孔　偉，曹振卿，盧旺銀，楊海濤

(1.甘肅省家畜繁育中心，甘肅 武威 733000；2.陜西省家畜改良站)

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種公牛注射不同口蹄疫疫苗的效果觀察

孔偉1，曹振卿1，盧旺銀1，楊海濤2

(1.甘肅省家畜繁育中心，甘肅 武威 733000；2.陜西省家畜改良站)

口蹄疫(FMD)是一種急性發(fā)熱性并具有高度接觸性的人畜共患傳染病，感染率之高對(duì)社會(huì)危害大，居眾多疫病之首，目前國(guó)內(nèi)外主要采取給易感動(dòng)物接種疫苗的措施預(yù)防和控制該病。種公牛是良種改良基因的主要提供者，防疫安全是重中之重，而疫苗免疫效果的好壞直接關(guān)系到口蹄疫的防控效果。甘肅省家畜繁育中心在3年內(nèi)選擇了2個(gè)廠家二聯(lián)苗和一個(gè)廠家的三聯(lián)口蹄疫O型、Asia1型二聯(lián)，O型、A型、Asia1型三聯(lián)疫苗進(jìn)行免疫注射，根據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)觀察對(duì)種公牛的影響，其中1號(hào)、2號(hào)疫苗免疫抗體水平不整齊、免疫保護(hù)時(shí)間小于180 d，個(gè)別牛沒(méi)有產(chǎn)生免疫抗體水，疫苗過(guò)敏頭數(shù)多且重。通過(guò)檢測(cè)3號(hào)三聯(lián)苗，免疫后抗體水平保持了較高水平，衰減期達(dá)到180 d以上，大大延長(zhǎng)了保護(hù)時(shí)間。

種公牛；口蹄疫疫苗；免疫抗體；免疫效果

口蹄疫病毒多在冬、春季節(jié)流行，隨著動(dòng)物交易的大流通，跨多區(qū)域運(yùn)輸家畜及畜產(chǎn)品，高密集養(yǎng)殖，以及部分養(yǎng)殖人員法律意識(shí)淡漠，監(jiān)管缺位，糞污隨意處置，致使該病的發(fā)生頻次增加，造成該病的流行無(wú)明顯的季節(jié)性，防控難度增大。另外，異常天氣、鳥(niǎo)類、野生動(dòng)物、寵物也助推了該病的遠(yuǎn)距離傳播。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物的選擇

選擇健康無(wú)病4個(gè)品種的種用公牛56頭，按年度選擇不同廠家的口蹄疫疫苗進(jìn)行免疫注射，統(tǒng)計(jì)分析觀察口蹄疫疫苗注射后種公牛表現(xiàn)，生產(chǎn)數(shù)據(jù)變化、免疫抗體水平及時(shí)間。

1.2主要儀器設(shè)備

精子密度測(cè)定儀、電子天平、細(xì)管精液分裝打印一體機(jī)、平衡冷柜、相差顯微鏡、程控溫冷凍儀、恒溫水浴鍋、超聲波洗滌器、測(cè)杖、軟尺、地磅、16×16不銹鋼針頭、5 mL醫(yī)用注射器、采血針、離心機(jī)、10～20 mL采血管、移液管、脫脂棉、紗布、記號(hào)筆。

1.3試驗(yàn)材料

口蹄疫Asia I-O二價(jià)滅活疫苗(新疆、甘肅)，O型、A型、亞Ⅰ(內(nèi)蒙)、0.1%鹽酸腎上腺素、地塞米松磷酸鈉、氨茶堿、氫化可的松、苯海拉明、5%葡萄糖鹽水、維生素C、維生素B、5%碳酸氫鈉、普魯卡因青霉素注射液(油劑)。將三個(gè)廠家疫苗分別編號(hào)1號(hào)苗(新疆產(chǎn))，2號(hào)苗(甘肅產(chǎn))，3號(hào)苗(內(nèi)蒙產(chǎn))。

