梁曉東

鹽城市第三人民醫(yī)院病理科，江蘇鹽城 224001

*病理研究*

探討微小RNA-451(miR-451)的表達與胃癌的臨床病理特征及預(yù)后之間的關(guān)系

梁曉東

鹽城市第三人民醫(yī)院病理科，江蘇鹽城 224001

目的 探討微小RNA-451(miR-451)的表達與胃癌的臨床病理特征及預(yù)后之間的關(guān)系。方法 選取該院于2014年6月—2016年8月期間收治的32例胃癌患者當(dāng)作研究對象。收集這32例患者的胃癌組織標本與癌旁正常組織標本。應(yīng)用原位雜交技術(shù)，對微小RNA-451(miR-451)在胃癌組織、癌旁正常組織之中的表達情況。探討分析胃癌組織中微小RNA-451(miR-451)的表達水平，并分析胃癌的臨床病理特征及預(yù)后之間的關(guān)系。 結(jié)果 微小RNA-451(miR-451)在胃癌組織中的高表達率為36.11%，明顯低于癌旁正常組織的77.78%；III～IV期胃癌患者的微小RNA-451(miR-451)高表達率為47.62%，明顯低于I～II期胃癌患者的86.67%；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的微小RNA-451(miR-451)高表達率為47.06%，明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的78.95%；微小RNA-451(miR-451)高表達者的生存率為69.23%，明顯高于微小RNA-451(miR-451)低表達者的39.13%；上述差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論 微小RNA-451(miR-451)與胃黏膜組織的惡性病變、胃癌組織浸潤轉(zhuǎn)移、預(yù)后具有明顯的相關(guān)性，可能是胃癌的新治療靶點。

微小RNA-451；表達；胃癌；臨床病理特征；預(yù)后

隨著市場經(jīng)濟的發(fā)展，人們的生活水平與生活質(zhì)量不斷提高，但隨著生活方式與飲食習(xí)慣的改變，導(dǎo)致胃腸道疾病的發(fā)生率不斷上升。胃癌是一種較為常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤性疾病，在我國的發(fā)病率較高，嚴重威脅著患者的生命財產(chǎn)安全與生活質(zhì)量。胃癌的發(fā)生涉及諸多因素，既包括癌基因，也包括抑癌基因，胃癌的病理發(fā)展是一個多步驟、多階段的過程，而微小RNA是近年來分子生物學(xué)的一大研究熱點[1]。雖然近年來關(guān)于微小RNA在胃癌中的表達及臨床意義的研究報道層出不窮，但就現(xiàn)階段來說，關(guān)于微小RNA-451(miR-451)在胃癌中的表達以及微小RNA-451(miR-451)與胃癌的臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系方面的研究報道仍舊比較少?；诖?，該研究通過對2014年6月—2016年8月期間鹽城市第三人民醫(yī)院收治的32例胃癌患者的臨床資料進行回顧性分析，旨在探討微小RNA-451(miR-451)的表達與胃癌的臨床病理特征及預(yù)后之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 應(yīng)用雜交爐，原位雜交檢測試劑盒，恒溫水浴箱以及微小RNA-451(miR-451)探針。

1.2.2 微小RNA-451(miR-451)表達的檢測方法 應(yīng)用原位雜交技術(shù)進行檢測?？酒蟪Ｒ?guī)切片，然后進行脫蠟處理，應(yīng)用梯度乙醇復(fù)水的方法[2]；應(yīng)用3%過氧化氫，對內(nèi)源性酶進行滅活；在室溫條件下，3%胃蛋白酶常規(guī)消化15～20 min，然后水洗、固定；滴加提前準備好的預(yù)雜交液之后，在55℃的環(huán)境中預(yù)雜交2 h；miR-451探針使用地高辛標記，并將其置于55℃的環(huán)境中雜交過夜；第2天，使用不同濃度的SSC（saline sodium citrate）緩沖溶液對其進行洗滌[3]；之后滴加封閉液，在室溫狀態(tài)下封閉 30 min；取出后滴加生物素化鼠抗地高辛，并在室溫狀態(tài)下孵育2 h然后滴加SABC液，并在室溫狀態(tài)下孵育30 min；最后應(yīng)用DAB顯色，并使用蘇木素進行復(fù)染，對其進行充分水洗之后，再應(yīng)用中性樹膠進行封片、保存。

1.3 檢測結(jié)果判定

胃癌細胞胞質(zhì)、胃癌細胞胞核或胃黏膜上皮出現(xiàn)棕黃色顆粒，為微小RNA-451(miR-451)陽性。評估微小RNA-451(miR-451)陽性信號強度，并賦予分值[4]。無：0～1分（含）；弱信號：1（不含）～2分（含）；中等信號：2分（不含）～3分（含）；強信號：3（不含）～4分（含）。計數(shù)陽性細胞，在400倍顯微鏡下，每個標本分別選取3個典型視野，并對微小RNA-451(miR-451)陽性細胞占比進行計算。陽性細胞占比×信號強度即為表達得分，得分為0～4分,2分以下為低表達，2分及以上為高表達。由兩位病理醫(yī)師對組織芯片結(jié)果進行獨立鏡檢以及評分。

