羅桂香，周玉球，胡利清，吳洪秋，汪國慶，李　磊

(廣東省珠海市婦幼保健院檢驗(yàn)科　519001)

?

·臨床研究·

肺炎支原體抗體兩種檢測方法的對比分析

羅桂香，周玉球，胡利清，吳洪秋，汪國慶，李磊

(廣東省珠海市婦幼保健院檢驗(yàn)科519001)

目的探討被動凝集法(PPA)和間接免疫熒光法(IIFA)在肺炎支原體(MP)感染早期診斷中的應(yīng)用價值。方法對該院兒科2015年1～12月疑因MP感染的2 517例住院患兒采用PPA和IIFA檢測血清MP-IgM的結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，比較兩種方法檢測MP-IgM陽性率的差異。結(jié)果PPA和IIFA各檢出MP-IgM陽性976例和614例，陽性檢出率分別為38.77%和24.39%，PPA陽性檢出率明顯高于IIFA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩法的陽性符合率為80.29%，陰性符合率為74.61%，總符合率為76.00%。同時采用兩種方法檢測MP-IgM，陽性檢出率可達(dá)到43.58%，敏感性明顯高于任一單一方法。結(jié)論P(yáng)PA檢測MP-IgM較IIFA敏感，兩者聯(lián)合檢測可以提高M(jìn)P感染診斷的陽性率。

肺炎支原體；肺炎支原體抗體；被動凝集法；間接免疫熒光法

肺炎支原體(MP)是小兒呼吸道感染的常見病原體之一，近年來發(fā)病率逐年增多[1]，嚴(yán)重威脅了兒童健康。MP感染由于肺部體征輕、病情輕重不一、影像學(xué)檢查缺乏特異性等，僅靠臨床診斷較為困難，極易導(dǎo)致誤診、漏診而延誤病情，造成全身多器官、多系統(tǒng)損害，病情嚴(yán)重者甚至死亡[2-3]。因此MP感染的早期診斷對臨床治療和預(yù)后有重要意義。MP的實(shí)驗(yàn)室檢測方法有很多，包括MP培養(yǎng)、血清學(xué)方法和分子生物學(xué)方法等。本文回顧性分析2 517例MP肺炎患兒臨床資料，探討被動凝集法(PPA)和間接免疫熒光法(IIFA)檢測MP抗體在兒童MP感染早期的診斷價值?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2015年1～12月在本院兒科住院同時做PPA和IIFA檢測的患兒2 517例，其中男1 552例，女965例，年齡1～9歲，中位年齡3歲。

1.2方法MP-IgM PPA和IIFA檢測試劑盒分別購自珠海麗珠試劑公司和鄭州安圖生物工程股份有限公司。采用日本Olympus公司生產(chǎn)的CX22LKDRFS1型熒光顯微鏡用于IIFA熒光觀察。嚴(yán)格按照檢測試劑盒說明書進(jìn)行操作。PPA每次測試均設(shè)置陰性、陽性對照，與待測標(biāo)本同時檢測。未致敏粒子反映圖像呈陰性結(jié)果，陰性對照和陽性對照出現(xiàn)預(yù)期結(jié)果，以血清稀釋度≥1∶40時出現(xiàn)陽性(+)反應(yīng)圖像判定為陽性，將顯示出反映圖像為(+)時的最終稀釋倍數(shù)作為抗體滴度。IIFA每次測試均設(shè)置陰性、陽性對照，與待測標(biāo)本同時檢測。待檢血清經(jīng)過IgG吸附劑處理后，加在包被有MP抗原的生物玻片上，熒光顯微鏡下觀察內(nèi)部質(zhì)控孔陰性、陰性對照和陽性對照出現(xiàn)的預(yù)期結(jié)果，以標(biāo)本中McCoy細(xì)胞中的MP出現(xiàn)蘋果綠熒光判斷為陽性，否則為陰性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理和分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，兩種檢測方法陽性率的比較采用配對χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

2.1年齡和季節(jié)的影響患兒MP感染存在年齡和季節(jié)差異。6個月以內(nèi)的嬰幼兒感染率在6%以下，1～<4歲的患兒感染率在60%以上；11、12、8、10月MP感染陽性率較高。各年齡段及各月份的MP-IgM 陽性檢出率分布情況見圖1。

2.2檢測MP-IgM的陽性率采用PPA和IIFA從上述患兒血清中檢出MP-IgM陽性有976例和614例，陽性率分別為38.77%和24.39%，PPA檢測陽性率明顯高于IIFA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=216.96，P<0.05)。

2.3PPA和IIFA檢測的一致性兩種方法陽性符合率為80.29%(493/614)，陰性符合率為74.61%(1 420/1 903)，總符合率為76.00%。IIFA陽性PPA陰性有121例，IIFA陰性PPA陽性有483例。同時采用這兩種方法檢測MP-IgM，則陽性檢出率可達(dá)到43.58%，敏感性明顯高于任一單一方法。見表1。

表1　　PPA與IIFA測定MP-IgM結(jié)果比較(n)