1.4檢測(cè)用試劑與方法

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)提供的O型、亞洲I型、A型口蹄疫抗體檢測(cè)液相阻斷(LB-ELISA)試劑盒，均在有效期內(nèi)使用。O型口蹄疫抗體檢測(cè)方法用LB-ELISA: GB/T18935-2003；亞洲I型口蹄疫抗體檢測(cè)方法用LB-ELISA:GB/T18935-2003；A型口蹄疫抗體檢測(cè)方法用LB-ELISA:GB/T18935-2003。

1.5飼養(yǎng)管理方法

種公牛采取半封閉牛舍單欄飼喂，定點(diǎn)、定時(shí)、定員飼喂，自由飲水、自由運(yùn)動(dòng)。飼草以東北羊草為主，輔飼苜蓿草、燕麥草，精料補(bǔ)充料根據(jù)其營(yíng)養(yǎng)需要自行配制。飼喂量根據(jù)種公牛月齡與體重而定，日糧干物質(zhì)占體重的百分比為1.5%～1.7%。干草日飼喂量為10～15 kg,補(bǔ)充料日喂量為3.5～5.5 kg,分三次飼喂，秋冬季每天飼喂胡蘿卜2 kg。

1.6疫苗注射時(shí)間

在6年中省、地獸醫(yī)部門提供了3個(gè)廠家疫苗對(duì)種公牛進(jìn)行免疫注射，1號(hào)苗注射時(shí)間2011～2012年，2號(hào)苗為2013～2014年，3號(hào)苗2015～2016年，每年注射2次。

1.7數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0進(jìn)行檢驗(yàn)，各組數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2　結(jié)果與分析

2.1注射口蹄疫疫苗后種公牛臨床癥狀變化

種公牛注射1號(hào)、2號(hào)口蹄疫苗后部分或群體表現(xiàn)為虛弱無(wú)神、低頭耷耳、不愿活動(dòng)、眼睛潮紅、流口水、采食減少、體溫升高、呼吸急促等應(yīng)激癥狀，注射部位腫脹，肌肉堅(jiān)硬形成包塊，長(zhǎng)期不散；注射1號(hào)苗其中一個(gè)批次3頭種公牛連續(xù)1年原精液理化指標(biāo)沒(méi)有達(dá)到合格，造成淘汰。3號(hào)苗注射后種公牛當(dāng)天采食有所減少，沒(méi)發(fā)現(xiàn)其他異常反應(yīng)。

表1　過(guò)敏反應(yīng)情況

2.2注射口蹄疫疫苗前后種公牛精液品質(zhì)變化

接種1號(hào)、2號(hào)疫苗后，種公牛的精子密度顯著減小、精子畸形率顯著增加、精子頂體完整率顯著下降、精子存活率顯著減弱。究其原因，可能與疫苗的注射應(yīng)激及疫苗中氫氧化鋁或雙相礦物油等佐劑對(duì)動(dòng)物細(xì)胞具有毒性作用有關(guān)，另外與種公牛精液生成有關(guān)，因一個(gè)精子發(fā)生周期所需時(shí)間為45～60 d。種公牛所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)必須從日常的日糧中獲取，包括水、蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂肪、礦物質(zhì)和維生素等。各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)保持相對(duì)平衡，任何一種或多或少，都將導(dǎo)致公牛機(jī)體功能異常。

經(jīng)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)注射前15 d和注射后15 d凍精生產(chǎn)情況，注射1號(hào)和2號(hào)苗期間生產(chǎn)量差異顯著(P<0.05)，3號(hào)苗公牛凍精生產(chǎn)量差異不顯著(P>0.05)。

2.3免疫檢測(cè)

對(duì)種公牛于免疫后 1 個(gè)月隨機(jī)各抽樣采集一定數(shù)量的血清，并于免疫后 21d、60 d、120 d、170 d 4次采集分離血清，進(jìn)行口蹄疫免疫效果監(jiān)測(cè)，并依據(jù)農(nóng)業(yè)部規(guī)定的免疫監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。

2013年、2014年A型苗為獨(dú)立注射，O型、Asia1型二聯(lián)苗，抗體效價(jià)≥1：128，保護(hù)率達(dá)99%以上；效價(jià)在1:22～90之間，保護(hù)率達(dá)50%；效價(jià)≤1:16就失去對(duì)種公牛的保護(hù)。

