曹富寧南寧市中醫(yī)醫(yī)：藥學(xué)部，廣西南寧530001

HPLC法研究金黃膏的穩(wěn)定性及其質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

曹富寧
南寧市中醫(yī)醫(yī)：藥學(xué)部，廣西南寧530001

目的探討HPLC法測定金黃膏中小檗堿和巴馬丁含量堯穩(wěn)定性與質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。方法通過色譜條件的優(yōu)化，建立一種金黃膏測定方法，采用高效液相色譜法，色柱為：Apollo C18（250mm伊4.6mm，5滋m），流動液相為乙腈-0.1豫磷酸（二元梯度洗脫），檢測波長346 nm，流速為1.0mL/min，柱溫為30益，測定樣品的精確度堯準(zhǔn)確度堯穩(wěn)定性堯重現(xiàn)性及專屬性特性。結(jié)果將金黃膏按照上述方式進(jìn)行，并且根據(jù)色譜檢測方式判斷，鹽酸小檗堿為2.04%，巴馬丁為1.95%，具有較好的穩(wěn)定性曰鹽酸小檗堿RSD為1.51%，巴馬丁RSD為2.03%。巴馬丁平均回收率為98.8%，RSD為1.85%，鹽酸小檗堿平均回收率為100.9%，RSD為2.5%。由此說明，鹽酸小檗堿和巴馬丁在兩種不同的藥物成分在24 h內(nèi)穩(wěn)定性相對較好，且該檢測方法具有較好的重現(xiàn)性。結(jié)論HPLC測定法分析金黃膏中小檗堿和巴馬丁含量及穩(wěn)定性與質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)效果理想，該方法準(zhǔn)確堯簡便，重現(xiàn)性好，能夠為制訂質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，值得推廣應(yīng)用。

HPLC測定法曰金黃膏曰小檗堿曰巴馬丁曰穩(wěn)定性曰質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

[Abstract]Objective To investigate content and stability and quality control standard assays of berberine and golden cream palmatine by HPLC determination.M ethods Through the optimization of the chromatographic conditions,a gold—en pastedeterminationmethod established,high-performance liquid chromatographywasused:Apollo C18column(250mm伊4.6mm,5滋m),liquid phase was acetonitrile-0.1%phosphoric acid(binary gradient elution).The detection wavelength was 346 nm,velocity of flow was 1.0 mL/min.The column temperature was 30益,determination of accuracy,accuracy, stability and reproducibility and specificity characteristics were detected.Results The golden cream was conducted in accordance with the above-described manner and judged in accordance with chromatographic detection mode,berber—inewas 2.04%,palmatine was 1.95%,with good stability;berberine hydrochloride RSD was 1.51%,palmatine RSD was 2.03%.Average palmatine recovery was 98.8%,RSD was 1.85%,hydrochloric small firewood average recovery was 100.9%,RSD was 2.5%.It showed that berberine palmatine stability in two different pharmaceutical ingredientwithin 24 h was relatively good,and the detectionmethod had good reproducibility.Conclusion HPLC assay analysis of gold—en cream and palmatine content and stability and quality control standard of berberine is satisfactory,thismethod is accurate,simple,reproducible,and can provide the basis for the development of quality control standards,which should bewidely applied.

[Key words]HPLC assay;Golden cream;Berberine;Palmatine;Stability;Quality control standards

金黃膏出自明代陳實功編著的葉外科正宗曳[1]，主要由大黃堯黃柏堯姜黃堯白芷堯天花粉堯天南星等組成，為我國2010年版葉中國藥典曳（一部）收錄的品種，具有消腫止痛堯活血化瘀等功效，在瘡瘍腫痛堯丹毒流注堯跌打損傷等癥中廣為應(yīng)用。南寧市中醫(yī)醫(yī)：藥學(xué)部（以下簡稱野我部冶）自制的金黃膏，其制作工藝中除凡士林堯冰片（研細(xì)）外，其余粉碎成細(xì)粉，過篩，混勻。取凡士林加熱融化，加入上述細(xì)粉攪勻，放置，60益左右加入冰片，攪勻，分裝即得。金黃膏為黃色軟膏，氣微香堯味苦。葉中國藥典曳[2]上規(guī)定了金黃膏中姜黃素的含量測定，但是臨床上也有采用高效液相色譜（HPLC）測定散劑或貼膏劑中大黃成分堯小檗堿或姜黃素的含量。本研究采用HPLC法測定金黃膏中小檗堿和巴馬丁含量，研究其穩(wěn)定性與質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

