宗萬里

（威海市食品藥品檢驗檢測中心，山東威海 264209）

氣相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定醬油中3-氯-1，2-丙二醇含量

宗萬里

（威海市食品藥品檢驗檢測中心，山東威海 264209）

建立了醬油中3-氯-1，2-丙二醇含量的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。樣品經(jīng)甲醇凈化定容后，將甲醇溶液注入氣相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀中進(jìn)行檢測。經(jīng)極性色譜柱分離，電子轟擊源離子化，以MRM方式對樣品中的3-氯-1，2-丙二醇含量進(jìn)行定性與定量分析。該方法測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于4%（n=6），平均回收率大于80%，線性范圍為0.05～1 μg/mL，最低檢出限為0.0012 μg/mL。

氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；多反應(yīng)離子監(jiān)測；醬油；3-氯-1，2-丙二醇

引用格式：宗萬里.氣相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法快速測定醬油中3-氯-1，2-丙二醇含量［J］.食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報，2016，34（4）:91-94.

ZONG Wanli.Determination of 3-monochloro-1，2-propanediol in soy sauce by GC-MS/MS［J］.Journal of Food Science and Technology，2016，34（4）:91-94.

加拿大科學(xué)家以雄性大鼠為研究對象，對水解動植物蛋白質(zhì)中的3-氯-1，2-丙二醇（3-monochloro-1，2-propanediol，3-MCPD）的健康風(fēng)險進(jìn)行了評估，認(rèn)為其無明顯作用水平是2 mg/（kg·bw·d），最低有害作用水平時，被實驗大鼠會產(chǎn)生腎腺瘤，最終成為癌癥［1］。英國研究人員發(fā)現(xiàn)用鹽酸水解植物蛋白水解液生產(chǎn)的調(diào)味品中會產(chǎn)生少量氯丙醇，而且最普遍的是3-MCPD［2］。我國現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)GB 2762—2012中對添加酸水解植物蛋白的液態(tài)調(diào)味料的3-氯-1，2-丙二醇限量要求為小于等于0.4 mg/kg［3］。因此，對醬油中3-MCPD含量的監(jiān)控與檢測就顯得十分重要。

目前測定食品中3-MCPD含量常用的檢測方法主要有氣相色譜法［4-5］、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法［6-11］，這些方法中多采取衍生化的方式對樣品進(jìn)行前處理，在衍生化的過程中對于條件的控制要求較高，而且衍生效率不高。氣相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜，具有選擇性強，儀器本底低，靈敏度高等優(yōu)點。本文嘗試基于氣相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜，建立不經(jīng)衍生化的氯丙醇檢測的方法，由于3-MCPD較易溶于甲醇的水溶液中，而且甲醇對醬油有一定的沉淀凈化作用，以甲醇對醬油凈化定容，離心并且過濾后，注入EI源-氣相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀中進(jìn)行分析測定，方法前處理簡單，定性準(zhǔn)確，靈敏度高。

1　材料與方法

1.1材料及實驗裝置

GC/MS-TQ8040型氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，EI源，日本島津公司；3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)品，100 μg/mL，上海安譜科學(xué)儀器有限公司；毛細(xì)管色譜柱，Rtx-WAX（強極性，30 m×0.25 mm×0.25 μm），Restek公司；甲醇，色譜純，Tedia公司；MS3 Digital型漩渦振蕩器，IKA公司；Neofuge 23R型臺式高速冷凍離心機，上海力申科學(xué)儀器有限公司；有機相針管濾頭，0.22 μm，Agela公司。

1.2氣相色譜分析參數(shù)

載氣為氦氣，流速為1.5 mL/min；SPL進(jìn)樣口，不分流進(jìn)樣，在進(jìn)樣完畢后，設(shè)定進(jìn)樣時間為2 min，2 min后分流閥自動打開，此時設(shè)定分流比為5∶1，可以將過多的溶劑排出，同時又不影響分析目標(biāo)物進(jìn)入柱子里面；進(jìn)樣口溫度200℃；柱溫箱程序升溫:初始溫度50℃，保持3 min，以20℃/min升至230℃，保持1 min。

1.3質(zhì)譜分析參數(shù)

EI離子源溫度200℃；接口溫度250℃；溶劑延遲4.5 min；檢測器電壓使用調(diào)諧電壓+0.6 V；MRM方式選擇監(jiān)測離子對79＞15（碰撞能量21 eV），79＞43（碰撞能量9 eV）；定量離子對為79＞43（碰撞能量9 eV）。

1.4標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

準(zhǔn)確吸取0.5 mL 3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)溶液至50 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得3-MCPD質(zhì)量濃度為1 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。從1 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液中分別吸取2.5，5，10，20 mL加入到4個的50 mL容量瓶中，用甲醇定容，得0.05，0.1，0.2，0.4，1.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。每個質(zhì)量濃度取1 μL注入氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行分析。

