吳艷萍　山東省博興縣畜牧獸醫(yī)局　256500

豬巴氏桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

吳艷萍山東省博興縣畜牧獸醫(yī)局256500

2015年10月，山東省博興某豬場(chǎng)飼養(yǎng)的仔豬發(fā)生一種以呼吸嚴(yán)重困難和敗血癥為主要特征的疫病。無(wú)菌采集病死豬的肺臟等組織進(jìn)行病原分離，通過(guò)分離菌株的菌落特征、形態(tài)特征和生化特性等鑒定，分離菌株為豬巴氏桿菌，致病性試驗(yàn)顯示分離菌株具有較強(qiáng)的致病性，藥敏試驗(yàn)顯示分離菌株對(duì)青霉素、氨芐西林、頭孢噻呋、氟苯尼考和卡那霉素5種藥物敏感。

豬巴氏桿菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)

豬巴氏桿菌病是由豬多殺性巴氏桿菌引起的一種以出血性敗血病、咽喉炎和肺炎為主要特征的急性、繼發(fā)性、細(xì)菌性傳染?。?.2］。該病的發(fā)生無(wú)明顯季節(jié)性，但秋冬氣候劇變、飼養(yǎng)條件改變和長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)热菀渍T發(fā)，故該病在我國(guó)一直呈散發(fā)性和地方性流行［3-4］。2015年10月，山東省博興某豬場(chǎng)飼養(yǎng)仔豬發(fā)生以精神沉郁、體溫升高、呼吸困難、口鼻流白色泡沫、氣管內(nèi)有大量泡沫黏液和肺臟充血、出血、淤血等為主要特征的疫病。本研究進(jìn)行了病原的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)，篩選出了針對(duì)該致病菌的敏感性藥物，為發(fā)病豬場(chǎng)防治措施的制定提供了參考。

1　材料與方法

無(wú)菌采集病死豬的肺臟、脾臟、肝臟、腎臟和淋巴結(jié)等組織。細(xì)菌微量生化反應(yīng)管購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司，潔級(jí)昆明系小白鼠購(gòu)自山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，藥敏紙片購(gòu)自北京天壇藥物生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。將采集的臨床病料樣品劃線接種于血液瓊脂平板，37℃恒溫培養(yǎng)24小時(shí)后，挑取生長(zhǎng)良好的單菌落劃線接種于平板進(jìn)行純化，連續(xù)傳3代，觀察菌落的生長(zhǎng)特征。挑取純化后的單菌落涂片，革蘭氏染色、鏡檢，觀察分離菌株的形態(tài)特征。將分離菌株分別接種于生化反應(yīng)管，18小時(shí)后觀察生化試驗(yàn)結(jié)果。將分離菌株腹腔注射昆明系小白鼠5只，0.2mL/只，同時(shí)取5只小白鼠腹腔注射培養(yǎng)基作為對(duì)照。隔離飼養(yǎng)，觀察小白鼠的發(fā)病和死亡情況，對(duì)死亡小白鼠進(jìn)行解剖，觀察病理變化。利用K-B菌液涂布法分別測(cè)定分離菌株對(duì)青霉素等12種常見(jiàn)藥物的敏感性，篩選出針對(duì)分離菌株的高敏藥物。判定標(biāo)準(zhǔn)為：當(dāng)抑菌環(huán)直徑在15mm以上判為高敏，抑菌環(huán)直徑在10～15mm之間判為中敏，抑菌環(huán)直徑在10mm以下判為耐藥。

2　結(jié)果與分析

（1）病原菌分離培養(yǎng)與純化結(jié)果。培養(yǎng)24小時(shí)后的血液瓊脂平板上可見(jiàn)露珠狀菌落，無(wú)溶血現(xiàn)象。經(jīng)連續(xù)3代純化后，得到大小均一、半透明、光滑濕潤(rùn)和邊緣整齊的露珠狀菌落。

