胡艷紅徐忠芳

多囊卵巢綜合征內(nèi)分泌異常與CD8+CD28+/CD8+CD28-T細胞平衡的關(guān)系*

胡艷紅①徐忠芳①

目的：研究多囊卵巢綜合癥內(nèi)分泌異常與CD8+CD28+/CD8+CD28-T細胞平衡的關(guān)系。方法：將在本院就診的60例多囊卵巢綜合征患者分為胰島素抵抗組和非胰島素抵抗組，并選取30例健康女性為對照組，分別檢測T細胞及其細胞內(nèi)因子、性激素及胰島素水平并做出比較。結(jié)果：三組患者CD8+CD28+T細胞與IFN-γ含量比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；三組患者CD8+CD28-T細胞及IL-4含量比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；三組患者的FSH水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；三組患者LH、Insulin和HOMA-IR水平比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)論：多囊卵巢綜合征患者的免疫平衡表現(xiàn)為對CD8+CD28-T細胞的過度抑制，因此該細胞數(shù)量的升高與內(nèi)分泌紊亂及胰島素抵抗密切相關(guān)。

多囊卵巢綜合征； 胰島素抵抗； CD8+CD28+/CD8+CD28-T細胞； 性激素

First-author’s address：The Maternity and Child Care Hospital of Pingxiang City，Pingxiang 337055，China

多囊卵巢綜合征是一種生殖功能障礙與糖代謝異常并存的內(nèi)分泌紊亂綜合征。因排卵障礙而致不孕則是多囊卵巢綜合征的主要臨床表現(xiàn)，多囊卵巢綜合征的確切病因不詳，目前認為是卵巢產(chǎn)生過多雄激素，而雄激素的過量產(chǎn)生是由于體內(nèi)多種內(nèi)分泌系統(tǒng)功能異常協(xié)同作用的結(jié)果，其主要癥狀有：肥胖、月經(jīng)失調(diào)、雙側(cè)卵巢增大、多毛、不孕等。也有研究表明部分患者是因為遺傳因素導致的多囊卵巢，且多囊卵巢綜合癥發(fā)病呈年輕化傾向，而多囊患者的CD8+T細胞亞群數(shù)量明顯升高。在本研究中，筆者基于胰島素抵抗的多囊卵巢綜合癥動物模型與CD8+T細胞的相關(guān)性，具體研究CD8+CD28+與CD8+CD28-T細胞兩個亞群與多囊卵巢綜合癥患者內(nèi)分泌代謝的關(guān)系［1-2］?，F(xiàn)匯報如下。

1　資料與方法

1.1一般資料 選取2014年10月-2015年10月在本院婦產(chǎn)科就診的多囊卵巢綜合征患者60例，入組診斷標準為：（1）排卵或者不排卵，表現(xiàn)在月經(jīng)走勢不正常；（2）超聲檢查卵巢有多囊性改變；（3）雄激素過高、多毛、痤瘡，或激素水平高。根據(jù)胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）進行分組（HOMAIR=空腹血胰島素×空腹血糖/22.5），分為胰島素抵抗組（insulin resistance，IR）和胰島素非抵抗組（non insulin resistance，Non-IR），兩組患者各30例，另選取30例體檢健康、體重指數(shù)正常、無其他內(nèi)分泌疾病的女性為對照組。IR組年齡20～37歲，平均（32.12±8.23）歲；Non-IR組年齡19～35歲，平均（31.45±7.45）歲；對照組年齡20～38歲，平均（32.25±8.57）歲，三組觀察對象一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2檢測方法

1.2.1T細胞及其細胞內(nèi)因子檢測 三組觀察對象均在月經(jīng)周期或者黃體酮撤退后出血的第2～3天（閉經(jīng)患者無時間限制）空腹狀態(tài)下采取肘靜脈血不少于2 mL，保存于2 ℃冰箱，并于24 h內(nèi)進行染色檢測。儀器采用Beckman cuulter cell多色式細胞檢測儀，分別檢測CD8+CD28+殺傷性T細胞和CD8+CD28-抑制性T細胞的百分含量。同時測量以上兩種T細胞細胞內(nèi)因子γ干擾素（interferon-γ，IFN-γ）及白細胞介素（interleukin-4，IL-4）的百分含量。

1.2.2性激素及胰島素水平的檢測 使用放射免疫法檢測外周血清卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH）、黃體生成素（luteinizing hormone，LH）及胰島素（insulin）水平。