1.4 統(tǒng)計方法

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析與處理。用[n（%）]表示計數(shù)資料，組間比較的時候采取確切概率法或χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

對于油脂產(chǎn)品的需求我國甚至是全世界都呈現(xiàn)一種較高的趨勢，對于食用油的消費數(shù)量也逐年增多，在我國油脂行業(yè)存在的優(yōu)勢可見，其發(fā)展前景是十分廣闊的，隨著經(jīng)濟的發(fā)展，人口數(shù)量的不斷增加，生活水平的不斷提高，對于未來油脂產(chǎn)品的消費空間還會有較大的上升空間。在我國，城鎮(zhèn)化進程不斷加快，我國養(yǎng)殖業(yè)也必將面臨較大的規(guī)模增長，人們對于肉食需求的增長也從一定程度上促進了油脂加工行業(yè)發(fā)展的逐步擴張，對于食用油消費的需求總量上始終保持著剛性增長的趨勢。

2 結(jié)果

2.1 微小RNA-451(miR-451)在胃癌組織中的表達

微小RNA-451(miR-451)在胃癌組織中的高表達率為36.11%，明顯低于癌旁正常組織的77.78%；差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。具體見表1。

表1 微小RNA-451(miR-451)在胃癌組織與癌旁正常組織中的表達比較[n（%）]

2.2 微小RNA-451(miR-451)的表達與胃癌的臨床病理特征的關(guān)系

相比較于I～II期的胃癌患者，III～IV期胃癌患者的微小RNA-451(miR-451)高表達率明顯較低，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；相比較于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的微小RNA-451(miR-451)高表達率明顯較低，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；具體見表2。

表2 胃癌患者微小RNA-451(miR-451)的表達與胃癌各項臨床病理特征的關(guān)系[n（%）]

2.3 微小RNA-451(miR-451)的表達與胃癌預(yù)后的關(guān)系

對患者及其家屬行4～30個月的電話隨訪，23例微小RNA-451(miR-451)低表達者中14例死亡，其病死率為60.87%，9例生存，生存率為39.13%；13例微小RNA-451(miR-451)高表達者中4例死亡，其病死率為30.77%，9例生存，生存率為69.23%。微小RNA-451(miR-451)高表達者的生存率明顯高于微小RNA-451(miR-451)低表達者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義 （P＜0.05）。說明微小RNA-451(miR-451)表達水平越高，患者的生存時間也就越好，代表預(yù)后越好。

3 討論

在不同類型的腫瘤中，微小RNA的表達存在很大的差異，表達異常的微小RNA，一般情況下位于相關(guān)癌癥基因的突變位點[5]。且相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，胃癌中，微小RNA表達異常的機制主要包括：①RNA甲基化狀態(tài)；②參與微小RNA形成的蛋白因子存在異常；③微小RNA所在的基因發(fā)生了轉(zhuǎn)位、擴增或者缺失等[6]。

在胃癌組織中，有多種微小RNA的表達，微小RNA的表達水平不同，胃癌患者的預(yù)后也存在一定的差異。張軍等人[7]的研究指出，在胃癌組織中微小RNA-215與胃癌的分化程度、臨床病期分類分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)；微小RNA-215的表達在胃癌細胞中高于正常胃黏膜細胞株，其表達量與胃癌細胞的分化程度之間無明顯相關(guān)性。汪偉等人[8]通過進行試驗發(fā)現(xiàn)，miR-451及MIFmRNA與胃癌的分化程度、TNM分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，從而得出如下結(jié)論，miR-451可能通過抑制MIF負向調(diào)控了胃癌的發(fā)生、發(fā)展作用。王利平等人[9]發(fā)現(xiàn)，癌旁非腫瘤組織、胃癌組織中miRNA-100的相對表達量分別為（0.74±0.36）、（1.31±0.69）；胃癌組織中miRNA-100的表達與患者的性別、年齡、腫塊位置、腫塊大小、分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素均無明顯的相關(guān)性，從而得出結(jié)論miRNA-100在胃癌中的異常表達可能與胃癌的發(fā)生有關(guān)。

該研究通過回顧性分析該院于2014年6月—2016年8月期間收治的32例胃癌患者的臨床資料，探討微小RNA-451(miR-451)的表達與胃癌的臨床病理特征及預(yù)后之間的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：微小RNA-451(miR-451)在胃癌組織中的高表達率為36.11%，明顯低于癌旁正常組織的77.78%；TNM分期III～IV期胃癌患者的微小 RNA-451(miR-451)高表達率為47.62%，明顯低于TNM分期I期～II期胃癌患者的86.67%；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的微小RNA-451(miR-451)高表達率為47.06%，明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的78.95%；微小RNA-451(miR-451)高表達者的生存率為69.23%，明顯高于微小RNA-451(miR-451)低表達者的39.13%。這一研究結(jié)果與相關(guān)文獻，如陳濤等人[10]的研究結(jié)果：92例胃癌組織中 miR-451高表達率為38.04%（35/ 92），正常胃黏膜組織中 miR-451高表達率為76.60%（36/ 47）；III～IV期胃癌患者的微小 RNA-451高表達率為27.3%（15/55），I～II期胃癌患者的高表達率為54.1%（20/ 37）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中 miR-451的高表達率為27.1%（16/59），無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中 miR-451的高表達率為33.19%（19/33），存在一致性。這一研究結(jié)果說明，微小RNA-451(miR-451)在胃癌組織中的高表達率明顯低于癌旁正常組織，微小RNA-451(miR-451)在胃癌中的表達水平，與胃癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期之間密切相關(guān)。

