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        龍生蛭膠囊對(duì)高脂大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的影響*

        2016-09-28 06:41:19方歡樂(lè)陳衍斌韓寧娟馬懷芬鄧文丹張小麗
        陜西中醫(yī) 2016年9期
        關(guān)鍵詞:高脂硬化血脂

        方歡樂(lè) 陳衍斌 韓寧娟 馬懷芬 鄧文丹 張小麗

        西安培華學(xué)院醫(yī)學(xué)院(西安 710125)

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        ·實(shí)驗(yàn)研究·

        龍生蛭膠囊對(duì)高脂大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的影響*

        方歡樂(lè)陳衍斌△韓寧娟馬懷芬鄧文丹張小麗▲

        西安培華學(xué)院醫(yī)學(xué)院(西安 710125)

        目的:探討龍生蛭膠囊改善動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血脂、血流變及抗氧化的作用。方法:大鼠高脂飼料加腹腔注射維生素D3,復(fù)制AS模型,檢測(cè)龍生蛭膠囊對(duì)大鼠血清血脂、血液流變學(xué)、抗氧化指標(biāo)的影響。結(jié)果:與模型組比較,中、高劑量組藥物能顯著降低AS大鼠血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LHL)水平,升高高密度脂蛋白(HDL)水平。同時(shí)也能降低AS大鼠全血黏度(高、中、低切)、血漿黏度和紅細(xì)胞壓積。藥物和模型組比較能顯著降低血液中MDA含量,提高SOD活性。結(jié)論:龍生蛭膠囊可以改善AS大鼠氧化應(yīng)激反應(yīng),降低大鼠血脂、血液流變學(xué)指標(biāo)。

        主題詞動(dòng)脈硬化/中西醫(yī)結(jié)合療法@龍生蛭膠囊實(shí)驗(yàn),動(dòng)物

        心腦血管疾病是世界上發(fā)病率和病死率較高的疾病之一。動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是導(dǎo)致其發(fā)生的重要病理基礎(chǔ)。AS的病因比較復(fù)雜,發(fā)病機(jī)制涉及脂質(zhì)代謝、血栓形成及氧化應(yīng)激等多個(gè)方面[1]?,F(xiàn)代醫(yī)學(xué)能根據(jù)其發(fā)病機(jī)制對(duì)AS 提出不少的治療方法。中醫(yī)藥在治療動(dòng)脈硬化的過(guò)程中,以辨證論治的原則為依據(jù),在AS病變的預(yù)防和治療方面有著極大的潛力,藥物在療效性和安全性方面都有很好的表現(xiàn)[2]。龍生蛭膠囊由黃芪、水蛭、川芎、當(dāng)歸等12味中藥組成,是治療心腦血管疾病的現(xiàn)代中藥制劑,具有補(bǔ)氣活血、逐瘀通絡(luò)的功效,臨床上用于腦梗塞恢復(fù)期中醫(yī)辨證為氣虛血瘀型中風(fēng)中經(jīng)絡(luò)者。有文獻(xiàn)報(bào)道表明龍生蛭膠囊在腦血栓防治中療效確切,但藥物是否通過(guò)抗氧化、降血脂對(duì)抗動(dòng)脈粥樣硬化改善心腦血管疾病作用不清楚[3-4]。本實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行了龍生蛭膠囊抗早期動(dòng)脈粥樣硬化形成實(shí)驗(yàn)研究。為藥物深入的開(kāi)發(fā)研究提供依據(jù)。

        1材料1.1動(dòng)物雄性SD大鼠,體重180~220g,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(軍)2012-0007。

        1.2藥物與試劑龍生蛭膠囊(批號(hào):20150914)、維生素D(批號(hào):20100601)、膽酸鈉(批號(hào):110728)、膽固醇(批號(hào):111025)、辛伐他汀片(批號(hào)11A141205)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)試劑盒(批號(hào)為20150211,20150207)。

        1.3儀器實(shí)驗(yàn)包括臺(tái)式離心機(jī) H-1600A(江東儀器);電熱恒溫干燥箱202-2AB型;iMark全自動(dòng)酶標(biāo)儀;CKX4 熒光倒置相差顯微鏡;JA10003B大量程電子精密天平;LBY-N6 型血液流變儀。

