熊偉，李雄輝，王慧賓，袁菊如，王金昌

（江西省科學(xué)院應(yīng)用化學(xué)研究所，江西南昌 330096）

二氫楊梅素的抑菌性能研究及其與苯甲酸鈉的比較

熊偉，李雄輝，王慧賓，袁菊如，王金昌

（江西省科學(xué)院應(yīng)用化學(xué)研究所，江西南昌 330096）

對(duì)二氫楊梅素的抑菌性能進(jìn)行初步研究，結(jié)果表明：二氫楊梅素對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、副傷寒沙門(mén)氏菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌和白色念珠菌6種菌均有一定的抑制作用，二氫楊梅素對(duì)各菌的最低抑菌濃度（M IC）分別為0.625、0.313、0.625、0.313、1.250m g/m L和0.313m g/m L，最低殺菌濃度（M BC）分別為2.5、2.5、2.5、2.5、10.0m g/m L和2.5m g/m L。同時(shí)，對(duì)二氫楊梅素與苯甲酸鈉的抑菌和殺菌效果進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果表明：二氫楊梅素對(duì)大腸桿菌、副傷寒沙門(mén)氏菌、白色念珠菌3種菌的抑菌和殺菌效果要明顯高于苯甲酸鈉，而對(duì)金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌3種菌的抑菌和殺菌效果則與苯甲酸鈉相當(dāng)。

二氫楊梅素；抑菌；最小抑菌濃度；最小殺菌濃度

藤茶，學(xué)名顯齒蛇葡萄(Ampelopsis grossedentata)，為葡萄科蛇葡萄屬（Ampelopsis）的一種野生木質(zhì)落葉藤本植物，主要分布于我國(guó)湖南、湖北、云南、貴州、廣東、廣西和福建等省區(qū)。藤茶具有抑菌、降血脂、降血壓、抗氧化、降血糖、保肝護(hù)肝以及減輕乙醇中毒等功效[1-7]，研究表明，藤茶中發(fā)揮藥理作用的主要化學(xué)成分為黃酮類(lèi)化合物[8，9]，而二氫楊梅素則為藤茶中的主要黃酮類(lèi)成分。本文系統(tǒng)研究了二氫楊梅素對(duì)常見(jiàn)6種致病菌的抑制作用，得出其最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC），并與傳統(tǒng)抗菌藥苯甲酸鈉進(jìn)行了抑菌效果對(duì)比，為新型食品天然防腐劑的進(jìn)一步研究與開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

二氫楊梅素，實(shí)驗(yàn)室自提并純化，經(jīng)HPLC檢測(cè)純度為95%以上；苯甲酸鈉，分析純,中國(guó)醫(yī)藥（集團(tuán)）上?；瘜W(xué)試劑公司。

1.2 供試菌種

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大腸桿菌（Escherichia coli）、副傷寒沙門(mén)氏菌（Salmonella paratyphi）、綠膿桿菌（Pseu-domonas aeruginosa）、枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）和白色念珠菌（Candida albicans），以上菌種均由江西省科學(xué)院微生物研究所提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

JM-10002天平（余姚市紀(jì)銘稱(chēng)重校驗(yàn)設(shè)備公司）；NC202-9電熱型恒溫干燥箱（江西電熱設(shè)備廠）；恒溫培養(yǎng)箱（常州中捷實(shí)驗(yàn)儀器制造有限公司）；手提式高壓蒸汽滅菌鍋（嘉興中新醫(yī)療儀器有限公司）；超凈工作臺(tái)（蘇州蘇潔凈化設(shè)備公司）。

1.4 培養(yǎng)基

本實(shí)驗(yàn)采用LB培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的制備方法為：酵母提取物5g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，瓊脂20g，定容于1 000mL，采用氫氧化鈉調(diào)結(jié)pH值為7.4～7.6，分裝，121℃條件下滅菌20min，備用。

