方芳，盧軍鋒，王奇，馮為民

參麥注射液對(duì)腦梗死大鼠免疫抑制治療作用的實(shí)驗(yàn)研究

方芳，盧軍鋒，王奇，馮為民

目的探討參麥注射液對(duì)卒中后免疫抑制的影響。方法將55只小鼠分為假手術(shù)組、對(duì)照組和給藥組。制作大鼠腦梗死模型后，給藥組動(dòng)物給予腹腔注射參麥注射液，假手術(shù)組、對(duì)照組給予腹腔注射0.9%氯化鈉注射液。手術(shù)后第3天，對(duì)照組、給藥組大鼠經(jīng)鼻吸入肺炎鏈球菌。連續(xù)監(jiān)測(cè)大鼠體質(zhì)量、肛溫。3 d后處死大鼠，留取胸腺、脾臟、肺部組織病理切片。結(jié)果與假手術(shù)組比，造模后對(duì)照組大鼠體質(zhì)量、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)下降，肛溫升高；給藥后，給藥組大鼠體質(zhì)量、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)高于對(duì)照組，肛溫則低于對(duì)照組（＜0.05）。對(duì)照組肺組織病理切片顯示肺組織內(nèi)可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，而給藥組炎癥反應(yīng)明顯減輕。結(jié)論參麥注射液可以增強(qiáng)腦梗死大鼠對(duì)細(xì)菌的免疫力，對(duì)卒中后免疫抑制有一定的治療作用。

參麥注射液；腦梗塞；大鼠；免疫抑制

腦梗死又稱缺血性卒中，中醫(yī)稱之為卒中或中風(fēng)。本病發(fā)病率逐年升高，急性卒中患者約85%出現(xiàn)并發(fā)癥［1］，并發(fā)癥嚴(yán)重影響患者的康復(fù)，甚至導(dǎo)致患者死亡，而感染是增加卒中后患者致死率及致殘率的首要原因。目前有實(shí)驗(yàn)室和臨床證據(jù)證實(shí)腦卒中后免疫抑制可能是導(dǎo)致腦卒中后感染的主要原因［2］。參麥注射液是由人參、麥冬兩味藥物提取精制而成，具有大補(bǔ)元?dú)?、益氣固脫、養(yǎng)陰生津之功效，在臨床上廣泛應(yīng)用。參麥注射液能夠提高機(jī)體對(duì)各種物理、化學(xué)、生物等不良影響的耐受能力，增強(qiáng)機(jī)體的抵抗力和對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力。本研究探討參麥注射液對(duì)卒中后免疫抑制的治療作用，報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1材料采用SPF級(jí)SD雄性大鼠55只（由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房提供），體質(zhì)量280～350 g，年齡9～13周。將55只小鼠置于20℃、自然光線、明暗交替環(huán)境下飼養(yǎng)，適應(yīng)1周。分為假手術(shù)組15只，對(duì)照組20只，給藥組20只。

1.2方法

1.2.1模型制作 （1）采用羊血普通瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)肺炎鏈球菌，液體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)，收獲后0.5%苯酚殺菌后置4℃?zhèn)溆?。?）腦梗死動(dòng)物模型制作。采用線栓法阻塞大鼠大腦中動(dòng)脈制作大鼠腦梗死模型。手術(shù)前常規(guī)禁食、消毒，采用水合氯醛（350 mg/kg）腹腔注射麻醉，在手術(shù)顯微鏡下實(shí)施大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞模型手術(shù)［3-4］。麻醉后約10 min，固定大鼠，去毛、碘伏消毒；在頸部正中作1.5cm切口，上自頸部與下頜反折處，下自胸骨角；從胸鎖乳突肌和頸前肌群之間向深部分離，顯露頸動(dòng)脈鞘，充分游離右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈；分別用6-0絲線結(jié)扎頸外動(dòng)脈（ECA）根部和頸總動(dòng)脈（CCA）離分叉8 mm處，頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA）和CCA套線，壓閉ICA阻斷血流以控制剪開CCA后血液反流；于CCA離分叉約5 mm處剪一小口，置入尼龍栓線至ICA套線處，單結(jié)輕微結(jié)扎CCA套線，將助栓線沿ICA方向插入1.8 cm；導(dǎo)線放置2h后拔出，清理縫合切口。假手術(shù)組僅分離出頸動(dòng)脈，然后即縫合切口。將大鼠放回鼠籠，自由飲食。