1.3統(tǒng)計學處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以（）表示，比較采用t檢驗或方差分析，計數(shù)資料采用 χ2檢測，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1CD8+CD28+/CD8+CD28-T細胞及其細胞因子比較 三組CD8+CD28+/CD8+CD28-T細胞及其細胞因子呈階梯型變化，其中，對照組的CD8+CD28+T細胞與IFN-γ含量最高，其次為Non-IR組及IR組，三組之間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；同時，Non-IR組及IR組CD8+CD28+T細胞與對照組比較明顯降低（P＜0.05），且IR組低于Non-IR組（P＜0.05）；Non-IR組及IR組IFN-γ含量均低于對照組，且IR組低于Non-IR組（P＜0.05）；對照組CD8+CD28-T細胞及IL-4含量最低，IR組最高，三組之間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），Non-IR組及IR組含量均高于對照組，IR組高于Non-IR組（P＜0.05），見表1。

表1　三組CD8+CD28+/CD8+CD28-T細胞及其細胞因子比較（）

表1　三組CD8+CD28+/CD8+CD28-T細胞及其細胞因子比較（）

組別　CD8+CD28+T細胞　CD8+CD28-T細胞　IFN-γ（ng/mL）　IL-4（ng/mL）對照組（n=30）　13.13±4.19　16.25±6.14　9.84±4.87　15.37±5.45 Non-IR組（n=30）　10.14±3.78　20.26±7.45　6.25±3.26　19.78±7.16 IR組（n=30）　7.96±1.69　23.91±9.89　4.10±2.76　 26.70±10.87

2.2性激素及胰島素水平比較 三組FSH水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），三組間LH、Insulin和HOMA-IR水平比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。Non-IR組及IR組LH水平與對照組比較均明顯升高（P＜0.05），但Non-IR組與IR組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。Non-IR組患者的血清Insulin水平與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），IR組患者血清Insulin水平明顯低于Non-IR組及對照組。IR組及Non-IR組HOMA-IR指數(shù)與對照組比較明顯升高（P＜0.05），見表2。

表2　三組性激素水平比較和胰島素水平比較（）

表2　三組性激素水平比較和胰島素水平比較（）

組別　FSH（IU/L）LH（IU/L）Insulin（U/L）HOMA-IR對照組（n=30） 6.58±2.89　9.37±3.87　11.25±4.67 1.37±0.50 Non-IR組（n=30）7.07±3.17 16.17±5.69 10.15±3.96 2.86±0.67 IR組（n=30）　7.56±3.16 18.27±7.26　7.29±2.07　4.28±0.43

3　討論

多囊卵巢綜合征由Stern-Leventhal于1235年首次報告，其主要表現(xiàn)為因排卵障礙導致不孕，癥狀有月經(jīng)紊亂、閉經(jīng)、多毛、肥胖等，B超可見雙側(cè)卵巢呈多囊改變［3］。多囊卵巢綜合征的治療方案分為有生育要求和無生育要求兩兩種，對于無生育要求的患者可以單獨使用孕激素和/或與雌激素聯(lián)合使用治療，以誘發(fā)正常的月經(jīng)周期，降低子宮內(nèi)膜不典型增生或內(nèi)膜腺癌的風險。對于有生育要求的患者治療方向主要為在妊娠試驗陰性的基礎上促排和治療基礎性疾病為主。其確切發(fā)病原因不詳，有學者認為與患者體內(nèi)多種內(nèi)分泌系統(tǒng)功能異常造成的雄激素過高有關(guān)，也有研究表明多囊卵巢綜合征與胰島素抵抗有一定的關(guān)系，胰島素作為體內(nèi)唯一的降血糖的激素，胰島素抵抗可直接導致血糖的代謝紊亂，與其相關(guān)的血脂代謝異常則成為心血管疾病的危險因素。近年來，有研究表明CD8+CD28-抑制性T細胞可能與多囊卵巢綜合征有關(guān)。本文就多囊卵巢綜合征內(nèi)分泌異常與CD8+CD28+/CD8+CD28-T細胞平衡的關(guān)系展開研究［4-6］。

T細胞作為一個不均一的細胞群體，分類方法有多種。其中，CD8+T細胞是體內(nèi)重要的T細胞亞群之一，根據(jù)CD8+T細胞表面是否表達CD28共刺激分子，可將CD8+T細胞分為CD8+CD28+殺傷性T細胞及CD8+CD28+抑制性T細胞，即CD8+CD28+/ CD8+CD28-T細胞是屬于同一細胞族具有不同表型的兩個細胞亞群，且CD8+CD28+抑制性T細胞可以在抗原的刺激下轉(zhuǎn)化為CD8+CD28+殺傷性T細胞，從而形成一對平衡體，健康個體CD8+CD28+/ CD8+CD28-T細胞的百分率對外周血CD8-T細胞的升高具有相同功能，然而在一些感染性疾病和慢性疾病患者則并非如此［7］。很多疾病的免疫學機制都涉及CD8+CD28+/CD8+CD28-T細胞，在疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，這些疾病包括某些腫瘤、心血管疾病和部分婦科疾病，多囊卵巢綜合征包括其中。德國的Sterner等用戊酸酯誘發(fā)多囊卵巢綜合征形成大鼠模型，多囊卵巢綜合癥大鼠模型的CD8+T細胞含量較正常組降低，并發(fā)現(xiàn)經(jīng)過電刺激干預后，CD8+T細胞數(shù)量可增加。

