陳 平， 余 錄， 田 吉， 張 春， 王 舒， 王 欽， 杜 曦*

(1.西南醫(yī)科大學藥學院，四川瀘州 646000；2.西南醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院，四川瀘州 646000；3.西南醫(yī)科大學藥物與功能性食品研究中心，四川瀘州 646000)

圖1 2-戊基-3-苯基-2，3-環(huán)氧丙醇Fig.1 Structure of 2-pentyl-3-phenyl-2,3-epoxy alcohol

手性環(huán)氧丙醇及其衍生物是一類頗有價值的生理活性化合物[1]。如以手性環(huán)氧醇為活性中心的普拉二烯內酯B具有抑制癌細胞增殖的作用[2]，組蛋白去乙?；敢种苿ヾepudecin具有抗癌作用[3]。同時，手性環(huán)氧醇也是非常重要的中間體，廣泛應用于合成人參炔三醇[4]、α-半乳糖神經鞘胺[5]、umuravumbolide[6]等抗腫瘤藥物以及大環(huán)內酯類抗生素[7]。手性環(huán)氧丙醇可經sharpless不對稱環(huán)氧化獲得[8]，其對映體過量值(ee值)的測定對于控制不對稱環(huán)氧化反應條件，提高手性環(huán)氧丙醇的選擇性具有重要意義。并且，在近期的細胞實驗中手性2-戊基-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇(圖1)及其類似物顯示出一定的抗腫瘤活性。因此，探索其對映體拆分及純度的檢測具有非常重要的意義。

目前，高效液相色譜(HPLC)法已廣泛應用于手性化合物的拆分[9,10]。但對于2-戊基-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇的HPLC研究還未見報道。因此，本文對2-戊基-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇的HPLC拆分進行了較為深入的研究，為該類化合物的拆分提供方法參考。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Waters1525-2487型高效液相色譜儀(美國，Waters公司)；Chiralcel OD -H、Chiralpak AD -H及AS -H手性柱均購于日本Daicel公司(規(guī)格均為25×0.46 cm i.d.)；KQ5200型超聲脫氣機(昆山市超聲儀器有限公司)。

正己烷、異丙醇、乙醇(色譜純，美國Fisher試劑公司)；1,3,5-三叔丁基苯(上海阿達瑪斯公司)。2-戊基-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇(西南醫(yī)科大學藥物化學平臺提供)。

1.2 色譜條件

色譜柱：Chiralcel OD -H手性柱；流動相：正己烷-異丙醇，正己烷-乙醇；流速0.8 mL·min-1；檢測波長210 nm；柱溫25 ℃；用流動相溶解樣品，樣品濃度為0.3 mg·mL-1，進樣量15 μL；流動相使用前用0.45 μm濾膜過濾，并超聲脫氣30 min。

2 結果與討論

2.1 手性柱的選擇

分別考察Chiralpak AD -H、AS -H和Chiralcel OD -H 3種手性柱對2-戊基-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇對映體色譜行為的影響，結果見圖2。本文中手性AD -H、AS -H柱的固定相為淀粉類物質，手性OD -H柱的固定相為纖維素類物質。盡管3種手性柱的固定相均為多糖，但淀粉型固定相以α-1,4糖苷鍵連接形成螺旋結構，而纖維素型固定相則以β-1,4糖苷鍵形成線型結構。因各自形成的手性空腔的空間結構不同，造成不同的手性柱與同一化合物對映體之間的空間適應性差異不同[11]。因此，盡管2-戊基-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇結構中羥基、苯基可與固定相中的甲酸酯基、苯基發(fā)生氫鍵、偶極-偶極堆積、π-π作用[12]，但手性OD -H柱的拆分能力(RS=1.626)遠大于手性AD -H、AS -H柱，這可能與固定相的不同構象有很大的關聯(lián)。故實驗采用Chiralcel OD -H柱。

圖2 2-戊基-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇在手性柱AD -H、AS -H和OD -H上的色譜圖Fig.2 Chromatograms of 2-pentyl-3-phenyl-2,3-epoxy alcohol on AD -H,AS -H and OD -H columns mobile phase:n-hexance∶isopropanol=90∶10(V/V);flow rate:0.8 mol·min-1;column temperature:25 ℃.