        2方法2.1模型建立及動(dòng)物分組、給藥取實(shí)驗(yàn)大鼠60組,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,隨機(jī)分為空白對(duì)照組(給以正常飼料);模型組(給予高脂飼料);陽(yáng)性對(duì)照組(辛伐他汀)及龍生蛭低、中、高劑量組。每組大鼠10只。按文獻(xiàn)[5]的方法建立高血脂并動(dòng)脈粥樣硬化模型,實(shí)驗(yàn)進(jìn)行高脂飼料(高脂飼料配方如下:3%膽固醇、0.5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%豬油、81.3%基礎(chǔ)飼料)喂養(yǎng),實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)一次性腹腔注射維生素D3注射液60萬(wàn)IU/kg。動(dòng)物持續(xù)高脂喂養(yǎng)8周。高脂喂養(yǎng)4周后,對(duì)照組和模型組每天灌胃等體積生理鹽水;辛伐他汀組、龍生蛭低中高劑量組,每天給高脂飼料同時(shí)間灌胃給藥1次,給藥量為辛伐他汀組5.5mg/kg;龍生蛭低劑量0.72g/kg、中劑量1.44g/kg、高劑量2.88g/kg。

        2.2相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)血脂的檢測(cè)末次給藥后,禁食禁水12h。第2日,用20%烏拉坦(0.5ml/100g)溶液麻醉大鼠。打開(kāi)腹腔,10ml無(wú)菌注射器插入腹主動(dòng)脈抽血。3500 r/min離心10min分離血清,測(cè)定TG、TC 、HDL-C 和LDL-C,具體操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)完成??寡趸笜?biāo)檢測(cè):采用硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA 含量;黃嘌呤氧化法測(cè)定SOD活力。腹主動(dòng)脈HE染色:打開(kāi)腹腔,于腹主動(dòng)脈同一部位取材,放置于15%甲醛溶液中固定,再經(jīng)過(guò)石蠟包埋、切片進(jìn)行HE 染色。血液流變學(xué)檢測(cè):用LBY-N6 型血液流變儀,分別測(cè)定全血低切、中切、高切黏度及血漿黏度。

        3結(jié)果3.1AS模型的判定將大鼠喂養(yǎng)8周后,腹主動(dòng)脈HE染色顯示,模型組大鼠腹主動(dòng)脈壁增厚,內(nèi)皮細(xì)胞呈連續(xù)性缺失,內(nèi)皮下間隙增寬,可見(jiàn)中膜平滑肌細(xì)胞間隙增加堆積,但未見(jiàn)明顯脂質(zhì)斑塊形成,初步判定為動(dòng)脈粥樣硬化形成早期。結(jié)果見(jiàn)圖1。

        3.2各組大鼠體重的影響大鼠在飼養(yǎng)過(guò)程中,每周稱重1次,對(duì)0、2、4、6、8周各組大鼠體重進(jìn)行分析,模型組和空白

        對(duì)照組比較體重增加顯著(P<0.05),兩組比較無(wú)顯著性差異。結(jié)果見(jiàn)表1。

        表1 各組大鼠體重變化(g)

        3.3對(duì)血脂的影響模型組大鼠血液檢測(cè)TG、TC、LDL 顯著高于空白對(duì)照組;與模型組比較,龍生蛭膠囊中、高劑量組可抑制高脂飲食所致的TG、TC、LDL的升高,同時(shí)結(jié)果顯示可以提高抗動(dòng)脈粥樣硬化的膽固醇HDL的含量,實(shí)驗(yàn)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),見(jiàn)表2。

        表2 各組大鼠血脂檢測(cè)結(jié)果(mmol/L)

        3.4對(duì)血液流變學(xué)的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明模型組大鼠全血黏度(高、中、低切)、血漿黏度、紅細(xì)胞聚集顯著高于空白對(duì)照組;與模型組比較,龍生蛭中、高劑量組可降低造模所致的血流變學(xué)的改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果和模型組比較有很好的顯著性(P<0.05),見(jiàn)表3。

        3.5SOD、MDA的影響實(shí)驗(yàn)表明,與對(duì)照組相比較,模型組大鼠血清SOD活性顯著降低,MDA含量明顯升高,有顯著性差異。與模型組比較,龍生蛭中高劑量組均能顯著升高高脂大鼠SOD活性,降低血清MDA含量,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,結(jié)果見(jiàn)表4。

