黃　萍吳勝英江雪蓮△

（1.湖北省十堰市太和醫(yī)院，湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院，湖北　十堰442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院病理生理教研室，湖北　十堰442000）

·研究報(bào)告·

丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)高血壓模型犬冠狀動(dòng)脈螺旋條舒縮功能的實(shí)驗(yàn)研究*

黃萍1吳勝英2江雪蓮1△

（1.湖北省十堰市太和醫(yī)院，湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬醫(yī)院，湖北十堰442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院病理生理教研室，湖北十堰442000）

目的觀察丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)高血壓模型模型犬冠狀動(dòng)脈螺旋條舒縮作用的影響，探討其作用機(jī)制。方法犬6只，于左腎動(dòng)脈上0.5 cm處行腹主動(dòng)脈環(huán)扎縮窄術(shù)，造成心臟后負(fù)荷增加而復(fù)制犬腹主動(dòng)脈狹窄型高血壓動(dòng)物模型，8周以后麻醉處死后分別取冠狀動(dòng)脈并制成寬2mm，長5mm的18條冠狀動(dòng)脈螺旋條，將動(dòng)脈螺旋條標(biāo)本隨機(jī)分為對(duì)照組、酚妥拉明組、丹參酮ⅡA磺酸鈉組，用1%去甲腎上腺素分別加入兩組標(biāo)本中預(yù)激使之達(dá)到最大收縮峰值，在每組依次加入10-5～10-1mol/L相應(yīng)藥物，測定其對(duì)犬冠狀動(dòng)脈螺旋條舒縮張力，計(jì)算其半抑制濃度（IC50）及量效曲線。結(jié)果10-3～10-1mol/L的丹參酮ⅡA磺酸鈉可明顯抑制去甲腎上腺素預(yù)激引起的犬冠狀動(dòng)脈螺旋條收縮張力，IC50值及量效曲線最大反應(yīng)明顯降低，與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論10-3～10-1mol/L的丹參酮ⅡA磺酸鈉可抑制去甲腎上腺素引起的冠脈收縮，其作用機(jī)制可能與α受體阻斷劑酚妥拉明類似，具有阻斷α受體及外鈣內(nèi)流、抑制平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣釋放而降低冠狀動(dòng)脈收縮的作用。

丹參酮ⅡA磺酸鈉高血壓模型犬冠狀動(dòng)脈舒縮功能鈣通道

【Abstract】Objective：To establish themodel of canine hypertension，and to observe the effect and mechanism of Sodium tanshinoneⅡA sulfonate on diastolic function of coronary artery strips in Hypertension model dog. M ethods：6 dogs were given the left renal artery for 0.5 cm at the abdominal aorta constriction caused by cerclage to copy canine abdominal aortic stenosis hypertension animalmodel of increased cardiac load.8 weeks later，animals were anaesthetized and taken into the coronary artery to make 18 coronary arterial strips 2 mm wide and 5mm long.Arterial stripswere random ly divided into the control group，phentolamine group，tanshinoneⅡA sodium sulfonate group.1%norepinephrine was added in two groups for pre-excitation to achievemaximum systolic peak，followed by 10-5～10-1mol/L of sodium tanshinone A sulfonate，and determined the tension of canine coronary artery，calculate the half inhibitory concentration（IC50）and dose effect curve.Results：10-3～10-1mol/L tanshinoneⅡa sulfonate sodium inhibited norepinephrine preexcitation caused by canine coronary artery contraction tension，with IC50values of and dose-response curve ofmaximum response decreased significantly，and compared to the control group（P＜0.05），the differences were statistically significant.Conclusion：10-3～10-1mol/L tanshinoneⅡa sulfonate sodium can inhibit the norepinephrine induced coronary artery contraction，whose mechanism may be similar to alpha receptor blocking agent phentolaminer，with a blocking alpha receptors and extracellular calcium flow，inhibition of smooth muscle cell intracellular calcium to release and reduce coronary artery systolic function.