1　儀器與試劑

1.1儀器

SSIPC2000型高效液相色譜儀（美國科學(xué)系統(tǒng)公司），EZChrom Elite Client/Server色譜工作站，AL104電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。510二元汞，996二極管陣列檢測器。使用智能藥物檢測儀。1.2藥品與試劑

所有試劑均為AR級，水為蒸餾水，在實驗前使用0.45滋m濾膜過濾。將甲醇溶液作為金黃膏的對照物，由我部特制金黃膏作為此次實驗的樣品。小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110713-200911。巴馬丁對照品（天津科曼斯特醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司提供）。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Apollo C18（4.6 mm伊250 mm，5滋m），流動相：A相為乙腈，B相為0.1豫磷酸水溶液，檢測過程中采用梯度洗脫程序進(jìn)行。見表1。控制流速為1.0mL/min，檢測波長為346 nm，柱溫控制在30益，理論板數(shù)根據(jù)鹽酸小檗堿峰計算不低于20 000[3]。

表1　梯度洗脫表

2.2方法學(xué)考察

2.2.1對照品溶液的配制采用精密天平稱取鹽酸小檗堿和巴馬丁對照品，分別采用乙腈配制成濃度為0.290 mg/mL以及0.221 mg/mL的溶液作為儲備溶液。準(zhǔn)確吸取50堯100堯250堯500堯800堯1000滋L溶液，將其放置在10mL的容量瓶中，加入乙腈進(jìn)行稀釋，經(jīng)過0.45滋m微孔濾膜[4]。

2.2.2線性關(guān)系分別取上述對照品溶液5滋L注入液相色譜儀中，根據(jù)設(shè)置的色譜條件測定峰面積。以各進(jìn)樣量對峰面積進(jìn)行線性回歸分析，回歸方程及線性范圍見表2。

表2　回歸方程及線性范圍

2.2.3測試樣品制備精確稱取1.5 g金黃膏，放置在三角瓶中，加入30 mL石油醚，溫度控制在60~90益下進(jìn)行5min超聲處理。取出后靜置，取上層溶液，加入20 mL石油醚，充分震蕩均勻，靜置，吸取上層溶液，殘渣揮干溶劑。采用25mL甲醇以及0.1%磷酸水溶液根據(jù)1頤1比例分次轉(zhuǎn)移到容量瓶中，在超聲下進(jìn)行30min處理，放冷，加入提取溶劑到刻度[5-6]。

2.2.4精密度試驗將測試溶液連續(xù)采樣5次，得到巴馬丁和鹽酸小檗堿的峰面積，計算相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。實驗結(jié)果顯示：鹽酸小檗堿為2.04%，巴馬丁為1.95%。由此說明儀器的精密度良好。

2.2.5穩(wěn)定性試驗將獲得的檢測樣品，分別在1堯2堯3堯4堯5堯6堯7堯8堯9堯10 min等時間段進(jìn)行測試，從而將得到的峰面積進(jìn)行統(tǒng)計。實驗結(jié)果顯示，鹽酸小檗堿RSD為1.51%，巴馬丁RSD為2.03%。由此說明：鹽酸小檗堿和巴馬丁在24 h內(nèi)穩(wěn)定性相對較好。

2.2.6重現(xiàn)性試驗根據(jù)實驗獲得的供測試溶液的方法制備5份樣品，分別測定并計算其含量。實驗結(jié)果顯示，巴馬丁RSD為3.87%，鹽酸小檗堿RSD含量為1.17%。由此看出兩種成分含量采用HPCL方法檢測重現(xiàn)性較好。

2.2.7專屬性試驗除去黃柏，根據(jù)我部自擬處方稱取金黃膏其余藥物組成，制備金黃膏，采用同樣的方法進(jìn)行測定，實驗結(jié)果顯示：該方法測定鹽酸小檗堿和巴馬丁成分時有較好的專屬性。

2.2.8加樣回收率試驗精密稱取6份1.5 g藥膏，分別加入5mg巴馬丁和5mg小檗堿，同上脫脂方法進(jìn)行操作，然后采用50 mL濃度為0.1%的甲醇溶液轉(zhuǎn)移到50mL容量瓶中，采用超聲進(jìn)行30min處理，取出，放冷，然后加入提取溶液到相應(yīng)的刻度，過膜，獲得20滋L進(jìn)樣，結(jié)果顯示：巴馬丁平均回收率為98.8%，RSD為1.85%，鹽酸小檗堿平均回收率為100.9%，RSD為2.5%。