1.5 菌懸液的制備

將供試菌種移入相對(duì)應(yīng)的試管斜面培養(yǎng)基，于37℃下培養(yǎng)18～24h，用接種環(huán)挑取少許菌體，放入裝有無(wú)菌水的試管內(nèi)，振動(dòng)搖勻，制成菌懸液。采用比濁法計(jì)數(shù)，調(diào)整菌懸液濃度，使其含菌數(shù)約為107 個(gè)/mL，備用。

1.6 抑菌實(shí)驗(yàn)

1.6.1 濾紙片法測(cè)定抑菌作用

取直徑為6mm的濾紙片放入配好的濃度為10%的二氫楊梅素溶液中浸泡6h，取出置于真空干燥箱中滅菌干燥。將各種供試菌懸液取0.2mL分別注入直徑為120mm的無(wú)菌培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，再倒入20.0mL LB培養(yǎng)基，混勻后冷卻成含菌平板，然后用無(wú)菌鑷子夾取含浸出液的濾紙片貼在含菌平板上，每皿貼6片，每菌重復(fù)3次，細(xì)菌培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)24h后，測(cè)定濾紙片周?chē)志χ睆酱笮?，比較抑菌效果。

1.6.2 最低抑菌濃度（MIC）的測(cè)定

用LB培養(yǎng)基以二倍稀釋法分別稀釋二氫楊梅素，濃度分別為20.000、10.000、5.000、2.500、1.250、0.625、0.313mg/mL和0.156mg/mL，然后分別接種金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、副傷寒沙門(mén)氏菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌和白色念珠菌的過(guò)夜培養(yǎng)液200μL，于細(xì)菌培養(yǎng)箱中37℃下培養(yǎng)24h，觀察生長(zhǎng)現(xiàn)象，取沒(méi)有細(xì)菌生長(zhǎng)的最低濃度為MIC。

1.6.3 最低殺菌濃度（MBC）的測(cè)定

將上述濃度大于MIC的各管培養(yǎng)液，用直徑4mm的接種環(huán)，劃線(xiàn)接種于LB培養(yǎng)基上，在37℃的生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，凡無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的藥物最低濃度管，即為藥物對(duì)該菌種的最低殺菌濃度MBC。

1.6.4 二氫楊梅素與苯甲酸鈉的抑菌效果對(duì)比

在上述實(shí)驗(yàn)的條件下，使用同樣濃度的苯甲酸鈉進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，得出其最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC），并與二氫楊梅素抑菌效果進(jìn)行對(duì)比。

2 結(jié)果與分析

2.1 二氫楊梅素的抑菌效果

二氫楊梅素對(duì)各實(shí)驗(yàn)菌株的抑菌效果見(jiàn)表1。從表1可以看出，二氫楊梅素對(duì)各實(shí)驗(yàn)菌株均有一定的抑制作用，但對(duì)綠膿桿菌、大腸桿菌的抑制作用較強(qiáng)，其次是白色念珠菌、金黃色葡萄球菌、副傷寒沙門(mén)氏菌，而對(duì)枯草芽胞桿菌的抑制作用較弱。

表1 二氫楊梅素的抑菌效果

2.2 最低抑菌濃度（MIC）

由表2可以看出，隨著二氫楊梅素溶液濃度的增加，二氫楊梅素對(duì)各實(shí)驗(yàn)菌株的抑菌作用也逐漸增強(qiáng)。二氫楊梅素對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、副傷寒沙門(mén)氏菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌和白色念珠菌的最低抑菌濃度（MIC）分別為：0.625、0.313、0.625、0.313、1.250mg/mL和0.313mg/mL，可見(jiàn)二氫楊梅素在較低濃度下有較明顯的抑菌作用。

表2 二氫楊梅素的最低抑菌濃度（MIC）

2.3 最低殺菌濃度（MBC）

由表3可以看出，二氫楊梅素對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、副傷寒沙門(mén)氏菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌、白色念珠菌最低殺菌濃度（MBC）分別為：2.5、2.5、2.5、2.5、10.0mg/mL和2.5mg/mL。可見(jiàn)，二氫楊梅素對(duì)枯草芽胞桿菌的殺菌效果較弱，對(duì)其他菌株的殺菌效果則較好。