【Key words】Sodium tanshinoneⅡA sulfonate；Hypertensionmodel dog；Coronary artery；Diastolic function；Calcium channel

丹參酮ⅡA磺酸鈉是由中藥丹參、紅花配伍，經(jīng)現(xiàn)代工藝提取、純化、精制而成的中藥酮類化學(xué)物質(zhì)［1］。《吳普本草》言丹參“味辛性涼、治心肌腹痛”?！端幤坊x》言紅花“味辛性溫、善通利經(jīng)脈”［2］。未純化前的丹參主要有效成分包括丹參酚酸、丹參酮、紅花黃素、黃酮類化合物等，兩藥合用具有“涼血消癰、調(diào)經(jīng)鎮(zhèn)痛、活血通經(jīng)、散癖鎮(zhèn)痛，益氣固脫，養(yǎng)陰生津生脈之功效［3］。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)丹參酮ⅡA磺酸鈉主要藥理作用為擴(kuò)張冠脈，增強(qiáng)心肌收縮力的作用［4］。以往對(duì)丹參酮ⅡA磺酸鈉的研究多局限在整體動(dòng)物或臨床應(yīng)用方面，而對(duì)離體實(shí)驗(yàn)特別是離體冠狀動(dòng)脈舒縮功能的影響及其作用機(jī)制卻鮮有報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)以去甲腎上腺素預(yù)激犬離體冠狀動(dòng)脈螺旋條，系統(tǒng)觀察丹參酮ⅡA磺酸鈉及α-受體阻斷劑酚妥拉明對(duì)犬離體冠狀動(dòng)脈螺旋條的影響，分析丹參酮ⅡA磺酸鈉與α-受體及鈣通道的相互關(guān)系，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物普通級(jí)健康成年雜種犬6只，雌雄兼用，體質(zhì)量10～12 kg，由湖北醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施使用許可證號(hào)：SYXK（鄂）2011-0031，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（鄂）2011-0008。

1.2試藥與儀器BL-420F生物信號(hào)采集記錄系統(tǒng)（成都泰盟電子有限公司，型號(hào)BL-420F）；HV-4離體組織器官恒溫灌流儀（成都泰盟電子有限公司，型號(hào)HV-4）；大鼠尾動(dòng)脈血壓計(jì)（成都泰盟電子有限公司，型號(hào)Medlab-u/4c501）；Tripette（100～1000μL）移液器；酚妥拉明（揚(yáng)州制藥有限公司，批號(hào)H20063706）；去甲腎上腺素（武漢遠(yuǎn)大制藥集團(tuán)有限公司，批號(hào)080203）；戊巴比妥鈉（北京化學(xué)試劑公司，批號(hào)061222）；Krebs-Henseleit（KH）營養(yǎng)液，用1 mol/L HCl調(diào)pH至7.4，通混合氣體（95%O2+5%CO2）。丹參酮ⅡA磺酸鈉（菏澤步長制藥有限公司，批號(hào)Z20026866）。

1.3模型制備參照文獻(xiàn)［5］，腹腔注射3%戊巴比妥鈉（40 mg/kg）麻醉犬，仰位固定后用碘伏胸腹部消毒，腰椎4～6左側(cè)切口暴露左腎動(dòng)脈及腹主動(dòng)脈，將8號(hào)針頭與腹主動(dòng)脈平行放置并用線結(jié)扎，使腹主動(dòng)脈內(nèi)徑減少1/2，然后抽去針頭，關(guān)閉腹腔碘伏消毒，20mg/100 g肌肉注射慶大霉素，連續(xù)用藥1周預(yù)防感染。造模8周后用無創(chuàng)尾動(dòng)脈血壓計(jì)測定模型犬血壓，以≥20 kPa為造模成功。本組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全部造模成功。術(shù)后動(dòng)物福利：飼養(yǎng)要求滿足實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理［6］，飼養(yǎng)環(huán)境要求動(dòng)物房怛溫（22℃，濕度65%～75%），單籠飼養(yǎng)以防止咬傷，交替光照；自由飲水，高脂飼料喂養(yǎng)，觀察動(dòng)物飲水進(jìn)食情況，及時(shí)清理糞便［7］。

