TNM分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。對(duì)于本研究中，TK1在Ⅰ+Ⅱ、Ⅲ期逐漸升高，在Ⅳ期反而降低，究其原因可能為腫瘤Ⅰ～Ⅲ期，增殖惡性程度升高，TK1升高，但到達(dá)Ⅳ期，由于能量供養(yǎng)不足造成的增殖放緩，及癌巢內(nèi)釋放蛋白水解等因素，造成TK1反而降低，張國(guó)慶等[9]也有相似的報(bào)道。

若腫瘤切除較為徹底或者完全清除，則腫瘤標(biāo)志物水平多下降，提示治療效果佳；若治療后腫瘤尚有殘留較多或腫瘤為多發(fā)性腫瘤難以清除完全，則腫瘤標(biāo)志物水平多維持較高水平。TK1是惡性增殖細(xì)胞DNA合成的關(guān)鍵酶，其作為1種高度特異性與敏感性的腫瘤標(biāo)志物，可檢測(cè)NSCLC癌細(xì)胞活性，故亦可借其判定NSCLC癌細(xì)胞的增殖度及該病的治療療效[10-11]。本研究76例NSCLC患者術(shù)后7 d血清中TK1比術(shù)前略高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而術(shù)后30 d血清中TK1明顯下降，與術(shù)前相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=7.287,t=-4.851,P=0.001)?？赡茉蚴?術(shù)后1周并發(fā)感染未完全恢復(fù);手術(shù)促使癌細(xì)胞釋放入血，導(dǎo)致術(shù)后血清TK1水平短暫升高；腫瘤切除后，隨著腫瘤細(xì)胞增殖活動(dòng)停止，血清中TK1水平逐漸恢復(fù)正常。這提示NSCLC患者血清TK1水平檢測(cè)對(duì)于手術(shù)療效監(jiān)測(cè)方面有重要參考價(jià)值。

TK1與細(xì)胞活躍度有關(guān)，在多種人類(lèi)常見(jiàn)的初發(fā)癌癥中,TK1在患者外周血中的水平均明顯升高，有著較高的陽(yáng)性檢出率，有學(xué)者做過(guò)研究，其陽(yáng)性率65%～95%[12]。本文研究結(jié)果顯示，TK1真陽(yáng)性率為76.7%，具有較高可信度；TK1真陰性率為86.7%，說(shuō)明其為1項(xiàng)具有高度特性的腫瘤標(biāo)志物，與部分學(xué)者研究結(jié)果類(lèi)似[6,13]。

肺癌有腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞癌、大細(xì)胞癌、腺鱗癌、類(lèi)癌、支氣管腺體癌等。我國(guó)近年來(lái)肺腺癌發(fā)病率漸漸超過(guò)鱗癌，躍居最常見(jiàn)的病理分類(lèi)[14]。本文中鱗癌、腺癌、大細(xì)胞癌NSCLC患者之間血清TK1水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明NSCLC患者血清TK1水平同病理類(lèi)型無(wú)關(guān)。

綜上可知，血清TK1表達(dá)水平與NSCLC患者臨床表現(xiàn)、病理分期等相關(guān)，血清TK1檢測(cè)對(duì)NSCLC早期診斷、指導(dǎo)治療、療效監(jiān)測(cè)等有重要的臨床意義。

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Application of serum TK1 levels in diagnosis of non small cell lung cancer

WANGBin1,LIGuofeng2,WANGJian2,WANGGuangsuo2,TANLiping3,YUEHuakui1,TANGQianhua1

(1.DepartmentofLaboratory,ShengzhenPeople′sHospital,Shengzhen,Guangdong,518020,China;2.DepartmentofThoracicSurgery,ShengzhenPeople′sHospital,Shengzhen,Guangdong,518020,China;3.DepartmentofScienceandEducation，ShengzhenPeople′sHospital,Shengzhen,Guangdong,518020,China)

ObjectiveTo investigate the variation of serum Thymidine Kinase 1(TK1) in patients with non-small cell lung cancer(NSCLC) and its clinical value．MethodsSerum TK1 level of 129 patients with NSCLC and 90 healthy volunteers were measured by sensitive chemiluminescence dot-blot assay.The serum TK1 level variation of 76 patients with NSCLC were compared before and after operation.ResultsSerum TK1 level of NSCLC patients were significantly higher than the level of healthy control group(P<0.05).Serum TK1 level in Stage Ⅲ>Stage Ⅳ>Stage Ⅰ+Ⅱ>Stage Tis,comparison between each other was of statistical difference(P<0.05).The serum TK1 level of NSCLC patients at 30th day after surgery was remarkably lower than which before surgery(P=0.001,P<0.01).The serum TKl level was correlated with lymphatic metastasis(P<0．01),but not with other factors such as pathology types,age,sex and smoking.The serum TK1 measurement was high sensitivity and specificity to the diagnosis of NSCLC.ConclusionThe serum TK1 level detection has important clinical significance in diagnosis and evaluation of NSCLC patients．

thymidine kinase 1；non-small cell lung cancer；diagnosis

王彬，女，主管技師，主要從事臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)及免疫學(xué)檢驗(yàn)方面的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.18.022

A

1673-4130(2016)18-2563-03

2016-04-17

2016-06-23)