3　討論

金黃膏是臨床上常用的中成藥，該藥物主要由大黃堯黃柏堯姜黃堯白芷堯天花粉及天南星等組成，多用于跌打損傷等。傳統(tǒng)的方法雖然能滿足臨床治療需要，但是患者治療時由于不同的病癥導(dǎo)致臨床治療針對性較差。我部生產(chǎn)的金黃膏使用傳統(tǒng)的工藝，具有較好的療效及較高的質(zhì)量。金黃膏具有消腫止痛堯活血化瘀的功效，是我部研發(fā)用于治療跌打損傷堯軟組織損傷堯骨折腫痛堯紅腫熱痛等安全的外用中藥制劑[7]。

而患者一旦出現(xiàn)跌打損傷，若不盡早進(jìn)行治療，會不利于預(yù)后，導(dǎo)致?lián)p傷出現(xiàn)潰爛堯壞死的現(xiàn)象。在跌打損傷的治療過程中，一般使用硫酸鎂濕敷的方式進(jìn)行處理，具有一定的臨床療效，但是效果沒有預(yù)期的理想，會導(dǎo)致患者出現(xiàn)靜脈血管硬化堯結(jié)節(jié)性變化等一系列副作用[8]。金黃膏在治療藥物導(dǎo)致跌打損傷中能夠起到很好效果。跌打損傷中鎮(zhèn)痛藥物的使用會導(dǎo)致出現(xiàn)炎癥，其主要發(fā)病原因是由于消腫藥物的化學(xué)效果較強(qiáng),與患者的血液敏感程度以及體質(zhì)的差異有關(guān)[9]。丙泊酚也叫依托泊酚，是一種新型的苯巴比妥類的消腫藥物，發(fā)揮時間短，消腫效果較強(qiáng)，優(yōu)點(diǎn)在于見效快堯安全可靠，不會對患者的造血功能堯血液循環(huán)堯呼吸系統(tǒng)以及心臟等器官功能造成積蓄的影響，并且不會通過肝臟進(jìn)行分解，對人體的傷害小堯藥效快并且患者蘇醒的時間也較短，不會導(dǎo)致患者出現(xiàn)釋放現(xiàn)象，能夠在傷口消腫中應(yīng)用。但是丙泊酚在注射后有10%~20%的患者感受到疼痛，即使是靜脈速注也會感受到疼痛，這主要與水溶液呈酸性有一定的聯(lián)系，目前主要將邴太芬作為溶劑，將pH值減弱到5.5，可以緩解注射帶來的疼痛[10]。在手部的靜脈或慢注時患者感受到疼痛的發(fā)生率較高，也有相關(guān)學(xué)說認(rèn)為靜脈壁中的上皮細(xì)胞在接觸到丙泊酚后會出現(xiàn)一定的反應(yīng)是導(dǎo)致患者感受到疼痛的重要原因。丙甲醚又稱為肽芬甲醚，一種高效的消腫型藥物，其優(yōu)勢在于見效快堯藥效發(fā)揮時間短堯患者蘇醒時間快，并且應(yīng)用過程中出現(xiàn)的副作用較少，一般在引導(dǎo)消腫堯輔助和維持消腫中應(yīng)用的較多[11]。但是在上述跌打損傷的止痛藥劑應(yīng)用過程中有可能使患者出現(xiàn)炎癥。