1.5樣品前處理

準(zhǔn)確稱取3.0 g醬油樣品于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度。然后將樣品溶液轉(zhuǎn)移到50 mL刻度離心管中，漩渦混勻1 min，使用高速離心機以8 000 r/min離心5 min，吸取甲醇溶液1 μL注入氣質(zhì)聯(lián)用儀分析。

2　結(jié)果與討論

由于3-MCPD較易溶于甲醇水溶液中，而且醬油中加入甲醇后，醬油中能產(chǎn)生明顯的絮狀沉淀，甲醇能夠?qū)︶u油產(chǎn)生一定的凈化作用，本方法前處理簡單。

2.1色譜柱的選擇

選用了Rxi-5 ms、Rxi-1701、Rxi-WAX等3種不同極性的色譜柱進(jìn)行測試。由于3-MCPD具有較大的極性，在極性柱子Rxi-WAX上具有較好的保留，而且峰形對稱尖銳，出峰時間適中，所以選用了Rxi-WAX。

2.2檢測譜圖分析

在1.2節(jié)及1.3節(jié)分析條件下，得到3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)樣品的SCAN方式下的質(zhì)譜圖（圖1），MRM方式下的質(zhì)譜圖（圖2），未知樣品的定量離子流圖（圖3）。

圖1　標(biāo)準(zhǔn)樣品的全掃描質(zhì)譜圖Fig.1 Mass spectrum of standard sample in SCAN mode

圖2　標(biāo)準(zhǔn)樣品在MRM方式下的質(zhì)譜圖Fig.2 Mass spectrum of standard sample in MRM mode

圖3　未知樣品在MRM方式下的質(zhì)量色譜圖Fig.3 Mass chromatogram of unknown sample in MRM mode

從圖1中可以看出，3-MCPD在EI源離子化方式下主要的離子碎片有44，61，79，本文選取質(zhì)量數(shù)較大，離子強度較高的79作為母離子，經(jīng)過儀器自帶的子離子掃描以及碰撞能量優(yōu)化功能，選取79＞15（碰撞能量21 eV），79＞43（碰撞能量9 eV）分別作為3-MCPD在MRM方式下檢測的定性及定量離子對。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線和最低檢出限

在實驗條件下，以峰面積y為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度x（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程，以基線噪聲3倍峰面積對應(yīng)的質(zhì)量濃度為檢出限（S/N=3）［12］，回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限見表1。

表1　回歸方程及參數(shù)Tab.1 Regression equation and parameters

2.4精密度和加標(biāo)回收實驗

取不含3-MCPD的醬油樣品進(jìn)行加標(biāo)回收實驗，向3 g醬油樣品中分別添加質(zhì)量濃度為1 μg/mL的3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)溶液0.6，1.2，3.0 mL使樣品中3-MCPD含量為0.2，0.4，1.0mg/kg。按1.4節(jié)步驟進(jìn)行提取，每個濃度水平重復(fù)測定6次。按1.2及1.3節(jié)條件進(jìn)行檢測，精密度和回收率計算結(jié)果列于表2。

表2　樣品添加回收和精密度Tab.2 Recovery and precision of spiked samples

2.5不同樣品中3-MCPD含量的測定

對6種市售醬油樣品進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果見表3。所有樣品均有3-MCPD檢出，其中最高值為0.398 mg/kg，最低值為0.245 mg/kg。

表3　不同樣品中3-MCPD的測定結(jié)果Tab.3 Results of 3-monochloro-1，2-propanediol in sauce samples

3　結(jié) 論

本文采用極性毛細(xì)管柱、EI源-氣相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法對醬油中3-MCPD的含量進(jìn)行測定，并進(jìn)行了方法學(xué)考察，方法的線性范圍寬，檢出靈敏度高，采用直接提取法的回收率較好，結(jié)果精密度小于4%。該方法前處理較為簡單，無需衍生處理、采用二級質(zhì)譜定性準(zhǔn)確，且干擾小，準(zhǔn)確度好。適用于醬油中3-MCPD含量的檢測，在實際的檢測工作中具有一定的參考價值，為今后進(jìn)行氯丙醇在氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜上的檢測研究提供一定的參考。

［1］ 江新業(yè).酸水解植物蛋白調(diào)味液中氯丙醇的危害與控制［J］.中國食品添加劑，2013（s1）:164-171.

JIANG X Y.Hazard and control of chloropropanols in acid hydrolyzed vegetable protein seasoning［J］.China Food Additives，2013（s1）:164-171.

［2］ 李健爽，王森，杜曉燕.食品中3-氯-1，2-丙二醇脂肪酸酯研究進(jìn)展［J］.食品工業(yè)科技，2013，34（6）: 385-388.

