翟春清，劉　旭

(天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科　300193)

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·論著·

全自動毛細(xì)管血清蛋白電泳在肝癌中的臨床價值

翟春清，劉旭△

(天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科300193)

目的通過全自動毛細(xì)管血清蛋白電泳檢測清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β1球蛋白、β2球蛋白、γ球蛋白，探討以上指標(biāo)在肝癌中的臨床價值。方法收集2014年12月至2015年11月住院患者83例，其中原發(fā)性肝癌51例，繼發(fā)性肝癌32例，運(yùn)用全自動生化分析儀和全自動毛細(xì)管血清蛋白電泳檢測患者血清的清蛋白(定量指標(biāo)以g/L表示，定性指標(biāo)以%表示)、總蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β1球蛋白、β2球蛋白、γ球蛋白8項(xiàng)指標(biāo)，并隨機(jī)抽查100例健康體檢者作為對照組，觀察比較以上8項(xiàng)檢測指標(biāo)在各組的差異。結(jié)果原發(fā)性肝癌組治療前與對照組比較，清蛋白(%)和γ球蛋白差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；原發(fā)性肝癌組治療后與對照組比較，清蛋白(g/L)、清蛋白(%)、β1球蛋白和γ球蛋白差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；原發(fā)性肝癌組治療前、后比較，清蛋白(g/L)和清蛋白(%)水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；γ球蛋白診斷原發(fā)性肝癌敏感度和特異度明顯高于其余3項(xiàng)指標(biāo)；同時對各組人群的血清γ球蛋白陽性率比較，原發(fā)性肝癌組患者γ球蛋白陽性率高于對照組和繼發(fā)性肝癌組(P<0.05)。結(jié)論通過全自動毛細(xì)管血清蛋白電泳檢測發(fā)現(xiàn)，γ球蛋白在肝癌的診治中具有一定的臨床價值。

全自動毛細(xì)管；血清蛋白電泳；肝癌

原發(fā)性肝癌簡稱肝癌,病死率僅次于肺癌[1]，是國內(nèi)外常見的惡性腫瘤，全球發(fā)病率逐年增長，在腫瘤死亡原因中位居第二位。大部分的肝癌患者在確診時已經(jīng)是中晚期，故在診斷時已失去了最佳的治療時機(jī)。肝癌的預(yù)防要做到早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療。當(dāng)肝臟發(fā)生病變，血清蛋白組分的比例也發(fā)生了變化[2]。 本研究收集83例來自天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院肝癌患者及100例健康體檢者血清，用美國貝克曼庫爾特公司全自動生化分析儀AU5800對清蛋白和總蛋白進(jìn)行定量檢測，用法國西比亞公司的全自動毛細(xì)管電泳分析儀進(jìn)一步對血清蛋白電泳中清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β1球蛋白、β2球蛋白、γ球蛋白6項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測，以探討這幾項(xiàng)指標(biāo)對肝癌診治的特異度和敏感度，為肝癌臨床預(yù)測、早期診斷、療效監(jiān)測與預(yù)后評估提供依據(jù)。

1　資料與方法

1.1一般資料選取天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2014年12月至2015年11月住院的83例肝癌患者，年齡38～76歲，平均(54±16)歲，均經(jīng)病理檢查確診。83例肝癌患者中原發(fā)性肝癌51例，繼發(fā)性肝癌32例。選取2013年1月至2013年4月的100例健康體檢者為對照組，年齡36～76歲，平均(53±18)歲，血液生化常規(guī)檢查均正常，病毒血清學(xué)檢查均陰性，無高血壓、糖尿病等慢性疾病。所有研究對象均知情同意，填寫知情同意書，研究內(nèi)容符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求。

1.2儀器與試劑采用全自動毛細(xì)管電泳分析儀及原裝配套試劑(法國西比亞公司)，AU5800全自動生化分析儀及原裝配套試劑(美國貝克曼庫爾特公司)，超速離心機(jī)進(jìn)行檢測。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集原發(fā)性肝癌患者于治療前、后，繼發(fā)性肝癌于治療前，對照組人群于體檢時，均空腹抽取靜脈血3 mL,3 000 r/min離心15 min,分取上層血清。