1.4標(biāo)本采集與檢測參照文獻(xiàn)［8］，8周后用3%戊

巴比妥鈉麻醉造模型成功犬，開胸取出心臟，置于4℃，95%O2+5%CO2混合氣體充氣30 min的飽和KH氏營養(yǎng)液中，迅速分離犬心左冠狀動(dòng)脈前降支，剔除結(jié)締組織，剪成寬成寬2mm，長5 mm的動(dòng)脈螺旋條18條，采用隨機(jī)數(shù)字表，將制備的犬離體冠狀動(dòng)脈前降支螺旋條標(biāo)本隨機(jī)分為對(duì)照組、丹參酮ⅡA磺酸鈉組，酚妥拉明組，每組6例。將丹參酮ⅡA磺酸鈉組標(biāo)本懸掛于37℃20mL KH氏營養(yǎng)液的恒溫浴槽中，一端接張力轉(zhuǎn)感器與BL-420F生物信號(hào)采集系統(tǒng)相連，一端固定于恒溫浴槽通氣鉤上，標(biāo)本均加1 g的前負(fù)荷，恒溫浴槽充95%O2+5%CO2混合氣體，氣體流量1mL/min。將犬冠狀動(dòng)脈血管螺旋條在KH氏液中平衡溫孵30min，加入去甲腎上腺素預(yù)激，待收縮幅度達(dá)峰值后用移液器準(zhǔn)確按10-5～10-1mol/L依次加入不同濃度的丹參酮ⅡA磺酸鈉100μL，采用BL-420F生物信號(hào)采集系統(tǒng)記錄以上標(biāo)本的收縮、舒張張力（g）。對(duì)照組加入等體積生理鹽水，酚妥拉明組依次加入10-5～10-1mol/L的酚妥拉明100μL，其余處理同丹參酮ⅡA磺酸鈉。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。數(shù)據(jù)以（表示，組間比較差異采用Dunnet t檢驗(yàn)，不同濃度丹參酮ⅡA磺酸鈉（10-5～10-1mol/L）對(duì)冠狀動(dòng)脈血管螺旋條的影響采用重復(fù)測量方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1各組半抑制濃度（IC50）值比較見表1，酚妥拉明組IC50在10-4mol/L，丹參酮ⅡA磺酸鈉組的IC50為10-3，并且其在10-3～10-1mol/L之間可以劑量依賴性地抑制去甲腎上腺素引起的犬離體冠狀動(dòng)脈螺旋條的收縮。

表1　各組IC50值比較（mol/L，

表1　各組IC50值比較（mol/L，

與對(duì)照組比較，△P＜0.05。下同。

組別n 10-510-410-310-210-1對(duì)照組6酚妥拉明組6 96.39±8.97 85.63±7.29 65.43±6.91 94.30±8.48 51.24±5.32△41.53±4.39△53.19±5.20 14.18±1.24 30.02±5.20△26.82±1.35△丹參酮ⅡA磺酸鈉組6 92.48±8.01 80.54±7.05 50.03±5.13△42.54±4.61△37.23±0.75△

2.2各組量效曲線（%）比較見圖1。對(duì)照組對(duì)去甲腎上腺素致外源性鈣收縮張力無明顯影響，量效曲線無下移。酚妥拉明組10-4、10-3、10-2、10-1mol/L均可明顯使量效曲線明顯下移。丹參酮ⅡA磺酸鈉組10-3、10-2、10-1mol/L 3個(gè)濃度明顯降低去甲腎上腺素引起的外源性鈣收縮張力，其最大反應(yīng)壓低、量效曲線明顯下移，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖1　冠狀動(dòng)脈環(huán)收縮張力量效曲線圖