綜上所述，微小RNA-451(miR-451)與胃黏膜組織的惡性病變、胃癌組織浸潤轉(zhuǎn)移、預(yù)后具有明顯的相關(guān)性，可能是胃癌患者的新治療靶點以及預(yù)后及診斷的新的潛在分子標志物。

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[1]張家魁,謝強,劉繼超,等.MiR-335表遺傳學(xué)調(diào)控與胃癌臨床病理特征和預(yù)后相關(guān)性研究[J].中華腫瘤防治雜志,2015, 22（21）:1680-1687.

[2]王凡,任曉峰,徐余超,等.微小RNA-451在胃癌組織的表達及對胃癌細胞周期的影響[J].環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué),2016,33（5）:455-460.

[3]巢海潮,董志峰,張古月,等.miRNA-451在膀胱癌細胞中的表達及對其生物學(xué)功能的影響[J].臨床與病理雜志, 2016,33（9）:1350-1355.

[4]劉博,田延鋒,趙增仁,等.microRNA-451在結(jié)直腸癌組織中的表達及其臨床意義[J].中國普通外科雜志,2013,22（4）:447-451.

[5]周志威,聶玉強,杜艷蕾,等.活化白細胞黏附分子在胃癌組織中的表達及其調(diào)控機制[J].廣東醫(yī)學(xué),2013,34（18）: 2784-2788.

[6]邵彬,李惠平,朱軍,等.復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者血漿miRNA表達水平與臨床病理特征、化療療效及預(yù)后關(guān)系的研究[J].癌癥進展,2015（2）:106-113，139.

[7]張軍,陳兆峰,劉曉光,等.微小RNA-215在胃癌中的表達及其臨床意義[J].蘭州大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版,2013，39（4）:13-16，20.

[8]汪偉,孫曉娜,張玉峰,等.miR-451與MIF在胃癌組織中表達的相關(guān)性研究[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2013（11）:1384-1387.

[9]王利平,王啟之,鄧敏,等.微小RNA-100在胃癌中的表達及臨床意義[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2015，40（1）:37-39，42.

[10]陳濤,謝黎明,唐海林.miR-451在胃癌組織中的表達及其臨床意義[J].天津醫(yī)藥,2015,43（3）:267-269，337.

Objective to Investigate the Relationship between the Expression of Minimal RNA-451(miR-451)and Clinicopatho Logical Features and Prognosis of Gastric Cancer

LIANG Xiao-dong
Department of Pathology Yancheng City Third People's Hospital,Yancheng,Jiangsu Province,224001 China

Objective To investigate the relationship between the expression of minimal RNA-451 (miR-451)and clinicopathological features and prognosis of gastric cancer.Methods 32 patients with gastric cancer who were treated in our hospital from June 2014 to August 2016 were selected as subjects.Specimens of gastric cancer tissues and normal tissues were collected from 32 patients.The expression of small RNA-451(miR-451)in gastric cancer tissues and adjacent normal tissues was studied by in situ hybridization.To investigate the expression of minimal RNA-451(miR-451)in gastric carcinoma and to analyze the relationship between clinicopathological features and prognosis.Results Small RNA-451 (miR-451)in the tissue of gastric cancer high expression rate is 36.11%, significantly less than 77.78%of the normal tissue adjacent to carcinoma;Phase III～IV gastric cancer patients with tiny RNA-451 (miR-451)of high expression rate is 47.62%,significantly less than 86.67%of the patients with stage I～II gastric cancer;With lymph node metastasis is tiny RNA-451(miR-451)of high expression rate is 47.06%,significantly lower than without lymph node metastasis is 78.95%;Small RNA-451 (miR-451)the high expression of survival rate was 69.23%,significantly higher than thesmall RNA-451 (miR-451)lower expression of 39.13%;The difference was statistically significant(P＜0.05).Conclusion Micro RNA-451 (miR-451)has a significant correlation with malignant lesions of gastric mucosa,invasion and metastasis of gastric cancer, and may be a new therapeutic target for gastric cancer.

Minimal RNA-451;Expression;Gastric cancer;Clinicopathological features;Prognosis

R735.2

A doi 10.11966/j.issn.2095-994X.2016.02.04.07

2016-10-01；

2016-11-12

梁曉東（1980.2-），男，江蘇鹽城人，本科，主治醫(yī)師，研究方向：病理學(xué)。