（2）分離菌株形態(tài)特征觀察結(jié)果。革蘭氏染色后鏡檢可見(jiàn)革蘭氏陰性菌，呈短桿狀。

（3）分離菌株生化特性鑒定結(jié)果。分離菌株的生化特性如表1所示，其與豬巴氏桿菌的生化特性相符。

表1　分離菌株的生化特性

（4）致病性試驗(yàn)結(jié)果。接種分離菌株的5只小白鼠在接種后1小時(shí)，開(kāi)始出現(xiàn)精神沉郁等不適反應(yīng)，在接種后12小時(shí)內(nèi)全部死亡。解剖死亡小鼠可見(jiàn)肝臟、肺臟和心臟等臟器組織均具有出血點(diǎn)，取死亡小鼠的肝臟、肺臟和心臟等組織可再次分離出巴氏桿菌。同時(shí)接種培養(yǎng)基的5只小白鼠均生長(zhǎng)正常，無(wú)不適反應(yīng)。

（5）藥敏試驗(yàn)結(jié)果。如表2所示，分離菌株對(duì)青霉素等12種藥物表現(xiàn)出了不同程度的敏感性，其中高敏藥物5種（青霉素、氨芐西林、頭孢噻呋、氟苯尼考、卡那霉素），中敏藥物3種（氧氟沙星、慶大霉素、諾氟沙星），耐藥藥物4種（環(huán)丙沙星、四環(huán)素、土霉素、復(fù)方新諾明）。

表2　分離菌株對(duì)12種藥物的敏感性

3　討論

豬巴氏桿菌在豬群中屬于條件性致病菌，即該菌在豬群中廣泛存在，當(dāng)豬的免疫力和抗病力下降，該病原菌可大量增殖并侵入機(jī)體發(fā)生內(nèi)源性感染，進(jìn)而引起發(fā)病。故該病的綜合防治措施應(yīng)采取以加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生為主的預(yù)防方法，采取“防重于治”的原則，從源頭上控制該病的發(fā)生和流行。

目前，臨床上控制豬巴氏桿菌病最有效、最快速的方法是使用抗菌藥物進(jìn)行治療，但是隨著抗菌藥物大量、盲目的濫用，細(xì)菌的耐藥性亦越來(lái)越嚴(yán)重，給食品安全和人類健康造成潛在的威脅。張顯浩等［5］研究表明，豬巴氏桿菌分離株對(duì)青霉素、氨芐西林和頭孢類藥物均產(chǎn)生了一定的耐藥性。馬增軍等［6］研究表明，豬巴氏桿菌部分分離株對(duì)復(fù)方新諾明、慶大霉素和卡那霉素3種藥物耐藥。本研究中的分離菌株雖然對(duì)青霉素、氨芐西林、頭孢噻呋、氟苯尼考和卡那霉素5種藥物高度敏感，為發(fā)病豬場(chǎng)篩選出了治療性藥物，但是本研究中的分離菌株已對(duì)環(huán)丙沙星、四環(huán)素、土霉素和復(fù)方新諾明4種藥物產(chǎn)生了不同程度的耐藥性。綜合以上研究結(jié)果可以看出，豬巴氏桿菌不同地域分離株對(duì)不同藥物均已產(chǎn)生了一定的耐藥性，其整體耐藥性的發(fā)展趨勢(shì)不容樂(lè)觀，應(yīng)加強(qiáng)重視。

［1］朱俠.豬巴氏桿菌病及其防控措施［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘，2015，31（11）：132-133.

［2］王炎炎，黃坤英，丁孟建.豬多殺性巴氏桿菌病的診治［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2013，（1）：101-102.

［3］史正明.仔豬巴氏桿菌病病原的分離與鑒定［J］.山東畜牧獸醫(yī)，2015，36（9）：32-33.

［4］范靈霞.豬巴氏桿菌病的診斷與防治［J］.中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘，2014，30（12）：117.

［5］張顯浩，陳敏鴻，李冰，等.豬A型多殺性巴氏桿菌的分離鑒定及耐藥性分析［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)，2016（1）：110-112.

［6］馬增軍，芮萍，張軍輝，等.豬源多殺性巴氏桿菌分離鑒定與藥敏試驗(yàn)［J］.畜牧與獸醫(yī)，2015，47（7）：93-95.