常玉娟　曹敏敏　劉燕君　李依潔　Aimin周　陳建德　魏茹涵　張　平　魏　瑋　佟　麗

中國中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院(北京 100102)

?

胃康寧對(duì)功能性消化不良大鼠胃排空及血漿胃腸激素水平的影響*

常玉娟曹敏敏△劉燕君△李依潔Aimin周▲陳建德□魏茹涵▲張平△魏瑋▲■佟麗△

中國中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院(北京 100102)

目的：本研究旨在通過觀察胃康寧對(duì)功能性消化不良大鼠胃排空功能及血漿胃腸激素水平的影響，探討其對(duì)功能性消化不良的作用機(jī)制。方法：將雄性10日齡Wistar幼鼠50只，隨機(jī)分為正常組15只、模型組15只、中藥胃康寧組10只和陽性藥物組10只，采用0.1% IA灌胃誘導(dǎo)大鼠FD模型。觀察胃康寧對(duì)功能性消化不良大鼠食量、體重、胃排空功能等指標(biāo)的影響，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)血漿MTL、Ghrelin、obestatin和血清GAS含量變化。結(jié)果：與正常組相比，模型組大鼠攝食量、體重和胃排空率降低(P< 0.05)，血漿MTL、Ghrelin和血清GAS含量降低，血漿obestatin水平升高；與模型組比較，胃康寧組和多潘立酮組小鼠食量、體重和胃排空率增加，血漿MTL、Ghrelin及血清GAS含量升高，血漿obestatin水平降低。結(jié)論：胃康寧對(duì)功能性消化不良模型大鼠具有改善胃腸動(dòng)力、降低胃腸感覺過敏的作用，其治療機(jī)制可能與調(diào)節(jié)外周血MTL、Ghrelin、obestatin及GAS含量的變化有關(guān)。

主題詞消化不良@胃康寧實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物

ABSTRACT

Objective: To study the effect of weikangning on gastric emptying and plasma gastrointestinal hormones in rats with functional dyspepsia (FD)，and investigate its possible mechanism to regulate the Gastrointestinal function. Methods: The rats were randomly divided into fourgroups: model control group(n=15), domperidone group(n=10)，Weikangning group(n=10)，and normal control group(n=15)；the change of intake of water and food， body weight，and gastric emptying rate were observed. The levels of plasma motilin ,Ghrelin, Obestatin and gastrin were measured by ELISA method. Results: Compared with the normal group, the food intake, body weight and gastric emptying rate were reduced (P<0.05), the levels of plasma MTL, Ghrelin and serum GAS were lower, the levels of obestatin was higher in model group; While, the food intake, body weight and gastric emptying rate were increased, plasma MTL, Ghrelin andserum GAS were higher, the level of plasma obestatin was lower in Weikangning group and domperidone group, compared with the model group. Conclusion: Weikangning can improve the gastric motility and reduce gastrointestinal hypersensitivity in FD rats, and its mechanism may be related to regulating the levels of plasma motilin ,Ghrelin, Obestatin and gastrin.

功能性消化不良(Functional dyspepsia ,FD)以持續(xù)性的或反復(fù)發(fā)作的上腹部疼痛、脹滿、噯氣以及早飽等為主要臨床表現(xiàn)，但沒有任何器質(zhì)性原因可解釋一種消化系統(tǒng)的常見病[1]。調(diào)查顯示，因FD而就診者占國內(nèi)消化門診總量的20%～50%[2]。關(guān)于FD的病因和發(fā)病機(jī)制現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究已經(jīng)逐步深入和日趨廣泛，但尚無明確定論，除了胃腸動(dòng)力障礙、內(nèi)臟敏感性異常、胃腸激素的改變等這些熟知的作用機(jī)制，腦-腸軸功能障礙、精神心理障礙、遺傳易感性等因素也成為近年來研究熱點(diǎn)，F(xiàn)D可能是多方面因素綜合作用的結(jié)果，并且這些因素可相互影響[3]。其中胃動(dòng)素(motilin，MOT)能促進(jìn)胃排空、改善胃腸動(dòng)力障礙，對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)有重要調(diào)節(jié)作用[4]。胃促生長素( Ghrelin ) 可通過作用于迷走神經(jīng)而發(fā)揮調(diào)節(jié)功能，增加胃排空率，促進(jìn)胃動(dòng)力[5]。胃腸神經(jīng)激素對(duì)消化器官的調(diào)節(jié)作用是FD發(fā)病機(jī)制中重要的一環(huán)。 目前，西醫(yī)治療FD一線用藥多采用促胃腸動(dòng)力藥，如五羥色胺受體激動(dòng)劑或多巴胺受體阻滯劑等[6]。雖有一定療效，但不良反應(yīng)明顯，停藥后癥狀易反復(fù)。近年來，中醫(yī)藥治療FD 不但療效突出，并且在用藥的安全性，對(duì)患者身心癥狀的整體調(diào)節(jié)以及復(fù)發(fā)率的改善方面，中醫(yī)藥治療功能性胃腸病都表現(xiàn)出了一定的優(yōu)勢(shì)。中醫(yī)辛開苦降代表方胃康寧以調(diào)理脾胃升降，調(diào)節(jié)寒熱為基本原則，臨床取得了較好的效果，在改善患者消化道癥狀、中醫(yī)證候等多方面均療效顯著。我們研究了胃康寧對(duì)FD大鼠胃排空功能及Ghrelin、GAS等相關(guān)胃腸激素水平的影響，探討辛開苦降法對(duì)功能性消化不良的作用機(jī)理,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1材料1.1動(dòng)物SPF級(jí)10日齡Wistar幼鼠50只，雄性，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK(京)2012-0001。動(dòng)物飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)屏障級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境：室溫為(20±2)℃，濕度為(50±10)%，正常更替光照，24h供應(yīng)無菌飼料及飲用水。

