方歡樂(lè)　陳衍斌　韓寧娟　馬懷芬　鄧文丹　張小麗

西安培華學(xué)院醫(yī)學(xué)院(西安 710125)

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·實(shí)驗(yàn)研究·

龍生蛭膠囊對(duì)高脂大鼠動(dòng)脈粥樣硬化的影響*

方歡樂(lè)陳衍斌△韓寧娟馬懷芬鄧文丹張小麗▲

西安培華學(xué)院醫(yī)學(xué)院(西安 710125)

目的：探討龍生蛭膠囊改善動(dòng)脈粥樣硬化大鼠血脂、血流變及抗氧化的作用。方法：大鼠高脂飼料加腹腔注射維生素D3，復(fù)制AS模型，檢測(cè)龍生蛭膠囊對(duì)大鼠血清血脂、血液流變學(xué)、抗氧化指標(biāo)的影響。結(jié)果：與模型組比較，中、高劑量組藥物能顯著降低AS大鼠血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LHL)水平，升高高密度脂蛋白(HDL)水平。同時(shí)也能降低AS大鼠全血黏度(高、中、低切)、血漿黏度和紅細(xì)胞壓積。藥物和模型組比較能顯著降低血液中MDA含量，提高SOD活性。結(jié)論：龍生蛭膠囊可以改善AS大鼠氧化應(yīng)激反應(yīng)，降低大鼠血脂、血液流變學(xué)指標(biāo)。

主題詞動(dòng)脈硬化/中西醫(yī)結(jié)合療法@龍生蛭膠囊實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物

心腦血管疾病是世界上發(fā)病率和病死率較高的疾病之一。動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是導(dǎo)致其發(fā)生的重要病理基礎(chǔ)。AS的病因比較復(fù)雜,發(fā)病機(jī)制涉及脂質(zhì)代謝、血栓形成及氧化應(yīng)激等多個(gè)方面[1]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)能根據(jù)其發(fā)病機(jī)制對(duì)AS 提出不少的治療方法。中醫(yī)藥在治療動(dòng)脈硬化的過(guò)程中，以辨證論治的原則為依據(jù)，在AS病變的預(yù)防和治療方面有著極大的潛力，藥物在療效性和安全性方面都有很好的表現(xiàn)[2]。龍生蛭膠囊由黃芪、水蛭、川芎、當(dāng)歸等12味中藥組成，是治療心腦血管疾病的現(xiàn)代中藥制劑，具有補(bǔ)氣活血、逐瘀通絡(luò)的功效，臨床上用于腦梗塞恢復(fù)期中醫(yī)辨證為氣虛血瘀型中風(fēng)中經(jīng)絡(luò)者。有文獻(xiàn)報(bào)道表明龍生蛭膠囊在腦血栓防治中療效確切，但藥物是否通過(guò)抗氧化、降血脂對(duì)抗動(dòng)脈粥樣硬化改善心腦血管疾病作用不清楚[3-4]。本實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行了龍生蛭膠囊抗早期動(dòng)脈粥樣硬化形成實(shí)驗(yàn)研究。為藥物深入的開(kāi)發(fā)研究提供依據(jù)。

1材料1.1動(dòng)物雄性SD大鼠，體重180～220g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(軍)2012-0007。

1.2藥物與試劑龍生蛭膠囊(批號(hào)：20150914)、維生素D(批號(hào):20100601)、膽酸鈉(批號(hào):110728)、膽固醇(批號(hào):111025)、辛伐他汀片(批號(hào)11A141205)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)試劑盒(批號(hào)為20150211，20150207)。

1.3儀器實(shí)驗(yàn)包括臺(tái)式離心機(jī) H-1600A(江東儀器)；電熱恒溫干燥箱202-2AB型；iMark全自動(dòng)酶標(biāo)儀；CKX4 熒光倒置相差顯微鏡；JA10003B大量程電子精密天平；LBY-N6 型血液流變儀。

2方法2.1模型建立及動(dòng)物分組、給藥取實(shí)驗(yàn)大鼠60組，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)分為空白對(duì)照組(給以正常飼料)；模型組(給予高脂飼料)；陽(yáng)性對(duì)照組(辛伐他汀)及龍生蛭低、中、高劑量組。每組大鼠10只。按文獻(xiàn)[5]的方法建立高血脂并動(dòng)脈粥樣硬化模型，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行高脂飼料(高脂飼料配方如下：3%膽固醇、0.5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%豬油、81.3%基礎(chǔ)飼料)喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)一次性腹腔注射維生素D3注射液60萬(wàn)IU/kg。動(dòng)物持續(xù)高脂喂養(yǎng)8周。高脂喂養(yǎng)4周后，對(duì)照組和模型組每天灌胃等體積生理鹽水；辛伐他汀組、龍生蛭低中高劑量組，每天給高脂飼料同時(shí)間灌胃給藥1次，給藥量為辛伐他汀組5.5mg/kg；龍生蛭低劑量0.72g/kg、中劑量1.44g/kg、高劑量2.88g/kg。