2.4 二氫楊梅素與苯甲酸鈉的抑菌效果對(duì)比

從表4二氫楊梅素與苯甲酸鈉的抑菌效果對(duì)比可以看出，二氫楊梅素對(duì)大腸桿菌、副傷寒沙門(mén)氏菌、白色念珠菌3種菌的抑菌和殺菌效果要明顯比苯甲酸鈉強(qiáng)，而金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌3種菌的抑菌和殺菌效果則與苯甲酸鈉相當(dāng)。綜合來(lái)看，二氫楊梅素較苯甲酸鈉表現(xiàn)出更強(qiáng)的抑菌和殺菌效果。

表3 二氫楊梅素的最低殺菌濃度（MBC）

表4 二氫楊梅素與苯甲酸鈉的抑菌效果對(duì)比

3 結(jié)論

1）二氫楊梅素的抑菌實(shí)驗(yàn)可以看出，其對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、副傷寒沙門(mén)氏菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌和白色念珠菌均有一定的抑制效果。2）二氫楊梅素對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、副傷寒沙門(mén)氏菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌和白色念珠菌的最低抑菌濃度（MIC）分別為：0.625、0.313、0.625、0.313、1.250mg/mL和0.313mg/mL；最低殺菌濃度（MBC）分別為：2.5、2.5、2.5、2.5、10.0mg/mL和2.5mg/mL。二氫楊梅素與苯甲酸鈉的抑菌和殺菌效果對(duì)比可以看出：二氫楊梅素對(duì)大腸桿菌、副傷寒沙門(mén)氏菌、白色念珠菌3種菌的抑菌和殺菌效果要明顯比苯甲酸鈉強(qiáng)，而金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、枯草芽胞桿菌3種菌的抑菌和殺菌效果則與苯甲酸鈉相當(dāng)。綜合來(lái)看，二氫楊梅素較苯甲酸鈉表現(xiàn)出更強(qiáng)的抑菌和殺菌效果。3）二氫楊梅素作為一種天然提取物，基于它對(duì)常見(jiàn)病菌的抑制作用，可用于天然食品防腐劑和藥用資源的開(kāi)發(fā)，以保障藥品的綠色和安全。

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Study on Antimicrobial Activity of Dihydromyricetin and Comparision with Sudium Benzoate

Xiong Wei, Li Xiong-hui, Wang Hui-bin, Yuan Ju-ru, Wang Jin-chang
(Institute of Applied Chemistry，Jiangxi Academy of Sciences，Jiangxi Nanchang 330096)

Antimicrobial activity of dihydromyricetin were investigated.The results indicated as follows: the dihydromyricetin exhibited variable inhibitory effects against Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella paratyphi, Pseu-domonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Candida albicans.The minimal inhibitory concentration (MIC) of the dihydromyricetin to each strain was deretmined as 0.625, 0.313, 0.625, 0.313, 1.250, 0.313 mg/mL, The minimal bactericidal concentration (MBC) of the dihydromyricetin to each strain was deretmined as 2.5, 2.5, 2.5, 2.5, 10.0, 2.5 mg/mL.The inhibitory effects of dihydromyricetin were compared with sudium benzoate at the same time, the results indicated as follows: dihydromyricetin had stronger inhibitory effects than sudium benzoate against Escherichia coli, Salmonella paratyphi, Candida albicans and had the equivalent inhibitory effects against Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus sabtilis.

Dihydromyricetin; antimicrobial; The minimal inhibitory concentration; The minimal bacteriocidal concentration

TQ91

A

2096-0387（2016）01-0012-03

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)31260400）；江西省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)20122BAB214003）；江西省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)20132BBG70045）。

熊偉（1982-），男，碩士研究生，副研究員，研究方向：天然產(chǎn)物提取分離與分子修飾。