1.2試劑和儀器Rat Gastrin ELISA Kit (貨號(hào)：CSB-E12743r)；Rat motilin (MTL) ELISA Kit(貨號(hào)：CSB-E08208r)；Rat Ghrelin (GHRL)ELISA Kit(貨號(hào)：CSB-E09816r)；Rat Obestatin ELISA Kit(貨號(hào)：CSB-E13642r)；試劑盒均購于CUSABIO華美公司。手提高壓鍋 (YX-280 ) 江陰濱江醫(yī)療設(shè)備廠；顯微鏡(BX43)OLYMPAS；組織自動(dòng)包埋機(jī)(TB-718)泰維科技；石蠟切片機(jī) (LEICA RM2135) LEICA 。

1.3藥物胃康寧方：黨參、白芍各15g，黃芩、柴胡、炙甘草各9g，姜半夏、厚樸、醋元胡各10g，砂仁 8g，郁金 18g等，所有藥物由中國中醫(yī)學(xué)科學(xué)院望京醫(yī)院藥劑科提供。依據(jù)體表面積公式計(jì)算出大鼠等效劑量為3.6g/kg/d，胃康寧中藥溶液生藥含量為1.2g/ml。多潘立酮片用滅菌蒸餾水配制成0.3mg/ml濃度溶液。以上藥液均儲(chǔ)存于4 ℃冰箱中，應(yīng)用前水浴到常溫(避免刺激實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胃腸道)。

2方法2.1動(dòng)物模型制備和給藥將雄性10日齡Wistar幼鼠50只，隨機(jī)分為正常組15只和造模組35只。正常組幼鼠給予2%蔗糖溶液0.2ml灌胃，1次/d；造模組幼鼠予0.1% IA和2% 蔗糖混合液0.2ml灌胃，1次/d，持續(xù)造模6 d。待大鼠8周齡進(jìn)行模型評(píng)定后，將造模成功的35只大鼠應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字法分組，模型組15只，胃康寧組和陽性藥物組各10只。胃康寧組和陽性藥組分別予相應(yīng)藥液灌胃，模型組和正常組予以0.9%氯化鈉溶液，灌胃體積均為1 ml/100g，1次/d，連續(xù)灌胃7d。

2.2觀察項(xiàng)目大鼠胃組織病理情況觀察大鼠8周齡時(shí)，分別取正常組、模型組大鼠各5只，異氟烷麻醉吸入式麻醉，取胃體中1/3段大小約0.8cm×0.8cm胃壁全層1塊，4% 多聚甲醛固定，石蠟包埋切片，行蘇木精-伊紅染色，鏡檢。其余大鼠給藥結(jié)束后，多潘立酮組、胃康寧組同樣行蘇木精-伊紅染色，鏡檢，操作同前。大鼠胃排空檢測(cè)：隨機(jī)抽取各組大鼠各5只，每只大鼠單籠飼養(yǎng)，禁食，不禁水，12h后每只大鼠分別給予15g特制無菌飼料，3h后稱重剩余飼料，計(jì)算得出大鼠3h攝食量。然后禁食、水，3h后檢測(cè)胃排空。大鼠麻醉后迅速摘取胃組織，經(jīng)濾紙擦干后稱重，得到胃全重值，剪開胃體，去除胃內(nèi)容物，擦干稱重，此為胃凈重。3h攝食量=15g-3h后剩余食量；3h胃內(nèi)食物殘留量=胃全重-胃凈重，3h胃排空率(%)=(1-3h胃內(nèi)食物殘留量/3h攝食量)×100%。大鼠GAS和MTL、Ghrelin、obestatin含量測(cè)定：大鼠灌胃結(jié)束后進(jìn)行血清檢測(cè)，心臟采血5～8ml，注入含10% EDTA的真空采血管中混勻，4℃下3000 r/min離心20 min取上清，移于EP管中，-20℃保存?zhèn)溆?。分別按試劑盒說明書，ELISA 法測(cè)定大鼠血漿中GAS和MTL、Ghrelin、obestatin含量。