對于多囊卵巢綜合癥性激素代謝方面的研究較多，涉及的觀察指標也多，本文中選取血清卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH）、黃體生成素（luteinizing hormone，LH）作為性激素的代表進行研究。在本研究中，IR組患者與Non-IR組患者FSH含量比較差異無統(tǒng)計意義（P＞0.05），但LH含量比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），宋青等［8-9］對多囊卵巢綜合征的研究結(jié)果大體一致。研究表明LH與CD8+CD28+/CD8+CD28-T細胞存在相關(guān)性，這說明LH與IR的關(guān)系更為密切，對于多囊卵巢綜合征來說LH的臨床意義更大。在后續(xù)的胰島素增敏治療中可以通過重點觀察LH的水平變化而檢測評價療效。

近年來很多學者從免疫學角度對IR進行探討，如Elia等［10］在多囊卵巢綜合征的BALB/c小鼠模型也發(fā)現(xiàn)CD8+T細胞亞群數(shù)量下降，并且這種下降狀態(tài)在脫氫表雄酮的誘導下得以持續(xù)，而具有IR的患者服用二甲雙胍在改善內(nèi)分泌代謝紊亂的同時可以使CD8+T細胞亞群數(shù)量回升，因此可見，IR 與CD8+呈一定的相關(guān)性，從T細胞免疫學入手討論IR對多囊卵巢綜合征的影響有意義［11-15］。在研究中發(fā)現(xiàn)CD8+T細胞及其細胞內(nèi)因子呈現(xiàn)特征性變化——CD8+CD28+T細胞及IFN-γ相對多囊卵巢綜合征患者而言可能是一個保護性因素，當患者的CD8+CD28+殺傷T細胞越高，其IR程度越低；相反，CD8+CD28-抑制性T細胞含量越高，多囊卵巢綜合征患者的征患者的免疫調(diào)節(jié)治療提供一定的依據(jù)。IR程度亦越高。這說明CD8+CD28-抑制性T細胞及其細胞因子IL-4相對多囊卵巢綜合征尤其是合并IR的患者一個致病性因素［16-20］。

在本研究中筆者發(fā)現(xiàn)，多囊卵巢綜合征患者尤其是合并IR患者的免疫平衡向CD8+CD28-抑制性T細胞傾斜，該細胞數(shù)量及其胞內(nèi)細胞因子IFN-γ升高，主要表現(xiàn)為抑制效應，這證明多囊卵巢綜合征的合并IR的病理生理過程有CD8+CD28-抑制性T細胞的參與。

綜上所述，本研究從免疫學角度在一定方面闡述了免疫失衡與性激素代謝紊亂的關(guān)系，啟發(fā)CD8+CD28+T細胞可能是多囊卵巢綜合征患者治療的一個靶細胞，這可為多囊卵巢綜合治療提供相關(guān)依據(jù)。

［1］施曉波，張金風，符書馨.多囊卵巢綜合征患者外周血T淋巴細胞亞群的測定及與甾體激素相關(guān)性的研究［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2008，18（16）：2363-2365.

［2］王增杰，周敏.多囊卵巢綜合征的病因研究進展［J］.中國計劃生育學雜志，2009，16（7）：440-442.

［3］李美芝.多囊卵巢綜合癥的診斷與治療［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2002，15（7）：444-446.

［4］ Stener-Victorin E，Lindholm C.Immunity and beta-endorphin concentrations in hypothalamus and plasma in rats with steroid-induced polycystic ovaries：effect of low-frequency electroacupuncture［J］.Biology of Reproduction，2004，70（2）：329-333.

［5］林金芳，李昕，蘇椿淋.多囊卵巢綜合征患者胰島素抵抗的診斷方法及治療策略［J］.中國實用婦科與產(chǎn)科雜志，2007，7 （9）：663-667.

［6］林忠.多囊卵巢綜合征與細胞因子的相關(guān)性研究［J］.中國婦產(chǎn)科臨床雜志，2006，7（5）：391-393.