表2　接種口蹄疫疫苗前后種公牛精液理化指標(biāo)的變化

注：①接種前指免疫接種前15 d，接種后指免疫接種后15 d；②同列肩標(biāo)相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，相鄰不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

表3　牛凍精生產(chǎn)量的變化

表4　免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

3　討論

3.1注射1號(hào)、2號(hào)口蹄疫疫苗按使用說(shuō)明劑量注射抗體水平不整齊，考慮到種公牛體重比一般牛體重要大，將注射劑量增加到3 mL注射后免疫抗體水平整體得到提高，有效保護(hù)期持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)，O型、A型、Asia1型分別為18 d、22 d、17 d，但過(guò)敏反應(yīng)頭數(shù)增加，注射部位形成結(jié)節(jié)60%，免疫抗體在180 d前全部低于保護(hù)水平，與3號(hào)苗形成明顯反差。一年注射兩次達(dá)不到保護(hù)效果，多次注射對(duì)種公牛生產(chǎn)影響較大，也是種公牛防疫和安全生產(chǎn)的難題。

3.2對(duì)出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)較重的公牛要及時(shí)搶救、方法正確，沒(méi)有發(fā)生死亡。注射2號(hào)苗中的一個(gè)批次后，對(duì)過(guò)敏種公牛救治后5頭1年后經(jīng)調(diào)治恢復(fù)正常生產(chǎn)，3頭種公牛失去生產(chǎn)價(jià)值被淘汰，造成了很大的飼養(yǎng)和引種成本，對(duì)飼養(yǎng)種畜疫苗選擇非常重要。為保證生產(chǎn)安全，每批次疫苗注射后都應(yīng)進(jìn)行免疫抗體檢測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題并給予補(bǔ)救。根據(jù)以上充分說(shuō)明疫苗選擇非常重要，對(duì)保護(hù)種公牛安全生產(chǎn)的同時(shí)，延長(zhǎng)了保護(hù)時(shí)間，減少了疫苗使用頻次，增加了生產(chǎn)效益，降低了生產(chǎn)成本。

3.31號(hào)、2號(hào)疫苗免疫后實(shí)際抗體水平及保護(hù)期，群體達(dá)不到廠家產(chǎn)品說(shuō)明書上標(biāo)示的6個(gè)月免疫保護(hù)期，疫苗免疫水平與病原的性質(zhì)、疫苗給予的途徑、個(gè)體差異以及所使用的免疫佐劑相關(guān)，3號(hào)苗按照說(shuō)明書劑量每頭?？紤]到注射針頭(16x16)內(nèi)的殘留，注射時(shí)將劑量增加0.2 mL，每瓶100 mL注射45～46頭種公牛，疫苗的質(zhì)量以及廠家和批次的差異是造成免疫保護(hù)期短及免疫后抗體水平低不整齊的重要原因。同時(shí)要及時(shí)監(jiān)測(cè)免疫后抗體狀況，適時(shí)補(bǔ)免，才能使種公牛處于良好的免疫保護(hù)狀態(tài)下。對(duì)于3頭種公牛注射2號(hào)苗后長(zhǎng)時(shí)間沒(méi)能恢復(fù)生產(chǎn)能力也是今后關(guān)注的技術(shù)難點(diǎn)。

[1]中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部檢測(cè)中心.NY/SY 150-2000 口蹄疫診斷技術(shù)[S].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2000.

[2]蔣文俊，李華春，李樂(lè)，等.口蹄疫疫苗研究進(jìn)展[J].畜牧與獸醫(yī)，2004,36(5):42-43.

[3]張海濤，劉玉，張曉霞，等.影響公牛精液產(chǎn)量的因素及應(yīng)對(duì)措施[J].中國(guó)奶牛, 2006(10)：21-23.

2016-07-07

孔偉(1972-),男,甘肅臨澤人,高級(jí)獸醫(yī)師,主要從事牛羊疫病防治,種牛培育,牛羊繁殖技術(shù),冷凍精液生產(chǎn)與推廣工作。E-mail:214533862 @qq.com

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1004-6704(2016)05-0102-02