孟 梁， 張文文， 朱彬玲， 鄭可芳

(1.福建警察學院刑事科學技術(shù)系，福建福州 350007；2.北京市公安局公安交通管理局，北京 100037)

目前，世界范圍內(nèi)的毒品濫用現(xiàn)象依然嚴重[1]，而我國毒品犯罪也呈逐年上升趨勢，尤其是近期在非法毒品交易市場以及娛樂場所中出現(xiàn)“奶茶”、“開心粉”和“神仙水”等混合型毒品[2]。這類毒品多以奶茶、咖啡、茶葉包等包裝掩飾，迷惑性很強，攝入人體后持續(xù)時間較長，社會危害性極大。因此，為了有效打擊毒品犯罪，對此類混合毒品及代謝物的同時檢測極其重要。但是生物樣品基質(zhì)組成復雜，目標分析物含量通常較低，檢測前需采用有效地凈化、富集技術(shù)。中空纖維膜液相微萃取(Hollow Fiber Liquid-phase Microextraction，HF-LPME)前處理方法克服了傳統(tǒng)萃取技術(shù)的諸多不足，特別適合生物樣品中分析物的萃取、凈化和富集。

毒品的儀器分析方法有很多種[3 - 8]，而氣相色譜/三重四級桿質(zhì)譜的多反應監(jiān)測(MRM)模式，可以消除雜質(zhì)的干擾，提高檢測靈敏度，適合生物樣品中的痕量分析物檢測。本研究采用正交試驗優(yōu)化影響萃取富集效率的因素，建立了人體尿液和血液樣品中苯丙胺、甲基苯丙胺、3,4-(亞甲二氧基)甲基苯丙胺、3,4-(亞甲二氧基)苯丙胺、氯胺酮、甲卡西酮、哌替啶和美沙酮8種毒品的中空纖維膜液相微萃取方法，并利用氣相色譜/三重四級桿質(zhì)譜(GC-QQQ-MS)法進行分析。該方法已成功地用于吸毒人員血液中苯丙胺類毒品的檢測。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

7890A-7000A氣相色譜/三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國，安捷倫公司)；TDL-16C高速離心機(上海安亭科學儀器廠)。

鹽酸氯胺酮(Ketamine，K)、鹽酸甲基苯丙胺(Methamphetamine，MA)、鹽酸甲卡西酮(Methcathinone，MACT)、鹽酸苯丙胺(Amphetamine，AM)、鹽酸美沙酮(Methadone，MTD)、鹽酸3,4-(亞甲二氧基)甲基苯丙胺(3,4-Methylenedioxymethamphetamine，MDMA)、鹽酸哌替啶(Meperidine，MPD)和鹽酸3,4-(亞甲二氧基)苯丙胺(3,4-Methylenedioxyamphetamine，MDA),均購于公安部物證鑒定中心(中國藥品生物制品檢定所生產(chǎn))。內(nèi)標物1-(2-甲氧基苯基)哌嗪(1-(2-Methoxyphenyl)piperazine，2-MeOPP)，購于百靈威試劑公司。甲苯、環(huán)己酮、鄰二甲苯、乙酸丁酯、正壬醇、正辛醇、乙酸辛酯和苯等試劑均為分析純，購于國藥集團化學試劑有限公司。有機溶劑使用前需要重蒸餾以除去雜質(zhì)。

1.2 儀器條件

色譜柱為DB-5MS石英毛細管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm，美國安捷倫公司)；柱升溫程序：初始溫度100 ℃，保持2 min，然后以20 ℃·min-1的速率升溫至300 ℃，保持6 min；進樣口溫度260 ℃；傳輸線溫度280 ℃；EI離子源溫度230 ℃，電子能量70 eV；載氣為高純He，流速1.2 mL·min-1；進樣方式為不分流；溶劑延遲3.5 min；掃描范圍為m/z40～500，優(yōu)化后的MRM條件見表1。

表1 GC/QQQ/MS定性、定量選擇監(jiān)測離子

1.3 HF-LPME步驟

取1 mL尿液或者血液樣品于10 mL樣品瓶中，加入8 mL 100 mmol·L-1氨水調(diào)節(jié)pH至13.0，并放入直徑8 mm的磁轉(zhuǎn)子。兩個常規(guī)醫(yī)用注射器針頭(0.8 mm o.d.)穿過密封蓋的硅膠墊片，末端分別插入到4 cm長的中空纖維膜的兩端，深度約2 mm。將中空纖維膜浸到有機萃取溶劑甲苯中10 s，將甲苯完全浸潤中空纖維膜的孔隙，再用25 μL的微量進樣器將10 μL的甲苯通過注射器針頭注入到中空纖維膜內(nèi)腔里。然后迅速置于樣品溶液中，密封樣品瓶并放到恒溫磁力攪拌水浴鍋(500 r·min-1，30 ℃)里萃取10 min。萃取后，從中空纖維膜里抽出萃取溶劑置于微量進樣瓶中進行GC-MS分析。每一根中空纖維膜使用一次后丟棄。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件優(yōu)化

在m/z40～500范圍內(nèi)進行全掃描，以選擇合適的母離子，然后在MS/MS模式下選出與母離子相應的子離子，在MRM模式下考察5～25 eV的碰撞能量，選出最佳碰撞能量(表1)。采用MRM模式可以消除樣品基質(zhì)干擾，提高檢測準確度和靈敏度。因此實驗選擇在MRM模式下進行檢測。