        表3 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)比較

        表4 各組大鼠血清SOD活性和MDA含量的影響

        4討論動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是目前常見(jiàn)的一種心腦血管病變,在中醫(yī)上屬于“痰瘀”、“血瘀”范疇,中藥在防治AS方面有著獨(dú)特的效果,引起世人的關(guān)注[6-7]。龍生蛭膠囊方中黃芪、水蛭為君藥,黃芪補(bǔ)氣以治本、水蛭逐瘀以治標(biāo),可收標(biāo)本同治之功。方中以桃仁、紅花、赤芍、川芎、當(dāng)歸為臣,此五藥皆為活血祛瘀之品,以助水蛭逐瘀通經(jīng)之力。方中佐以刺五加、桑寄

        生取其補(bǔ)肝腎、壯筋骨作用,諸藥合用補(bǔ)氣活血,逐瘀通絡(luò)改善心血管疾病的作用。As公認(rèn)的危險(xiǎn)因素為脂質(zhì)代謝異常,本研究結(jié)果顯示中高劑量的龍生蛭膠囊可調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝,降低高脂大鼠血液中TG、TC、LDL含量,升高抗AS的膽固醇HDL水平[8]。同時(shí)有研究報(bào)道血脂水平的變化與血液流變學(xué)指標(biāo)異常變化密切相關(guān),而血液流變學(xué)指標(biāo)異常變化也是AS引發(fā)心腦血管疾病的早期表現(xiàn)[9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明龍生蛭膠囊可明顯改善高脂大鼠血液黏度指標(biāo),保護(hù)血管、對(duì)抗AS。

        動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成學(xué)說(shuō)中氧化應(yīng)激也是重要組成部分[10]。多種因素誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生,使得機(jī)體細(xì)胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生與抗氧化之間失衡,從而導(dǎo)致組織的損傷誘發(fā)了脂質(zhì)過(guò)氧,使得脂質(zhì)過(guò)氧的主要終產(chǎn)物MDA增加,而內(nèi)皮細(xì)胞表面的抗氧化物酶SOD活性降低致As主動(dòng)脈病變的加重。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明龍生蛭膠囊可提高自由基清除酶的活性,維護(hù)體內(nèi)自由基穩(wěn)態(tài)與平衡,增加LDL的抗氧化能力,減少脂質(zhì)過(guò)氧化物的產(chǎn)生,發(fā)揮預(yù)防高脂血癥和抗AS的作用。

        [1] 梁柱地,曾憲彪,韋貴寧,等.藤茶雙氫楊梅素對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血脂代謝及抗氧化作用的影響[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2015,34(6):710-713.

        [2] 霍煜,姚天明,梁卓,等.冠心舒通膠囊對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血脂代謝及血流變學(xué)指標(biāo)的影響[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011,13(11):248-250.

        [3] 付清偉.步長(zhǎng)龍生蛭膠囊聯(lián)合西藥治療缺血性腦卒中隨機(jī)平行對(duì)照研究[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志,2014,28(2):92-94.

        [4] 從學(xué),李學(xué)軍,張學(xué)中.丹紅注射液合并龍生蛭膠囊治療腦梗塞臨床觀察[J].遼寧中醫(yī)雜志,2011,38(12):2398-2399.

        [5] 楊鵬遠(yuǎn),芮耀成,焦亞斌.動(dòng)脈粥樣硬化大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)P偷慕J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2003,24(7):802-804.

        [6] 邢連喜,藺小平,常鋒,等.脂糖泰膠囊副主降血脂功能的實(shí)驗(yàn)研究[J].陜西中醫(yī),2013,34(1):109-110.

        [7] 閆曙光,周永學(xué),惠毅,等.通便玉蓉丸治療非酒精性脂肪肝及高脂血癥的實(shí)驗(yàn)研究[J].陜西中醫(yī),2012,33(1):111-113.

        [8] Barter PJ, Ballantyne CM, Carmena R, etal. ApoB versuscholesterol in estimating cardiovascular risk and in guidingtherapy: report of the thirty-person/ten-country panel [J]. JIntern Med, 2006, 259: 247:258.

        [9] 高麗霞.血液流變學(xué)檢測(cè)在高脂血癥患者治療和預(yù)防中的意義[J].臨床醫(yī)藥實(shí)踐, 2012,21(2):125-127.

        [10] 李震霄,鄒洪梅.氧化應(yīng)激促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志, 2009,17(8):702-709.

        (收稿2016-05-15;修回2016-06-12)

        *陜西省教育廳科研計(jì)劃項(xiàng)目資助(15JK2089)

        △陜西步長(zhǎng)制藥有限公司科研部(西安 710075)

        ▲陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

        R543.1

        A

        10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.067

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