2.3各組犬冠狀動(dòng)脈收縮張力比較見表2。對(duì)照組、酚妥拉明組、丹參酮ⅡA磺酸鈉組3組犬離體冠狀動(dòng)脈螺旋條，在以去甲腎上腺素灌流預(yù)激后很快達(dá)到最大收縮峰值，與預(yù)激前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明離體冠狀動(dòng)脈螺旋條活性及反應(yīng)性均正常。對(duì)照組在給藥后收縮張力無明顯變化，與預(yù)激前比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。酚妥拉明組加入酚妥拉明后，收縮張力明顯降低，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。丹參酮ⅡA磺酸鈉組在加入10-3、10-2、10-1mol/L 3個(gè)濃度后平均收縮張力明顯降低，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。說明丹參酮ⅡA磺酸鈉可抑制去甲腎上腺素預(yù)激冠狀動(dòng)脈螺旋條平滑肌細(xì)胞的內(nèi)鈣釋放，降低冠狀動(dòng)脈收縮張力。其作用與α-受體阻斷劑酚妥拉明類似。

表2　各組犬冠狀動(dòng)脈收縮張力比較（g，

表2　各組犬冠狀動(dòng)脈收縮張力比較（g，

與預(yù)激前比較，▲P＜0.05。

10-210-14.16±0.27 4.27±0.28 4.11±0.23 4.18±0.19 4.15±0.41 4.19±0.31（n=6）　給藥后3.53±0.22△3.24±0.17△2.52±0.18△1.02±0.09△0.82±0.09△丹參酮ⅡA磺酸鈉組　預(yù)激前4.42±0.36 4.39±0.28 4.11±0.45 4.37±0.53 4.26±0.33（n=6）　給藥后4.40±0.21 3.33±0.21 2.97±0.16△▲2.11±0.11△▲1.08±0.12△▲組別　時(shí)間對(duì)照組　預(yù)激前（n=6）　給藥后酚妥拉明組　預(yù)激前10-510-410-34.46±0.23 4.42±0.30 4.37±0.24 4.32±0.21 4.37±0.22 4.43±0.22 4.40±0.30 4.25±0.26 4.34±0.29

2.4組犬冠狀動(dòng)脈舒張張力比較見表3。丹參酮ⅡA磺酸鈉組在加入10-3、10-2、10-1mol/L 3個(gè)濃度后平均舒張張力明顯降低，與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表3　各組犬冠狀動(dòng)脈舒張張力比較（g，

表3　各組犬冠狀動(dòng)脈舒張張力比較（g，

組別n 10-510-410-310-210-1對(duì)照組6酚妥拉明組6 2.02±0.21 2.10±0.22 2.03±0.21 2.06±0.23 1.03±0.14△0.85±0.12△2.01±0.19 2.09±0.20 0.57±0.10△0.29±0.07△丹參酮ⅡA磺酸鈉組6 2.04±0.22 1.72±0.11 1.21±0.09△1.03±0.12△0.91±0.10△

3　討　論

高血壓是老年常見心血管疾病，發(fā)病率有隨年齡增長而增高的趨勢(shì)，40歲以上者發(fā)病率高，2005年高血壓調(diào)查顯示有至少1.6億人罹患高血壓，患病率達(dá)18.8%［9］，故積極防治高血壓心臟病尤其重要。高血壓治療方案多以單獨(dú)或者聯(lián)合使用噻嗪類利尿劑、β受體阻滯劑等，現(xiàn)在大量中藥及其制劑應(yīng)用于臨床治療心血管疾病取得了肯定療效。有研究表明丹參酮ⅡA磺酸鈉有抑制去甲腎上腺素引起家兔離體動(dòng)脈收縮、降低冠脈阻力及動(dòng)脈血壓、增加冠脈流量的作用［10-11］。