2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，多組間計(jì)量資料比較采用單因素方差分析，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果3.1FD大鼠胃黏膜的變化模型組大鼠胃黏膜腺體排列正常，偶見少量慢性炎癥細(xì)胞浸潤，其余未見明顯異常；模型組、胃康寧組及多潘立酮組大鼠胃黏膜形態(tài)與空白組相比均沒有明顯異常改變。(圖1)

A：正常組；B：中藥組；C：陽性藥物組；D：模型組

3.2胃康寧對(duì)FD大鼠攝食及胃排空功能的影響與正常組相比，模型組大鼠攝食量、體重和胃排空率降低(P<0.05)，與模型組比較，胃康寧組和多潘立酮組小鼠食量、體重和胃排空率增加(P<0.05)，但胃康寧組與陽性藥組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。空白組、模型組、多潘立酮組及胃康寧組大鼠體重、3h攝食量、3h后胃內(nèi)食物殘留量及胃排空率見表1。

3.3胃康寧對(duì)FD大鼠血清GAS和MTL、Ghrelin、obestatin水平的影響與正常組相比，模型組大鼠血漿MTL、Ghrelin和血清GAS含量降低(P< 0.05)，血漿obestatin水平升高；與模型組比較，胃康寧組和多潘立酮組大鼠血漿MTL、Ghrelin及血清GAS含量升高(P< 0.05)，血漿obestatin水平降低，但胃康寧組與陽性藥組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？瞻捉M、模型組、多潘立酮組及胃康寧組大鼠血清GAS和MTL、Ghrelin、obestatin水平見表2。

表1　各組大鼠體重、攝食量、胃內(nèi)食物殘留量和胃排空率比較(n=5)

表2　各組大鼠血清MTL、GAS、Ghrelin及Obestatin含量比較(n=10)

4討論FD的病因及發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前認(rèn)為其是多種因素綜合作用的結(jié)果，不僅涉及胃腸動(dòng)力、胃腸激素的改變，并且與腦-腸軸、精神心理甚至遺傳因素等相關(guān)[3]。在諸多作用因素中，胃腸道動(dòng)力和感覺異常是其基礎(chǔ)[7]。胃腸激素分泌異常能夠直接影響胃腸道功能，是其發(fā)病的核心環(huán)節(jié)之一[8]。

胃動(dòng)素(MTL)能夠通過內(nèi)分泌及神經(jīng)途徑調(diào)節(jié)消化間期移行復(fù)合運(yùn)動(dòng)，參與MMCⅢ相收縮，促進(jìn)胃排空[6]。目前多數(shù)研究表明，F(xiàn)D患者M(jìn)TL分泌不足由此引起消化間期胃動(dòng)力障礙[9]。而胃泌素(GAS)不但可以刺激胃酸、胃蛋白酶及胰液的分泌從而影響胃腸消化吸收功能；并且能夠促進(jìn)胃竇、胃體乃至幽門的收縮，增強(qiáng)胃腸道的運(yùn)動(dòng)，加速胃排空。研究發(fā)現(xiàn)，胃排空延緩的 FD 組血漿 GAS 含量明顯低于正常人及胃排空正常FD 組，血清胃泌素水平降低可能是FD胃排空延遲的病理生理機(jī)制[10]。Ghrelin是由胃和下丘腦弓狀核神經(jīng)元釋放的腦腸肽, 廣泛分布于中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)，Ghrelin 能夠刺激食欲，增強(qiáng)胃腸動(dòng)力，參與調(diào)節(jié)胃酸和腺體的分泌，調(diào)解催乳素、腎上腺素等機(jī)體多種激素的釋放，維持體內(nèi)激素平衡，同時(shí)通過中樞和外周機(jī)制保護(hù)胃黏膜[11-12]。FD患者血漿ghrelin 水平與主觀癥狀的輕重程度具有一致性[13]，Ghrelin可中樞調(diào)節(jié)FD患者消化系統(tǒng)功能，具有促進(jìn)胃排空功能和改善臨床癥狀的作用[11]。Obestatin是與Ghrelin 同一基因編碼的由23個(gè)氨基酸組成的酰胺化的一種腦腸肽，與胃腸運(yùn)動(dòng)和食物攝取有關(guān)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，Obestatin能夠負(fù)向調(diào)節(jié)攝食，持續(xù)地抑制胃排空和小腸收縮，注射外源性的Obestatin后可以明顯抑制大鼠的攝食量和體質(zhì)量的增加，并且呈時(shí)間和劑量依賴性關(guān)系[14-15]。