有相關(guān)文獻(xiàn)指出[12]，金黃膏在早期跌打損傷中能夠起到很好的消腫止痛作用，金黃膏中的黃柏具有清熱解毒堯消腫祛濕的作用曰大黃具有瀉火涼血堯祛瘀解毒的功效。大黃中的蒽醌類成分以及黃柏中的小檗堿等多種成分都具有消腫化瘀的功效，并且能夠減輕傷口的溢液以及促進(jìn)藥品的滲透[13]。金黃膏中的姜黃及白芷成分能夠消除患者的淤積堯暢通脈絡(luò)堯疏導(dǎo)患者體內(nèi)阻滯的氣血，輔助藥物消炎。天南星堯天花粉堯姜黃等成分具有消腫止痛堯活血祛瘀的功效曰厚樸堯陳皮堯蒼術(shù)等成分能夠起到調(diào)理患者氣血的作用，其中厚樸中含有大量的茁-桉葉醇，具有抑制細(xì)菌增殖的功效，能夠減輕患者的血管腫脹。甘草具有清熱解毒堯調(diào)養(yǎng)氣血的功效，能作為輔助成分使用，并且甘草中的甘草次酸具有消炎堯抗過敏的效果。黃芩中含有大量的活性礦物質(zhì)，能夠起到強(qiáng)健固本堯消除疲勞的效果[14]。冰片則具有清熱散毒堯明目退翳的藥效。金黃膏將天南星堯陳皮堯姜黃堯白芷堯甘草堯甘松堯大黃堯黃芩堯黃柏堯蒼術(shù)堯厚樸堯天花粉堯冰片加入制作，能夠達(dá)到祛火化瘀堯止痛消腫的作用。同時將藥品做成膏樣，能夠加強(qiáng)藥物對皮膚的滲透性，同時起到呵護(hù)皮膚堯保護(hù)痂皮堯有效預(yù)防傷口開裂，能夠起到很好的止疼效果[15]。金黃膏在治療跌打損傷中起到了見效快堯藥效高堯操作簡單以及不良反應(yīng)較少，其應(yīng)用價值大于硫酸鎂，能夠起到清熱解毒堯祛瘀消腫的作用[16]。

關(guān)節(jié)炎癥是一種由于茁-溶血性鏈球菌感染而導(dǎo)致患者的皮膚以及皮下組織堯淋巴結(jié)及周圍結(jié)構(gòu)發(fā)炎的一種常見疾病，其特征在于患者發(fā)炎部位的皮膚會呈現(xiàn)紅腫，并感覺到發(fā)熱堯疼痛，全身無力等相關(guān)癥狀，在身體的各個部位都會出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎癥，一般在手臂堯腿部堯頭皮以及腹部等部位[17]。關(guān)節(jié)炎癥的發(fā)病原因主要是由于真皮細(xì)胞出現(xiàn)病變而產(chǎn)生水腫，真皮中有膿性白細(xì)胞浸潤，可在皮下組織中出現(xiàn)。關(guān)節(jié)炎癥若不盡早進(jìn)行處理會引起患者的淋巴結(jié)感染，導(dǎo)致淋巴堵塞，使得患者的血液循環(huán)受到影響而產(chǎn)生象皮腿的現(xiàn)象，嚴(yán)重情況可能導(dǎo)致患者出現(xiàn)鏈球菌中毒性休克綜合征，需要對此盡快的處理。臨床中一般使用擦拭硫酸鎂的方式進(jìn)行治療，但是在臨床應(yīng)用中會反復(fù)出現(xiàn)堯不能夠有效退腫，是導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎癥復(fù)發(fā)的主要原因，其中最關(guān)鍵的是關(guān)節(jié)炎癥復(fù)發(fā)可能使得病菌炎癥轉(zhuǎn)化為慢性炎癥以及亞急性炎癥[18]。