2.2 流動相組成對分離的影響

因2-戊基-3-苯基-2，3-環(huán)氧丙醇極性較大，故考察了其在異丙醇和乙醇中溶解度的大小。結果顯示其在異丙醇和乙醇中的溶解性都較好，固定流速為0.8 mL·min-1、柱溫25 ℃時分別考察異丙醇或乙醇作為流動相組成成分時對該物質分離的影響(表1)。結果顯示，以正己烷∶異丙醇=90∶10(V/V)時色譜峰形和分離效果最好。隨著異丙醇含量的降低，容量因子(k)及分離度(RS)都有較明顯的增大，但分析時間延長。原因可能是異丙醇含量的減少會增強手性固定相與2-戊基-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇對映體之間的氫鍵作用力，從而增加了拆分能力。但醇含量過低會明顯延長分析時間從而降低分離效率，綜合以上原因，確定流動相中異丙醇含量為10%。

表1 流動相組成對分離的影響

2.3 流速對分離的影響

在流動相為正己烷∶異丙醇=90∶10，柱溫為25 ℃條件下，考察了流速對色譜行為的影響。結果表明，流速從0.6 mL·min-1升至1.2 mL·min-1時，理論塔板數(shù)(N)、分離度(RS)均有明顯的減小，選擇性因子(α)基本保持不變，而保留時間(t)卻明顯的縮短，見表2。這可能與該對映體在手性OD -H柱固定相和流動相之間的分配系數(shù)差異很小有關。降低流速有助于該物質與固定相之間多次相互作用，從而實現(xiàn)該物質對映體的完全分離。實驗確定流動相流速為0.8 mL·min-1。

表2 流速對分離的影響

2.4 溫度對分離的影響

在流動相為正己烷∶異丙醇=90∶10，流速為0.8mL·min-1條件下，考察溫度對容量因子(k)、選擇性因子(α)、理論塔板數(shù)(N)以及分離度(RS)的影響(表3)。由此可知適當升高溫度對提高柱效和改善分離度是有利的。但高溫對柱子的壽命不利，因此較適宜的柱溫為25 ℃。

表3 柱溫對分離的影響

2.5 方法的線性關系、重復性、穩(wěn)定性

圖3 (R)-2-戊基-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇在OD -H柱上的色譜圖Fig.3 Chromatogram of (R)-2-pentyl-3-phenyl-2,3-epoxy alcohol on OD -H column

2.6 方法的應用

在選定實驗條件下對本課題組不對稱環(huán)氧化合成的(R)-2-戊基-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇進行了對映體過量值檢測，結果表明ee值達92%，說明該物質手性純度較高(圖3)。將上述方法推廣應用于2-戊基-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇的類似物(R)-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇、(R)-2-甲基-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇以及(R)-2,3-二苯基-2,3-環(huán)氧丙醇的拆分，取得理想效果，分離度均大于1.60(圖4)。

圖4 (a)(R)-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇在手性OD -H柱上的色譜圖；(b)(R)-2-甲基-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇在手性OD -H柱上的色譜圖；(c)(R)-2,3-二苯基-2,3-環(huán)氧丙醇在手性OD -H柱上的色譜圖Fig.4 (a)Chromatogram of (R)-3-phenyl-2,3-epoxy alcohol on OD -H column;(b)Chromatogram of (R)-2-meth-yl-3-phenyl-2,3-epoxy alcohol on OD -H column;(c)Chromatogram of (R)-2,3-diphenyl-2,3-epoxy alcohol on OD -H column

3 結論

建立了一種快速拆分2-戊基-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇光學對映體的分析方法。對映體用Chiralcel OD -H手性柱，以正己烷∶異丙醇=90∶10(V/V)為流動相，流速0.8 mL·min-1，柱溫25 ℃的條件下達到了完全分離。將該方法推廣應用于2-戊基-3-苯基-2,3-環(huán)氧丙醇類似物的拆分，均取得理想效果。