本研究采用10日齡幼鼠給予IA灌胃6d造模法建立FD模型，在大鼠8周齡時(shí)模型組和正常組隨機(jī)抽取5只大鼠對(duì)FD模型進(jìn)行評(píng)定，以判斷造模是否成功。大鼠胃組織病理結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組大鼠胃黏膜組織形態(tài)雖然未見異常；但模型組大鼠的攝食、體重，包括胃排空率明顯低于正常組，提示造模成功。本研究顯示，存在胃動(dòng)力障礙的模型組大鼠，血清MTL、Ghrelin及GAS含量降低，而Obestatin含量有所升高；胃康寧方及陽性藥多潘立酮能夠加快FD大鼠的胃排空，并在一定程度上提高血清MTL、Ghrelin及GAS含量，降低血清Obestatin含量。本研究進(jìn)一步證明，機(jī)體胃腸激素水平對(duì)消化器官的調(diào)節(jié)作用，MTL、Ghrelin及GAS的降低，Obestati的升高，影響著機(jī)體的功能和FD的發(fā)病，并且四種激素可互相作用。胃康寧方干預(yù)后，F(xiàn)D大鼠的血清MTL、Ghrelin及GAS水平不同程度地升高，Obestatin水平不同程度地降低，可推測(cè)胃康寧可增強(qiáng)胃腸動(dòng)力，調(diào)節(jié)胃腸道的內(nèi)臟感覺功能而對(duì)FD起到治療作用。關(guān)于MTL和GAS對(duì)胃腸動(dòng)力的影響爭(zhēng)議較小，本研究結(jié)果與前期其他學(xué)者得出結(jié)果一致。雖然Obestatin和Ghrelin對(duì)于胃腸動(dòng)力學(xué)方面的生理作用已經(jīng)較為明確，但關(guān)于Obestatin和Ghrelin對(duì)于FD發(fā)病機(jī)制的影響目前尚存在一定爭(zhēng)議，甚至對(duì)于FD模型中Obestatin水平的變化不同研究中結(jié)果并不一致。有研究顯示，受體均屬于促生長激素釋放激素受體家族的Obestatin和Ghrelin，功能存在相關(guān)性[13]。本研究結(jié)果支持其觀點(diǎn)。但胃腸道功能的調(diào)節(jié)遠(yuǎn)比實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)復(fù)雜，大量激素、神經(jīng)遞質(zhì)共同作用并且相互影響。機(jī)體胃腸激素水平受多種因素的調(diào)節(jié)，包括體重、饑餓、飲食、血糖及機(jī)體其他激素分泌等在內(nèi)的多種因素，均可影響血清腦腸肽Ghrelin、Obestatin等的水平。就其調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力方面來說，Obestatin是否具有抑制胃腸運(yùn)動(dòng)、拮抗Ghrelin的功能目前仍然存在著較大的爭(zhēng)議。諸多問題有待于后續(xù)試驗(yàn)中進(jìn)一步深入研究。

中醫(yī)學(xué)將FD 歸于“痞滿”、“胃脘痛” 等范疇。外感六淫、內(nèi)傷七情、飲食勞倦、精神緊張等因素導(dǎo)致脾胃升降失司, 氣機(jī)阻滯中焦，因而出現(xiàn)上腹部疼痛不適、脹滿等一系列癥狀。本病一般多本虛標(biāo)實(shí), 寒熱錯(cuò)雜之證。治療寒熱錯(cuò)雜證,當(dāng)以辛開苦降, 平調(diào)寒熱為主。胃康寧方在調(diào)節(jié)脾胃臟腑功能的同時(shí), 重視人體氣機(jī)與情志的疏導(dǎo)，在此辛開苦降代表方半夏瀉心湯基礎(chǔ)上加入柴胡、郁金、枳殼、杏仁、焦三仙等制成，增強(qiáng)其疏肝理氣，調(diào)暢氣機(jī)，通府暢下之功。本研究表明，胃康寧方對(duì)FD模型大鼠具有改善食欲和體重，加快胃排空，降低胃腸感覺過敏的作用，并可影響大鼠胃腸激素水平，推測(cè)該方可能正是通過調(diào)節(jié)機(jī)體MTL、Ghrelin、GAS、Obestatin等的分泌，從而推動(dòng)胃腸運(yùn)動(dòng)，調(diào)節(jié)胃腸敏感性，多方面共同作用改善FD的臨床癥狀。胃腸道功能的調(diào)節(jié)機(jī)制龐大而復(fù)雜，受大量的激素、神經(jīng)遞質(zhì)等多方面因素的影響，辛開苦降方胃康寧對(duì)FD的作用機(jī)制還需要更加深入的研究，以期為中醫(yī)藥治療胃腸道動(dòng)力相關(guān)性疾病提供了新的研究依據(jù)和思路。