LI J S，WANG S，DU X Y.Research progress in the toxicity of 3-chloro-1，2-propanediol esters［J］.Science and Technology of Food Industry，2013，34（6）:385-388.

［3］ 中華人民共和國衛(wèi)生部.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中污染物限量:GB/T 2762—2012［S］.北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012.

［4］ 李吉平，高宏偉，劉文森，等.小口徑毛細(xì)管色譜柱測定醬油中三種氯丙醇含量的研究［J］.食品科學(xué)，2007，28（9）:473-477.

LI J P，GAO H W，LIU W S，et al.Determination of three chloropropanols in soy sauce by gas chromatography of microstomia caliber capillary column［J］.Food Science，2007，28（9）:473-477.

［5］ 盧業(yè)舉，陳戈，夏春.利用大口徑毛細(xì)管色譜柱測定調(diào)味品中氯丙醇含量［J］.安徽化工，2002（3）:48-49.

LU Y J，CHEN G，XIA C.Determination of chloropropanol by big caliber capillary gas chromatography in condiments［J］.Anhui Chemical Industry，2002（3）: 48-49.

［6］ 于杰，李曉玉，隋濤.GC-MS快速檢測醬油中的3-氯-1，2-丙二醇［J］.廣州化工，2011，39（11）:106-107.

［7］ 馬金渡，張琦，欒燕，等.MSPD-GC-MS同時測定醬油及調(diào)味液中多組分3-氯-1，2-丙二醇［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2007，17（4）:583-585.

MA J B，ZHANG Q，LUAN Y，et al.Determination of dichloropanols and monochloropanediols in soy sauce by MSPD-GC-MS using stable isotope dilution technique［J］.Chinese Journal of Health Laboratory Technology，2007，17（4）:583-585.

［8］ 吳小瓊，陳中文，管健，等.固相萃取-同位素內(nèi)標(biāo)GCMS法測定醬油中的4種氯丙醇［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2014，24（10）:1422-1424.

WU X Q，CHEN Z W，GUAN J，et al.Determination of 4 chloropropanols in soy by SPE-GC/MS using isotope internal standard［J］.Chinese Journal of Health Laboratory Technology，2014，24（10）:1422-1424.

［9］ 徐小民，沈向紅，宋國良，等.氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用負(fù)化學(xué)源法檢測方便面調(diào)料包中的氯丙醇［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2006，16（6）:661-662，726.

XU X M，SHEN X H，SONG G L，et al.Determination of chloropropanols in flavoring of instant noodles by gas chromatography-mass spectrometry with negative chemical ionization［J］.Chinese Journal of Health Laboratory Technology，2006，16（6）:661-662，726.

［10］ 傅武勝，吳永寧，趙云峰，等.穩(wěn)定性同位素稀釋技術(shù)結(jié)合GC-MS測定醬油中多組分氯丙醇的研究［J］.中國食品衛(wèi)生雜志，2004，16（4）:289-294.

FU W S，WU Y N，ZHAO Y F，et al.Determination of dichloropropanols and monochloropropanediols in soy sauce by capillary gas chromatography/ion trap mass spectrometry using stable isotope dilution technique［J］. Chinese Journal of Food Hygiene，2004，16（4）:289-294.

［11］ 王順民，董文賓，于琴，等.用氣相色譜及質(zhì)譜分析技術(shù)測定調(diào)味品中的氯丙醇［J］.食品研究與開發(fā)，2005，26（2）:123-126.

WANG S M，DONG W B，YU Q，et al.The application of modern gas chromatography and mass sepectrometry in the analysis of chloropropanol in condiment［J］. Food Research and Development，2005，26（2）:123-126.

［12］ 中華人民共和國衛(wèi)生部.食品衛(wèi)生檢驗方法理化部分總則:GB/T 5009.1—2003［S］.北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003.

Determination of 3-Monochloro-1，2-propanediol in Soy Sauce by GC-MS/MS

ZONG Wanli
（Weihai Supervision and Inspection Institute of Product Quality，Weihai 264209，China）

A method for determination of 3-monochloro-1，2-propanediol in soy sauce by gas chromatography-tandem mass spectrometry（GC-MS/MS）was established.The sample was injected into GC-MS/MS after cleaned and extracted by methanol.The qualitative and quantitative analysis was achieved by EI source，polarity capillary column，and MRM method.The RSD of the method was less than 4%（n= 6），and average recovery was more than 80%.The liner range was in 0.05-1 μg/mL and the limit of detection（LOD）was 0.001 2 μg/mL.

GC-MS/MS；MRM；soy sauce；3-monochloro-1，2-propanediol

TS264.2

A

10.3969/j.issn.2095-6002.2016.04.016

2095-6002（2016）04-0091-04

（責(zé)任編輯:李 寧）

20150618

宗萬里，男，工程師，主要從事食品檢測方面的研究。