在中醫(yī)對關(guān)節(jié)炎癥的看法是患者體內(nèi)的火毒旺盛堯風(fēng)熱堯濕邪侵襲，在長期熱毒堆積的影響下在皮膚中出現(xiàn)了反應(yīng)，而造成患者的氣血凝滯堯經(jīng)脈阻塞等。因此在關(guān)節(jié)炎癥的治療過程中，需要患者保持正常的生活飲食以及起居習(xí)慣，對于高熱患者需要做好降溫處理，若持續(xù)高燒需要服用退燒藥物治療。金黃膏具有消腫化瘀堯活氣固本的功效，其中金黃膏中的黃柏具有清熱燥濕堯解毒祛濕的功效曰大黃具有清熱活血堯祛瘀解毒的功效，金黃膏中的多種成分都具有消腫化瘀的功效，并且能夠減輕皮膚紅腫的程度以及延長藥效持續(xù)的時間。蒼術(shù)具有消腫化瘀的藥效，天南星能夠?qū)颊咂つw炎癥起到消炎堯消腫堯鎮(zhèn)痛止痛堯化瘀消炎的作用，姜黃能夠祛熱解毒，消除患者體內(nèi)的邪火。金黃膏具有清熱解毒堯活血化瘀堯消腫止痛等藥效，輔料甘草堯黃芩堯冰片具有消除皮膚炎癥以及預(yù)防關(guān)節(jié)開裂的作用，具有較高的滲透性。金黃膏藥效較高堯藥物發(fā)揮時間較快，且價格相對廉價，藥物安全性也比較高，并且具有消腫化瘀堯解毒止痛堯降溫消炎堯促進(jìn)關(guān)節(jié)愈合的療效，并且其輔助成分能夠很好地延長藥品持續(xù)時間，利于患者的預(yù)后。在金黃膏治療關(guān)節(jié)炎癥的過程中，將金黃膏科學(xué)地涂抹在炎癥出現(xiàn)的疼痛部位，并以紗布包裹，避免藥膏沾到衣服等，能夠消除關(guān)節(jié)炎癥，同時還要注意清潔，預(yù)防各種細(xì)菌侵入導(dǎo)致的病毒感染，例如腳氣堯皮疹堯皮癬等病毒的感染，是控制關(guān)節(jié)炎癥的重要措施。有相關(guān)文獻(xiàn)指出[19]，使用金黃膏在治療關(guān)節(jié)炎癥的有效率能夠達(dá)到86.0%，7~10 d內(nèi)即可見效，證實了金黃膏外在治療關(guān)節(jié)炎癥的臨床應(yīng)用效果比較理想，具有藥效高堯治愈時間短堯消炎止痛的優(yōu)勢，能夠縮短患者的病程，值得在關(guān)節(jié)炎癥治療中推廣使用。

頸椎病是一種常見的關(guān)節(jié)炎并發(fā)癥狀，主要的臨床表現(xiàn)為頸椎的邊緣皮膚出現(xiàn)水腫堯充血堯隆起以及腫脹疼痛等，水腫是其主要特征，并且紅腫周圍的腫脹時間過長會導(dǎo)致頸椎淤血，一旦出現(xiàn)頸椎病的現(xiàn)象，嚴(yán)重影響了患者的預(yù)后情況，對患者的生活質(zhì)量造成了影響，并且使得頸椎愈合的時間增長?，F(xiàn)代一些學(xué)者認(rèn)為，頸椎病的產(chǎn)生機(jī)制是源自手術(shù)過程，患者的頸椎周圍的組織受到創(chuàng)傷，使得組織周圍靜脈淋巴循環(huán)受到影響堯周圍血管血液阻滯導(dǎo)致血管堵塞而產(chǎn)生的。

中醫(yī)學(xué)中對于頸椎病出現(xiàn)的原因認(rèn)為是頸椎周圍的經(jīng)脈受阻堯氣血不暢堯濕熱淤積導(dǎo)致的。金黃膏在這方面具有較好的臨床應(yīng)用效果，其制成的成分大多具有消腫化瘀的功效，其中大黃堯白芷堯黃柏等具有活血化瘀的功效曰姜黃堯甘草具有清熱解毒的藥效，厚樸堯陳皮堯天花粉等藥物具有平喘堯降氣堯下氣消積等功效。天南星能夠起到消炎堯消腫堯鎮(zhèn)痛止痛堯化瘀消炎的作用。金黃膏能夠有效緩解頸椎病的癥狀，減輕患者的疼痛，清熱解毒堯祛濕消腫堯活絡(luò)經(jīng)脈，能夠在頸椎病的治療中起到很好的治療效果[20]。

文章主要應(yīng)用HPLC測定法分析金黃膏的穩(wěn)定性與質(zhì)量，HPLC是一種有效的色譜檢查方式，將液體作為流動物，并應(yīng)用高壓輸液系統(tǒng)，將金黃膏制成溶劑后通過流動泵裝入試劑后對其穩(wěn)定性進(jìn)行檢測，是我國目前一種有效的分析技術(shù)。

綜上所述，我部運(yùn)用傳統(tǒng)的工藝，通過各種實驗觀察都得到了較好的臨床療效，并且在本次HPLC測定法中測得金黃膏中相應(yīng)的成份含量，具有較好的穩(wěn)定性。其制作成份都具有一定的活血化瘀堯消炎消腫的效果，并且通過各種研究都取得了一定的臨床療效，值得推廣使用。

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HPLC assay analysis golden cream stability and quality control standards

CAO Funing

Department of Pharmacy,Nanning City Chinese Medicine Hospital,the Guangxi Zhuang Autonomous Region,Nanning 530001,China

R914.1

A

1673-7210（2016）08（c）-0133-04

2016-04-20本文編輯：趙魯楓）