2.2相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)血脂的檢測(cè)末次給藥后，禁食禁水12h。第2日，用20%烏拉坦(0.5ml/100g)溶液麻醉大鼠。打開(kāi)腹腔，10ml無(wú)菌注射器插入腹主動(dòng)脈抽血。3500 r/min離心10min分離血清，測(cè)定TG、TC 、HDL-C 和LDL-C，具體操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)完成?？寡趸笜?biāo)檢測(cè)：采用硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA 含量；黃嘌呤氧化法測(cè)定SOD活力。腹主動(dòng)脈HE染色：打開(kāi)腹腔，于腹主動(dòng)脈同一部位取材，放置于15%甲醛溶液中固定，再經(jīng)過(guò)石蠟包埋、切片進(jìn)行HE 染色。血液流變學(xué)檢測(cè)：用LBY-N6 型血液流變儀，分別測(cè)定全血低切、中切、高切黏度及血漿黏度。

3結(jié)果3.1AS模型的判定將大鼠喂養(yǎng)8周后，腹主動(dòng)脈HE染色顯示，模型組大鼠腹主動(dòng)脈壁增厚，內(nèi)皮細(xì)胞呈連續(xù)性缺失，內(nèi)皮下間隙增寬，可見(jiàn)中膜平滑肌細(xì)胞間隙增加堆積，但未見(jiàn)明顯脂質(zhì)斑塊形成，初步判定為動(dòng)脈粥樣硬化形成早期。結(jié)果見(jiàn)圖1。

3.2各組大鼠體重的影響大鼠在飼養(yǎng)過(guò)程中，每周稱重1次，對(duì)0、2、4、6、8周各組大鼠體重進(jìn)行分析，模型組和空白

對(duì)照組比較體重增加顯著(P<0.05)，兩組比較無(wú)顯著性差異。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　各組大鼠體重變化(g)

3.3對(duì)血脂的影響模型組大鼠血液檢測(cè)TG、TC、LDL 顯著高于空白對(duì)照組；與模型組比較，龍生蛭膠囊中、高劑量組可抑制高脂飲食所致的TG、TC、LDL的升高，同時(shí)結(jié)果顯示可以提高抗動(dòng)脈粥樣硬化的膽固醇HDL的含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2　各組大鼠血脂檢測(cè)結(jié)果(mmol/L)

3.4對(duì)血液流變學(xué)的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明模型組大鼠全血黏度(高、中、低切)、血漿黏度、紅細(xì)胞聚集顯著高于空白對(duì)照組；與模型組比較，龍生蛭中、高劑量組可降低造模所致的血流變學(xué)的改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果和模型組比較有很好的顯著性(P<0.05)，見(jiàn)表3。

3.5SOD、MDA的影響實(shí)驗(yàn)表明，與對(duì)照組相比較，模型組大鼠血清SOD活性顯著降低，MDA含量明顯升高，有顯著性差異。與模型組比較，龍生蛭中高劑量組均能顯著升高高脂大鼠SOD活性，降低血清MDA含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見(jiàn)表4。

表3　各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)比較

表4　各組大鼠血清SOD活性和MDA含量的影響

4討論動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是目前常見(jiàn)的一種心腦血管病變，在中醫(yī)上屬于“痰瘀”、“血瘀”范疇,中藥在防治AS方面有著獨(dú)特的效果，引起世人的關(guān)注[6-7]。龍生蛭膠囊方中黃芪、水蛭為君藥，黃芪補(bǔ)氣以治本、水蛭逐瘀以治標(biāo)，可收標(biāo)本同治之功。方中以桃仁、紅花、赤芍、川芎、當(dāng)歸為臣，此五藥皆為活血祛瘀之品，以助水蛭逐瘀通經(jīng)之力。方中佐以刺五加、桑寄

生取其補(bǔ)肝腎、壯筋骨作用，諸藥合用補(bǔ)氣活血，逐瘀通絡(luò)改善心血管疾病的作用。As公認(rèn)的危險(xiǎn)因素為脂質(zhì)代謝異常，本研究結(jié)果顯示中高劑量的龍生蛭膠囊可調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，降低高脂大鼠血液中TG、TC、LDL含量，升高抗AS的膽固醇HDL水平[8]。同時(shí)有研究報(bào)道血脂水平的變化與血液流變學(xué)指標(biāo)異常變化密切相關(guān)，而血液流變學(xué)指標(biāo)異常變化也是AS引發(fā)心腦血管疾病的早期表現(xiàn)[9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明龍生蛭膠囊可明顯改善高脂大鼠血液黏度指標(biāo)，保護(hù)血管、對(duì)抗AS。

動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成學(xué)說(shuō)中氧化應(yīng)激也是重要組成部分[10]。多種因素誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生，使得機(jī)體細(xì)胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生與抗氧化之間失衡，從而導(dǎo)致組織的損傷誘發(fā)了脂質(zhì)過(guò)氧，使得脂質(zhì)過(guò)氧的主要終產(chǎn)物MDA增加，而內(nèi)皮細(xì)胞表面的抗氧化物酶SOD活性降低致As主動(dòng)脈病變的加重。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明龍生蛭膠囊可提高自由基清除酶的活性，維護(hù)體內(nèi)自由基穩(wěn)態(tài)與平衡，增加LDL的抗氧化能力，減少脂質(zhì)過(guò)氧化物的產(chǎn)生，發(fā)揮預(yù)防高脂血癥和抗AS的作用。

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(收稿2016-05-15；修回2016-06-12)

*陜西省教育廳科研計(jì)劃項(xiàng)目資助(15JK2089)

△陜西步長(zhǎng)制藥有限公司科研部(西安 710075)

▲陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

R543.1

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10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.067