1.3.2清蛋白和總蛋白檢測清蛋白(定量指標(biāo)，以g/L表示)和總蛋白檢測采用全自動生化分析儀，加樣機(jī)吸入樣品，將樣品加至反應(yīng)杯，試劑加注機(jī)在相應(yīng)的反應(yīng)杯加入試劑，攪拌機(jī)進(jìn)行攪拌。反應(yīng)液在杯中每橫切1次光路，多波長光度計(jì)測定1次吸光度，儀器記錄1次測光，儀器采用全反應(yīng)過程測光方式，在設(shè)定反應(yīng)時間中，不間斷地測定反應(yīng)液吸光度。儀器內(nèi)部的精密光電轉(zhuǎn)換裝置將測得的光信號轉(zhuǎn)換成電信號，無變形數(shù)模轉(zhuǎn)換裝置將電信號轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號并輸出，在顯示器、打印機(jī)或外接的LIS系統(tǒng)上，可以得到檢測結(jié)果。

1.3.3全自動毛細(xì)管血清蛋白電泳的檢測清蛋白(定性指標(biāo)，以%表示)、α1球蛋白、α2球蛋白、β1球蛋白、β2球蛋白、γ球蛋白6項(xiàng)指標(biāo)檢測按照儀器操作說明書進(jìn)行，把裝有標(biāo)本的試管按順序放在儀器配套的檢測架上(1個檢測架1次可檢測8份標(biāo)本，可同時檢測多批標(biāo)本)。把檢測架送入全自動毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行血清蛋白電泳檢測，約10 min后全部檢測程序完畢，查看結(jié)果。

2　結(jié)　　果

2.1各組血清蛋白水平比較與對照組比較，原發(fā)性肝癌組治療前清蛋白(%)和γ球蛋白差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而繼發(fā)性肝癌組各指標(biāo)改變不明顯，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。原發(fā)性肝癌組治療前與繼發(fā)性肝癌治療前比較，γ球蛋白差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。原發(fā)性肝癌組治療后與對照組比較，清蛋白(g/L)、清蛋白(%)、β1球蛋白和γ球蛋白差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與原發(fā)性肝癌組治療前比較，清蛋白(g/L)和清蛋白(%)水平降低，γ球蛋白增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1　　各組血清蛋白水平比較±s)

注：與對照組比較,#P<0.05；與繼發(fā)性肝癌組比較,*P<0.05；與原發(fā)性肝癌組治療前比較，▲P<0.05。

2.2血清蛋白在肝癌中的臨床價值清蛋白(g/L)、清蛋白(%)和β1球蛋白分別取41.05 g/L、55.80%和5.15%為其臨界值時，判斷肝癌的敏感度、特異度。結(jié)果表明清蛋白(g/L)、清蛋白(%)和β1球蛋白對肝癌的診斷價值不高，而γ球蛋白取18.05%為臨界值時，判斷肝癌的敏感度為78.4%、特異度為80.0%，且γ球蛋白的AUC為0.778，因此γ球蛋白對肝癌疾病有良好的預(yù)測價值。同時，通過陽性預(yù)測值的比較，4項(xiàng)指標(biāo)均有較高的預(yù)測價值；但陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值聯(lián)合比較時，γ球蛋白具有較好的預(yù)測價值。見表2。

表2　　4種蛋白的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、AUC結(jié)果

2.3各組血清γ球蛋白的陽性率比較原發(fā)性肝癌組患者γ球蛋白陽性率為58.82%，明顯高于繼發(fā)性肝癌組(31.25%)和對照組(20.00%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P分別為0.014、0.001)。說明γ球蛋白在原發(fā)性肝癌預(yù)測中具有較好的臨床應(yīng)用價值。

3　討　　論

毛細(xì)管電泳技術(shù)與傳統(tǒng)的電泳技術(shù)相比較，它具有高靈敏度、高速度、高分辨率、低成本、少樣品和應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)。在短短幾年時間里毛細(xì)管電泳技術(shù)就已經(jīng)成為蛋白質(zhì)、多肽、核酸及其他生物分子分離和分析的一項(xiàng)重要技術(shù)[3]。采用毛細(xì)管電泳技術(shù)避免了凝膠電泳法染色、脫色過程中多種影響因素造成的誤差，并能夠準(zhǔn)確計(jì)算各蛋白質(zhì)的相對水平，同時毛細(xì)管電泳技術(shù)法的結(jié)果可信度高、重復(fù)性好[4]。利用全自動的血清蛋白電泳儀器開展疾病確診與資料工作，對多種疾病的臨床診斷都具有重要的臨床意義[5]。臨床醫(yī)生在診治肝癌過程中，毛細(xì)管電泳作為一種檢測肝癌的手段，有著不可代替的作用。

