豆妮娜，冉叢聰，趙可新，蔣 曄*

(1.中國石油天然氣集團公司中心醫(yī)院藥學部，河北廊坊 065000；2.河北醫(yī)科大學藥學院，河北石家莊 050017)

凝膠類制劑作為近年來興起的一種藥物新劑型，具有易吸收、無刺激、不污染衣物等突出的優(yōu)勢，其制備和應用范圍越來越廣泛[1 - 3]。凝膠劑的基質(zhì)通常采用一些新型的高分子藥用輔料如卡波姆、羧甲基纖維素鈉等[4]。這些大分子物質(zhì)的存在對于其制劑質(zhì)量、制劑性能提高的同時，在色譜分析時易附著在色譜柱中，從而會降低分析準確度。因此在分析測定前，樣品的前處理是至關重要的過程。傳統(tǒng)的去除大分子物質(zhì)的方法有大孔樹脂法、離心沉淀法等[5,6]，但以卡波姆為基質(zhì)的凝膠劑在水溶液和有機溶劑中均有較好的溶解度，使得待測樣品溶液中含有大量大分子物質(zhì)，傳統(tǒng)的樣品前處理很難將小分子藥物從基質(zhì)分離出來。

本文采用中空纖維離心超濾技術處理凝膠類制劑樣品，去除了高分子凝膠輔料，有效分離出小分子藥物，并結(jié)合高效液相色譜(HPLC)法直接進行含量分析。將所建立的方法用于雙氯芬酸鈉凝膠的含量分析，簡便、快速、可靠地反映了藥物制劑質(zhì)量。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀，包括L-6200A ternary泵(日本，日立公司)，785A紫外檢測器(美國)，HW-2000色譜工作站；聚偏氟乙烯、聚砜中空纖維(壁厚150 μm，內(nèi)徑1 000 μm，截留分子量10 kDa，天津北奧膜工程技術有限公司)；LXJ-64-01離心機(北京醫(yī)用離心機廠)。

雙氯芬酸鈉對照品(中國食品藥品檢定研究院提供)；雙氯芬酸鈉凝膠(海南全星制藥有限公司，產(chǎn)品批號20140104，規(guī)格15 g:0.15 g)；甲醇(色譜純，DIKMA科技有限公司)；冰乙酸為分析純；水為重蒸水。

1.2 色譜條件

色譜柱：Phenomenexc C18柱(250×4.6 mm)；流動相：甲醇-0.1%乙酸溶液(體積比85∶15)；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：室溫；檢測波長：276 nm；進樣量：20 μL。

1.3 溶液的配制

1.3.1對照品溶液精密稱取雙氯芬酸鈉對照品10.2 mg于1 mL安培瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得10.2 mg·mL-1對照品貯備液。精密移取對照品貯備液0.5 mL置10 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，得510 μg·mL-1的對照品溶液。精密移取510 μg·mL-1對照品溶液適量置10 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，得濃度為5.10、10.2、15.3、20.4、25.5、30.6 μg·mL-1的系列對照品工作溶液。

1.3.2供試品溶液精密稱取供試品1.041 g(含雙氯芬酸鈉約10 mg)于10 mL容量瓶中，然后加入0.1 mol·L-1NaOH溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。將中空纖維切成約15 cm的小段，在水中超聲清洗15 min后，晾干，備用。將兩個注射用針頭穿過橡膠塞，固定已處理的中空纖維并置于10 mL離心管中，取適量供試品溶液于離心管，5 000 r·min-1離心10 min，取出中空纖維，收集腔內(nèi)溶液，用流動相稀釋，得約20.0 μg·mL-1的供試品溶液。

1.3.3空白溶液精密稱取空白輔料1.032 g于10 mL容量瓶中，用0.1 mol·L-1NaOH溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。中空纖維離心超濾法同上制備空白溶液。

2 結(jié)果與討論

2.1 流動相的選擇

參照文獻報道[7 - 9]測定雙氯芬酸鈉的色譜條件，對流動相體系調(diào)整后，確定為甲醇-0.1%乙酸溶液(體積比85∶15)。在此色譜條件下，雙氯芬酸鈉保留時間為7.8 min。