［7］韓琳，裴毅.腫瘤患者CD+T細胞中CD28表達的研究進展［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2007，7（9）：1402-1404.

［8］宋青，茍文麗.吡格列酮對胰島素抵抗型多囊卵巢綜合征患者脂肪細胞因子的影響［J］.西安交通大學學報（醫(yī)學版），2010，31（2）：227-230.

［9］王麗，呂淑蘭，曹纘孫.青春期與育齡期多囊卵巢綜合征患者的臨床對照研究［J］.西安交通大學學報（醫(yī)學版），2010，45（11）：745-748.

［10］ Elia E M，Belgorosky D，F(xiàn)aut M，et al.The effects of metformin on uterine tissue of hyperandrogenized BALB/c mice［J］.Molecular Human Reproduction，2009，15（15）：421-432.

［11］余碧雅.C反應蛋白濃度與多囊卵巢綜合征胰島素抵抗相關(guān)性分析［J］.當代醫(yī)學，2011，17（24）：123-124.

［12］裘宇容，楊春莉，陳煉波，等.原發(fā)性原發(fā)性肝癌患者CD8+CD28-和CD8+CD28+細胞亞群的分析［J］.第一軍醫(yī)大學學報，2002，13（1）：45-46.

［13］陳必，郭賽群，楊佩嫻.原發(fā)性垂體促性腺功能低下閉經(jīng)患者CD8+CD28+與CD8+CD28-T細胞平衡及其與性激素的關(guān)系［J］.現(xiàn)代醫(yī)院，2014，14（7）：25-29.

［14］江洪，陳夢坤，何必勤.多囊卵巢綜合征患者C反應蛋白與胰島素抵抗的相關(guān)性研究［J］.海峽醫(yī)學，2015，27（6）：147-149.

［15］李旻，邱紅玉，孫永玉.多囊卵巢綜合征的免疫學因素研究進展［J］.國外醫(yī)學婦產(chǎn)科學分冊，2003，30（1）：29-32.

［16］ Brimnes J，Allez M， Dotan I，et al.Defects in CD8+regulatory T cells in the lamina propria of patients with inflammatory bowel disease［J］.Journal of Immunology，2005，174（9）：5814-5822.

［17］張翠蓮，張少娣，李杭生，等.多囊卵巢綜合征患者胰島素抵抗與肥胖的研究和分析［J］.中華實用診斷與治療雜志，2012，30（9）：807-809

［18］ Ovalle F，Azziz R.Insulin resistance，polycystic ovary syndrome，and type 2 diabetes mellitus［J］.Fertility & Sterility，2002，77（6）：1095-1105.

［19］宋洋，劉永.多囊卵巢綜合征進展［J］.海南醫(yī)學，2008，18 （5）：137-139.

［20］李儉，羅宇迪.減重訓練及口服二甲雙胍對肥胖型多囊卵巢綜合征的療效［J］.中國醫(yī)藥指南，2013，25（11）：558-559.

Polycystic Ovary Syndrome Endocrine Abnormalities and CD8+CD28+/CD8+CD28-T Cells Balanced Relations/

HU Yan-hong，XU Zhong-fang.//Medical Innovation of China，2016，13（26）：032-035

Objective：To study the polycystic ovary syndrome endocrine abnormalities and CD8+CD28+/ CD8+CD28-T cells in balanced relationship.Method：The 60 patients in our hospital with polycystic ovary syndrome patients were divided into groups of insulin resistance and non-insulin resistant group，and 30 cases of healthy women as a control group，T cells and cytokines，hormone and insulin level were detected and compared. Result：The differences of CD8+CD28+T cells and IFN-γ content in three groups were statistically significant （P＜0.05），CD8+CD28-T cells and IL-4 content differences between the three groups were statistically significant （P＜0.05）.The difference of FSH level between the three groups was not statistically significant（P＞0.05）. The difference of LH，Insulin and HOMA-IR levels in three groups were statistically significant（P＜0.05）. Conclusion：The immune balance performance in patients with polycystic ovary syndrome for the CD8+CD28-T cells suppress excessive，so the increase in the number of cells is closely related to endocrine disorders and insulin resistance.

Polycystic ovary syndrome； Insulin resistance； CD8+CD28+/CD8+CD28-T cells； Sex hormones

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.26.009

2016-01-22） （本文編輯：蔡元元）

江西省萍鄉(xiāng)市科技局社會發(fā)展科技計劃項目（20150051）

①江西省萍鄉(xiāng)市婦幼保健院 江西 萍鄉(xiāng) 337055

胡艷紅