清蛋白和球蛋白組成總蛋白?？偟鞍讬z查反映肝臟的儲備能力，主要檢測肝功能的代謝能力。血漿中含量最多的蛋白質(zhì)是清蛋白，由肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成。一般人清蛋白量越多，身體就越健康。肝功能出現(xiàn)障礙，肝細(xì)胞受損，肝臟合成的蛋白質(zhì)就減少，清蛋白明顯下降，從而造成總蛋白降低。在肝功能檢查中，檢查清蛋白的作用是根據(jù)其結(jié)果來判斷某些疾病。肝癌切除術(shù)后患者是低蛋白血癥的高發(fā)人群，肝臟是人體合成清蛋白的主要器官，但肝癌患者自身肝功能異常，同時手術(shù)切除部分肝臟后將降低肝臟的清蛋白合成功能，且患者圍術(shù)期處于高代謝狀態(tài)，將加速蛋白質(zhì)的分解，容易導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)負(fù)氮平衡[6]。故本文中原發(fā)性肝癌組治療后的清蛋白(g/L)和清蛋白(%)水平明顯低于治療前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但是清蛋白的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值和AUC對肝癌的診斷并沒有臨床價值。

大部分在肝細(xì)胞外生成的蛋白是球蛋白，球蛋白與人體的免疫力有直接關(guān)系，球蛋白值偏高說明體內(nèi)存在免疫系統(tǒng)的亢進(jìn)，偏低則說明免疫力不足。β球蛋白主要由轉(zhuǎn)鐵蛋白、β脂蛋白、補(bǔ)體C3和少量免疫球蛋白(IgA、IgG)組成，本研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝癌組治療后與對照組比較，β1球蛋白水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。從表2可見檢測β1球蛋白水平對肝癌檢測的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值分別為43.1%、26.7%、50.0%、21.6%，在本組中敏感度和陽性預(yù)測值相對較高，與γ球蛋白比較卻偏低。β1球蛋白的AUC為0.267，由此可知，β1球蛋白在肝癌早期預(yù)測和預(yù)后估計(jì)的臨床價值較低。

γ球蛋白主要由免疫蛋白組成。損傷的肝細(xì)胞作為自身抗原刺激淋巴系統(tǒng)大量生成γ球蛋白，并且在肝臟疾病時γ球蛋白增高呈現(xiàn)多株性，增高程度與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)[7]，這種變化與肝細(xì)胞損傷的嚴(yán)重程度呈正比。血清γ球蛋白不僅能夠反映肝組織纖維化程度和炎癥程度，還能夠反映肝功能損傷程度，因此臨床上動態(tài)觀察血清球蛋白變化，對于肝病預(yù)后判斷及病情評價有參考價值。血清γ球蛋白是肝癌肝切除術(shù)前預(yù)測肝臟儲備功能的較好的指標(biāo)，并且可在一定程度上彌補(bǔ)肝功能分級的不足[8]。本研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝癌組與對照組比較，原發(fā)性肝癌治療前、后比較，γ球蛋白水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，原發(fā)性肝癌組治療前明顯高于對照組和繼發(fā)性肝癌組，由此可知，γ球蛋白增高對提示肝功能損傷的判斷有一定的臨床價值。術(shù)后肝功能級別下降的患者比肝功能級別維持不變或升高的患者術(shù)前血清γ球蛋白明顯升高(P<0.05)，原發(fā)性肝癌治療后與治療前的差值低于原發(fā)性肝癌治療前與對照組的差值，因此γ球蛋白是相對降低的。同時本研究結(jié)果顯示，檢測γ球蛋白對肝癌的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值分別為78.4%、80.0%、86.9%、68.6%，AUC為0.778，原發(fā)性肝癌組患者γ球蛋白陽性率明顯高于繼發(fā)性肝癌和對照組，提示γ球蛋白在肝癌的早期診斷和預(yù)后估計(jì)中最具預(yù)示價值。