2.2 HF-LPME萃取條件優(yōu)化

2.2.1萃取溶劑的選擇實驗考察了甲苯、環(huán)己酮、鄰二甲苯、乙酸乙酯、乙酸辛酯、正壬醇和正辛醇7種有機溶劑對目標物的萃取效果。結(jié)果表明，甲苯、乙酸乙酯、鄰二甲苯和乙酸辛脂的萃取效果較好(圖1)，但是鄰二甲苯和乙酸辛脂萃取后的色譜峰形較差，而乙酸乙酯對于尿液中堿性物質(zhì)的提取率也較高，萃取雜質(zhì)含量較多。因此，選取甲苯為萃取溶劑。

2.2.2樣品溶液pH值的選擇由于目標分析物均屬于堿性藥物[9]，實驗考察了樣品溶液在堿性條件下的萃取效率，結(jié)果見圖2。目標物的峰面積隨pH值的增加而增加，pH=13.0時達到了峰值，隨后峰面積略有降低，可能是由于生物樣品中堿性雜質(zhì)與目標物形成競爭作用。因此，本實驗選取的溶液pH值為13.0。

圖1 不同萃取溶劑對萃取效率的影響Fig.1 Effect of different solvent on extraction efficiency extraction conditions:sample solution:1.0 mL,pH=13.0;length of hollow fiber:5 cm;extraction time:15 min;extraction temperature:30 ℃;stirring speed:600 r·min-1.concentration of each drug:250 ng·mL-1;internal standard:2-MeOPP,5 μg·mL-1.

圖2 樣品溶液pH值對萃取效率的影響Fig.2 Effect of pH of sample solution on extraction efficiency extraction conditions:sample solution:1.0 mL of toluene;length of hollow fiber:5 cm;extraction solvent:toluene;extraction time:15 min;extraction temperature:30 ℃;stirring speed:600 r·min-1.Concentration of each drug:250 ng·mL-1;internal standard:2-MeOPP,5 μg·mL-1.

2.2.3正交試驗設(shè)計除了上述兩個影響萃取效率的關(guān)鍵因素，剩余的影響萃取效率四個因素即中空纖維膜長度(A)、萃取溫度(B)、攪拌速率(C)和萃取時間(D)采用4因素3水平正交試驗設(shè)計L9(34)進行優(yōu)化。通過各因素及水平對各分析物相對峰面積的影響情況，以及極差分析可得到影響萃取效果的顯著因素。各影響因素對萃取效率的影響程度為A>B>C>D，即中空纖維膜長度是主要影響因素，其次是萃取溫度和攪拌速率，萃取時間影響最小。各因素最優(yōu)水平組合為A2B2C3D1，即中空纖維膜長度為5 cm，萃取溫度為30 ℃，攪拌速率為600 r·min-1和萃取時間為15 min。

2.3 方法的線性范圍、檢出限和重現(xiàn)性

在優(yōu)化條件下，采用加標尿液和血液樣品考察了方法的線性范圍、檢出限和重現(xiàn)性，結(jié)果見表2，加標色譜圖見圖3。所分析毒品在0.0003～10 μg·mL-1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)(R)在0.9985～0.9995之間；檢出限(S/N=3)為0.05～0.5 ng·mL-1；加標回收率為79.3%～98.6%，相對標準偏差(RSD)為1.2%～4.5%。不論是較為潔凈的尿液樣品還是組成復雜的血液樣品，MRM離子流色譜圖幾乎沒有雜質(zhì)峰，兩者也差別不大，表明中空纖維膜對生物樣品中的雜質(zhì)具有良好的阻隔作用。結(jié)果表明，本方法具有很高的靈敏度和較好的重現(xiàn)性，適合具有復雜組成的生物樣品中多種毒品的分析檢測。

表2 方法的線性范圍、檢出限和重現(xiàn)性

(續(xù)表2)

SampleAnalyteLinearity(μg·mL-1)RLOD(ng·mL-1)Added(ng)Recovery(%)RSD(%,n=5)MPD0.00075-100.99860.255085.33.320083.63.2MTD0.0006-100.99940.25079.53.020088.62.8MA0.0003-100.99910.15085.93.120079.74.2AM0.0006-100.99950.25082.12.920082.21.9MDMA0.0008-100.99880.45088.32.520082.21.8MDA0.0015-100.99890.55079.33.4Urine20080.23.2MACT0.0003-100.99880.15082.32.920081.42.9K0.00075-100.99930.255090.11.820098.63.1MPD0.0075-100.99920.255084.52.420079.42.3MTD0.0015-100.99870.055084.42.920083.52.6

圖3 優(yōu)化條件下加標樣品中8種毒品的色譜圖Fig.3 Chromatograms of drugs obtained by HF-LPME under optimized conditions.extraction conditions:ample solution:1.0 mL of toluene,pH=13.0;length of hollow fiber:5 cm;extraction solvent:toluene;extraction time:15 min;extraction temperature:30 ℃;stirring speed:600 r·min-1;internal standard:2-MeOPP,5 μg·mL-1.

圖4 實際血液中苯丙胺類毒品的MRM色譜圖Fig.4 MRM Chromatogram of drugs obtained under optimized conditions the conditions are the same as Fig.3.

2.4 實際樣品分析

在優(yōu)化條件下，對實際濫用苯丙胺類毒品人員的血液進行了萃取和檢測。結(jié)果在血液中檢出甲基苯丙胺和苯丙胺成分，含量分別為143.7 ng·mL-1、37.8 ng·mL-1。色譜圖見圖4。

3 結(jié)論

本研究采用中空纖維膜液相微萃取-氣相色譜/三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜檢測了人體尿液和血液中8種毒品。通過正交試驗法優(yōu)化萃取條件，中空纖維膜對生物樣品中的雜質(zhì)具有良好的阻隔作用。結(jié)果表明，方法具有很高的靈敏度和較好的重現(xiàn)性，能應用于生物樣品中多種毒品的分析檢測。該方法成功用于了實際尿樣中苯丙胺類毒品的分析。