[1]陳灝珠，林果為，王吉耀．實(shí)用內(nèi)科學(xué)[M]．第14版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：1938.

[2]蔣芝山.奧美拉唑聯(lián)合馬來酸曲美布汀治療功能性消化不良55例[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志，2011,40(6):765.

[3]Shadi S. Yarandi, Jennifer Christie. Functional Dyspepsia in Review: Pathophysiology andChallenges in the Diagnosis and Management due to Coexisting Gastroesophageal Reflux Disease and Irritable Bowel Syndrome[J].Gastroenterology Research and Practice, 2013, 351086.

[4]Xu L，Gao S，Guo F，et al． Effect of motilin on gastric distension sensitive neurons in arcuate nucleus and gastric motility inrat[J]． Neurogastroenterol Motil，2011，23(3) : 265-270．

[5]Ogiso K, Asakawa A, Amitani H, Inui A. Ghrelin:a gut hormonal basis of motility Regulation and functional dyspepsia. J Gastroenterol Hepatol，2011,26(30):67-72.

[6]Hiroto Miwa.Why dyspepsia can occur without organic disease: pathogenesis and management of functional dyspepsia[J]. J Gastroenterol , 2012, 47:862-871.

[7]Seiji Futagami, Mayumi Shimpuk， Yan Yin, et al. Pathophysiology of Functional Dyspepsia [J]. J Nippon Med Sch，2011,78 (5):280-285.

[8]J. Khoo, C. K. Rarner, C. Feinle-bisset, et al. Gastrointestinal hormonal dysfunction in gastroparesisand functional dyspepsia. Neurogastroenterol Motil [J]. 2010, 22, 1270-1278.

[9]傅詩書. 加味逍遙散對(duì)功能性消化不良患者血漿胃動(dòng)素和P物質(zhì)的影響[J]. 世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014,9(12):1338-1340.

[10]Xu L，Gao S，Guo F，et al． Effect of motilin on gastric distension sensitive neurons in arcuate nucleus and gastric motility in rat[J]． Neurogastroenterol Motil，2011,23(3) : 265-270．

[11]Ogiso K, Asakawa A, Amitani H, Inui A. Ghrelin:a gut hormonal basis of motility Regulation and functional dyspepsia[J]. J Gastroenterol Hepatol，2011,26(30):67-72.

[12]Khoo J, Rayner CK,Feinle-Bisset C, Jones KL, Horowitz M. Gastrointestinal hormonal dysfunction in gastroparesis and functional dyspepsia. Neurogastroenterol Motil， 2010, 22(12):1270-1278.

[13]肖政華,劉柏炎,蔡光先，等.功能性消化不良患者血漿Ghrelin水平與病情程度的關(guān)系及四磨湯的干預(yù)作用[J]. 陜西中醫(yī),2012,33(6):684-686.

[14]張維,張琍,劉卓然,等.功能性消化不良患者血漿Ghrelin和Obestatin水平的變化[J]. 中華臨床醫(yī)師雜志，2013,7(23):10624-10627.

[15]Luque RM, Córdoba-Chacón J.Costa A, et al.Obestatin plays an opposite role in the regulation of pituitary somatotrope and corticotrope function in female primates and male/female mice.Endocrinology[J].2014 , 155(4):1407-17.

(收稿2016-01-22；修回2016-04-15)

Effect of Weikangning on gastric emptying and gastrointestinal hormone in rats with functional dyspepsia

Wangjing Hospital of Chinese Academy of Chinese Medical Sciences(Beijing 100102)

Chang YujuanCao MinminLiu Yanjunet al

Dyspepsia@WeikangningAnimal experimentation

*國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81273746)

△北京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院(北京10087)

▲美國克利夫蘭大學(xué)化學(xué)系

□美國約翰·霍普金斯大學(xué)醫(yī)學(xué)院消化內(nèi)科

R975

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.068