本研究結(jié)果顯示,原發(fā)性肝癌治療后與治療前比較，清蛋白(g/L)和總蛋白水平顯著降低，而α1球蛋白、β2球蛋白和γ球蛋白卻相對升高。這種情況下，肝癌本身伴有潛在的感染、炎癥、肝損傷等[9]。α1球蛋白中包括甲胎蛋白，而甲胎蛋白則是一種特異的血清標(biāo)志物，有助于原發(fā)性肝癌的診斷。此外，甲胎蛋白在檢測肝病病程、判斷療效和預(yù)后、提示術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移中起著決定性作用。60%～70%的肝癌患者的甲胎蛋白值是升高的[10]。至今為止，甲胎蛋白仍然是肝癌最特異的指標(biāo)，但在一些良性肝病患者中甲胎蛋白也會有不同程度的升高[11]。故由此判斷因甲胎蛋白的增高引起的α1球蛋白的增高?，F(xiàn)在許多學(xué)者認(rèn)為,測定γ球蛋白不能幫助特異性診斷的建立,但是可以為慢性肝病的存在提供有利線索[12]。

綜上所述，清蛋白的降低是因?yàn)楦闻K損傷、代謝增加、產(chǎn)生減少等；α1球蛋白的增高可能是因?yàn)槠渲泻屑滋サ鞍?，而甲胎蛋白是診斷肝癌的特異指標(biāo)；γ球蛋白能反映肝功能損傷程度。下一步的研究重點(diǎn)應(yīng)是根據(jù)不同年齡、不同病種建立實(shí)驗(yàn)室自己的不同分級，對γ球蛋繼續(xù)進(jìn)行分析，以利于對疾病更好的篩查和診斷。

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Clinical value of automatic capillary serum protein electrophoresis in liver cancer

ZHAIChunqing,LIUXu△

(DepartmentofClinicalLaboratory,FirstAffiliatedHospital,TianjinUniversityofChineseMedicine,Tianjin300193,China)

ObjectiveTo investigate the clinical value of 6-indicator of albumin,alpha 1 globulin,alpha 2 globulin,beta 1 globulin,beta 2 globulin and gamma globulin detected by the automatic capillary serum protein electrophoresis in liver cancer disease.MethodsEighty-three hospitalized patients(51 cases of primary liver cancer and 32 cases of secondary liver cancer) in our hospital from December 2014 to November 2015 were collected.The automatic biochemical analyzer and automatic capillary serum protein electrophoresis was adopted to detect the 8 indicators of serum albumin(g/L for quantitative indicator and % for qualitative indicator),total protein,alpha 1 globulin,alpha 2 globulin,beta 1 globulin,beta 2 globulin,gamma globulin.And 100 individuals undergoing the healthy physical examination were randomly extracted as the control group.The levels of above 8 indicators were compared among various groups.ResultsThe level of albumin(%) and gamma globulin had statistical difference between the primary liver cancer group before treatment and the control group(P<0.05);the levels of albumin(g/L),albumin(%),beta 1 globulin and gamma globulin had statistical difference between the primary liver cancer group after treatment and the control group(P<0.05);the levels of albumin(g/L) and albumin(%) after treatment in the primary liver cancer group were decreased compared with before treatment,the difference was statistical difference(P<0.05);the sensitivity and specificity of gamma globulin for indicating primary liver cancer were significantly higher than those of the other three indicators;at the same time in the comparison of the positive rate of serum gamma globulin,the positive rate of serum gamma globulin in the primary liver cancer group was higher than that in the secondary liver cancer group and the control group(P<0.05).ConclusionThe automatic capillary serum protein electrophoresis detection finds that gamma globulin has some clinical value in the diagnosis and treatment of liver cancer.

automatic capillary；serum protein electrophoresis；liver cancer

翟春清，女，技師，主要從事免疫蛋白電泳與腫瘤的研究?！?/p>

，E-mail:tjzyyfyLiuxu@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.17.012

A

1673-4130(2016)17-2389-03

2016-03-21

2016-05-29)