3　討　　論

人類感染MP 6～7 d后，就產(chǎn)生IgM類抗體，2～4周達(dá)高峰，以后緩慢下降，持續(xù)時間短。IgG比IgM出現(xiàn)晚，在感染兩周后逐漸升高，持續(xù)時間較長[4-5]。一般情況下，血清中IgM抗體陽性提示MP早期感染，IgG抗體陽性提示既往感染，IgM、IgG及IgA均為陽性提示初次感染或現(xiàn)癥感染，且不能排除再次感染的可能。由于各地氣候、環(huán)境不同，MP感染陽性率有明顯季節(jié)差異[6]。從調(diào)查結(jié)果可知，珠海地區(qū)冬、秋季患兒的MP-IgM陽性檢出率較高。這主要是因?yàn)橹楹Ｇ?、冬季?jié)氣候溫和且干燥，適宜于MP的生存和傳播而致MP流行。此外，患兒的年齡也影響MP感染的陽性率?！?個月患兒MP感染率不到6%，1～<4歲患兒MP感染則超過60%。MP主要經(jīng)飛沫傳播，≤6個月嬰幼兒MP感染率低與其被動免疫和外界接觸較少密切相關(guān)。而1～<4歲幼兒多為學(xué)齡前兒童，自身的免疫系統(tǒng)尚在建立和發(fā)育之中，尚不健全，且相對于≤6個月嬰幼兒，活動的空間和接觸的人群也會廣些，因此，容易感染MP。該結(jié)果與文獻(xiàn)[7-8]的嬰兒期MP肺炎陽性率低，幼兒期陽性率逐漸增高的結(jié)論吻合。

本研究結(jié)果顯示，PPA和IIFA檢測MP-IgM陽性符合率為80.29%，陰性符合率為74.61%，總符合率為76.00%，PPA檢測MP-MP陽性率明顯高于IIFA(P<0.05)。造成這種差異的根本原因是PPA除了檢測MP-IgM外，還包括了MP-IgG和MP-IgA，因此，靈敏度比IIFA高，但特異度遜色于后者。IIFA和PPA檢測同為陽性，如本文報(bào)道的493例患兒，結(jié)合臨床表現(xiàn)、療效和愈后，提示為MP現(xiàn)癥感染或近期感染。值得注意是，對于嬰幼兒或免疫功能低下者以及一些早期MP感染患者，產(chǎn)生的MP-IgM少，甚至不產(chǎn)生，PPA檢測有可能為陰性[9-10]。IIFA雖可在MP急性感染期檢出低水平的MP-IgM，但可能對MP中后期感染的檢測無能為力。因此，對于這些臨床上高度懷疑為MP感染但PPA和IIFA測試為陰性的患兒，有待做進(jìn)一步檢查或過幾天抽血復(fù)查。本研究中尚有部分病例出現(xiàn)兩者結(jié)果不一致的情況，這是由于患兒在MP感染的不同階段或重復(fù)感染或存在自身抗體時所致?；谝陨系难芯拷Y(jié)果，臨床上有必要同時采用PPA和IIFA檢測MP抗體，能提高實(shí)驗(yàn)診斷MP感染的能力。本研究結(jié)果也證實(shí)了以上觀點(diǎn)。

綜上所述，PPA和IIFA檢測MP各有優(yōu)劣。PPA不需任何設(shè)備、易于開展，特異度和靈敏度基本滿足臨床需求，可作為檢測MP早期感染的診斷方法。IIFA特異性強(qiáng)、操作簡便、快速、重復(fù)性好，檢測結(jié)果陽性基本可以確定為MP感染。因此，建議臨床聯(lián)合應(yīng)用PPA和IIFA檢測，結(jié)合患者情況綜合分析MP抗體陰陽性的臨床意義，提高M(jìn)P感染早期診斷的確診率。

[1]楊春．兒童肺炎支原體檢測方法和感染狀況的分析[J]．中外醫(yī)學(xué)研究，2011，9(27)：55-56．

[2]劉俊峰，蘇丹，馮素花，等．317例兒童肺炎支原體感染檢驗(yàn)結(jié)果分析[J]．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8(16)：1948-1949．

[3]王柯靜．小兒肺炎支原體肺炎的研究進(jìn)展[J]．醫(yī)學(xué)綜述，2013，19(23)：4306-4308．

[4]劉建平，黃莉，季偉，等．特異性IgG、IgM定量檢測在小兒肺炎支原體感染中的臨床意義[J]．蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2007，27(6)：910-912．

[5]張健，李莉，王文龍，等．肺炎支原體抗體分型檢測和被動顆粒凝集檢測結(jié)果比較[J]．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，35(7)：639-642．

[6]成小英，梅微.1 796例呼吸道感染患者肺炎支原體抗體檢測的結(jié)果分析[J]．國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，2010，16(23)：2913-2915．

[7]袁凱，鄢素琪，湯建橋，等．20 523例肺炎支原體感染患者血清學(xué)檢測分析[J]．華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2013，42(4)：493-494．

[8]馮梅，蔣喜鳳．1 090例急性呼吸道感染患兒肺炎支原體IgM檢測分析[J]．內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2013，32(13)：46-47．

[9]黃秀蘭．不同年齡、性別兒童感染肺炎支原體的差異分析[J]．中國現(xiàn)代醫(yī)生，2010，48(24)：71-72．

[10]吳曉，鄭穎，趙志鋼，等．被動凝集法檢測肺炎支原體抗體的實(shí)驗(yàn)室研究[J]．中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19(12)：2886-2888．

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.17.043

A

1673-4130(2016)17-2460-02

2016-03-12

2016-05-19)