2.2 樣品前處理方法的選擇

凝膠類制劑中的大分子主要來源于輔料中的卡波姆等，卡波姆在樣品稀釋液中以膠體形式存在，文獻報道[9 - 11]通常采用直接稀釋樣品、離心沉淀或過濾法將小分子物質(zhì)與高分子輔料或基質(zhì)分離，但是很難達到理想的分離效果。本研究采用中空纖維離心超濾法對凝膠劑進行樣品前處理，利用中空纖維膜對大分子截留的原理，有效去除大分子的干擾，并避免了對色譜儀的損害。

2.3 溶劑的選擇

實驗考察了水、流動相、0.1 mol·L-1NaOH溶液不同稀釋溶劑對測定的影響，結(jié)果表明采用NaOH溶液作為溶劑，在堿性環(huán)境中可保證雙氯芬酸鈉以離子的形式完全溶解。因此，最終選擇0.1 mol·L-1NaOH溶液為溶劑，樣品含量測定結(jié)果準確可靠。

2.4 中空纖維膜的選擇

考察了在中空纖維離心超濾分離過程中不同膜材對待測物的非特異性吸附(NSB)，進而選擇合適的中空纖維膜。本文以20.4 μg·mL-1的對照品溶液研究了其在聚偏氟乙烯和聚砜兩種不同中空纖維膜材中的回收率，結(jié)果表明以聚偏氟乙烯中空纖維膜進行超濾分離時，回收率可達100%，而聚砜中空纖維膜對待測成分存在明顯的NSB現(xiàn)象，回收率僅為57%。因此，本實驗選擇聚偏氟乙烯膜材對樣品進行中空纖維離心超濾處理。

2.5 系統(tǒng)適應性試驗

分別取空白溶液、雙氯芬酸鈉對照品溶液(20.4 μg·mL-1)、供試品溶液，在1.2節(jié)色譜條件下進樣，記錄色譜圖(如圖1A～C)。雙氯芬酸鈉的出峰時間為7.8 min，分離度良好，空白輔料不干擾測定，理論塔板數(shù)以雙氯芬酸鈉計算不低于3 000N/m。結(jié)果表明，色譜系統(tǒng)的適應性良好。

2.6 校正曲線

取1.3節(jié)下系列對照品工作液，在1.2節(jié)色譜條件下進樣測定，記錄色譜圖，以峰面積(A)對樣品的濃度(c)進行線性回歸，所得方程為：A=5.90×104c+1.73×104(r=0.9998)。結(jié)果表明，雙氯芬酸鈉在5.10～30.6 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關系良好。

2.7 精密度與重復性試驗

取1.3節(jié)下對照品溶液，連續(xù)進樣6次，色譜峰面積，相對標準偏差(RSD)為1.2%，表明方法精密度良好。取同批雙氯芬酸鈉凝膠樣品，按1.3節(jié)下方法配制6份供試品溶液，進樣測定，其色譜峰面積的RSD為1.4%。

2.8 回收率試驗

精密稱取空白輔料約1 g，置10 mL容量瓶中，精密量取10.2 mg·mL-1對照品貯備液0.8、1.0、1.2 mL，用0.1 mol·L-1NaOH溶液溶解，并稀釋至刻度，制備高、中、低三個濃度的溶液，每個濃度三份，按1.3節(jié)下方法配制供試品溶液。在1.2節(jié)色譜條件下進樣測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 雙氯芬酸鈉的回收率測定結(jié)果

2.9 樣品含量測定

取雙氯芬酸鈉凝膠樣品，按“1.3”節(jié)下方法配制成供試品溶液，在“1.2”節(jié)色譜條件下進樣測定，以外標法計算樣品中雙氯芬酸鈉含量分別為樣品標示量的99.1%、98.9%和99.4%。

3 結(jié)論

實驗結(jié)果表明，本文所建立的中空纖維離心超濾樣品前處理法應用于以卡波姆為基質(zhì)的凝膠類制劑，可簡單快速地分離出小分子藥物，空白輔料不干擾測定，提高了方法的分析準確性，為凝膠類制劑中高分子輔料的去除提供了簡便可靠的前處理手段。