觀察發(fā)現(xiàn)，10-3～10-1mol/L丹參酮ⅡA磺酸鈉可劑量依賴性地抑制去甲腎上腺素引起的犬離體冠狀動(dòng)脈螺旋條的收縮舒張功能，其收縮張力及舒張張力均明顯下降，IC50為10-3mol/L處，其最大反應(yīng)壓低、量效曲線平行后移。實(shí)驗(yàn)中隨丹參酮ⅡA磺酸鈉濃度增高，其以上反應(yīng)更加明顯，說明丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)去甲腎上腺素引起的犬離體冠狀動(dòng)脈螺旋條收縮具有拮抗作用，且丹參酮ⅡA磺酸鈉可劑量依賴性地抑制去甲腎上腺素對(duì)外源性鈣內(nèi)流（KH液中的Ca2+）所引起的犬冠狀動(dòng)脈螺旋條的收縮。分析認(rèn)為，丹參酮ⅡA磺酸鈉有Ca2+拮抗作用，可減少Ca2+內(nèi)流。去甲腎上腺素是α1受體激動(dòng)劑，可促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞膜上的鈣通道開放，并通過第2信使IP3的作用使細(xì)胞內(nèi)鈣釋放［12］，促進(jìn)KH液中的Ca2+內(nèi)流引起肌張力升高［13］。由于犬冠狀動(dòng)脈螺旋條平滑肌細(xì)胞上分布有交感縮血管纖維，其末梢釋放去甲腎上腺素，故其冠脈螺旋條收縮也是通過增加平滑肌細(xì)胞內(nèi)的Ca2+實(shí)現(xiàn)，如細(xì)胞內(nèi)鈣釋放和外鈣內(nèi)流［14-15］。故本研究以α1受體激動(dòng)劑去甲腎上腺素預(yù)激使犬冠狀動(dòng)脈螺旋條平滑肌收縮，以觀察丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)血管平滑肌細(xì)胞鈣通道與外鈣內(nèi)流和內(nèi)鈣釋放對(duì)血管收縮功能的影響。實(shí)驗(yàn)中當(dāng)KH液中加入去甲腎上腺素時(shí)可激活冠狀動(dòng)脈螺旋條平滑肌上分布的α1受體，α1受體激動(dòng)時(shí)可引起平滑肌細(xì)胞釋放Ca2+，促進(jìn)細(xì)胞膜上的鈣通道開放并通過第2信使IP3的作用使細(xì)胞內(nèi)鈣釋放引起肌張力升高，故標(biāo)本在加入去甲腎上腺素預(yù)激均可使犬冠狀動(dòng)脈螺旋條平滑肌收縮張力增強(qiáng)。在依次加入10-5、10-4、10-3、10-2、10-1mol/L的丹參酮ⅡA磺酸鈉后，10-3、10-2、10-1mol/L 3個(gè)濃度能抑制去甲腎上腺素預(yù)激引起的冠狀動(dòng)脈螺旋條收縮，IC50為在10-3mol/L，其最大反應(yīng)壓低、量效曲線平行后移。說明丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)去甲腎上腺素可能存在拮抗作用。實(shí)驗(yàn)量效曲線顯示丹參酮ⅡA磺酸鈉可劑量依賴性地抑制去甲腎上腺素對(duì)外源性鈣內(nèi)流所引起的冠狀動(dòng)脈螺旋條的收縮。提示丹參酮ⅡA磺酸鈉抑制冠脈收縮張力的作用可能與其降低外鈣內(nèi)流相關(guān)，這進(jìn)一步揭示丹參酮ⅡA磺酸鈉可能具有阻斷α1受體效應(yīng)。

綜上所述，丹參酮ⅡA磺酸鈉可抑制去甲腎上腺素引起的冠脈收縮，其作用機(jī)制可能與α受體阻斷劑酚妥拉明類似，具有阻斷α受體，抑制平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣釋放及外鈣內(nèi)流而降低冠狀動(dòng)脈收縮的作用。

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Experimental Research of Sodium TanshinoneⅡA Sulfonate on Diastolic Function of Coronary Artery Strips in Hypertension M odel Dog

HUANG Ping，WU Shengying，JIANG Xuelian.Dermatologist of Taihe Hospital of Shiyan（HubeiMedical College Affiliated Hospital），Hubei，Shiyan 442000，China.

R285.5

A

1004-745X（2016）09-1686-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.09.012

2015-10-26）

湖北省教育廳重點(diǎn)項(xiàng)目（D20092404）

（電子郵箱：chends1226@163.com）