1.2.2給藥方法線栓阻塞大腦中動(dòng)脈開始后即給予各組大鼠腹腔注射左氧氟沙星針100 mg/kg，每2小時(shí)1次，總6次。給藥組動(dòng)物于手術(shù)后同時(shí)給予腹腔注射參麥注射液10 ml/kg，連續(xù)6 d，每天2次；對(duì)照組、假手術(shù)組于術(shù)后同時(shí)給予腹腔注射0.9%氯化鈉注射液10ml/kg，連續(xù)6 d，每天2次。在實(shí)驗(yàn)過程中，每天按時(shí)喂藥，同時(shí)給予飼料，并定時(shí)觀察、記錄小鼠的體質(zhì)量、肛溫。

1.2.3鏈球菌肺炎模型制作［5］手術(shù)后第3天，將3組大鼠模型采用10%水合氯醛（350mg/kg）腹腔注射麻醉，然后對(duì)照組、給藥組經(jīng)鼻腔滴入20 l肺炎鏈球菌懸浮液，假手術(shù)組鼻腔滴入20 l滅菌蒸餾水，同時(shí)保持大鼠口腔閉合，并且固定頭部向上保持直立位15min，以確保最大程度的吸入鏈球菌。完成后正常喂養(yǎng)，并定時(shí)觀察、記錄小鼠的體質(zhì)量、肛溫。

1.2.4標(biāo)本采集與處理大鼠感染模型制作3 d后，使用10%水合氯醛（350 mg/kg）腹腔注射麻醉，在無菌條件下，使用70%酒精將大鼠清洗消毒。斷頭取血，將血液連續(xù)稀釋后放置于血液瓊脂培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。并立即摘取胸腺和脾臟，稱重后將血液離心取上清液，－70℃保存待測(cè)。將大鼠胸廓切開，取出部分肺組織，加無菌磷酸鹽緩沖溶液研杵搗碎，將肺組織混懸液鋪于血液瓊脂培養(yǎng)皿中，放置于37℃，含5%CO2和20%O2的N2中培養(yǎng)12 h后計(jì)數(shù)肺炎鏈球菌菌落。將肺組織浸沾多聚甲醛后在4℃環(huán)境下放置48 h，然后使用石蠟固定。切片機(jī)切成10 l，用蘇木精和伊紅染色。

1.3檢測(cè)指標(biāo) （1）體質(zhì)量和體溫：各組動(dòng)物在造模、用藥過程中對(duì)體質(zhì)量、體溫進(jìn)行連續(xù)觀察。（2）胸腺、脾臟臟器指數(shù)：各組動(dòng)物胸腺、脾臟用電子天平稱重，除以其相應(yīng)體質(zhì)量即得每只小鼠胸腺、脾臟指數(shù)。（3）肺組織切片：由2名未知實(shí)驗(yàn)研究分組的研究人員評(píng)估并選擇每個(gè)動(dòng)物肺組織切片20張，采用HE染色法進(jìn)行染色。參照以下病理組織學(xué)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)切片進(jìn)行評(píng)估：肺泡擴(kuò)張，肺泡壁增厚，血管周圍組織實(shí)變，細(xì)支氣管周圍水腫，肺泡內(nèi)和周圍白細(xì)胞浸潤(rùn)。

1.4統(tǒng)計(jì)方法應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，采用 檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1大鼠體質(zhì)量情況3組大鼠在肺炎模型造模前體質(zhì)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；造模后，對(duì)照組大鼠體質(zhì)量呈明顯下降趨勢(shì)，造模第4、5、6天其體質(zhì)量顯著低于假手術(shù)組（均＜0.05）。給藥組肺炎模型造模后體重變化不明顯，造模第4、5、6天其體質(zhì)量顯著高于對(duì)照組（均＜0.05）。見表1。

2.2大鼠肛溫情況3組大鼠在肺炎模型造模前體溫差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；造模后，對(duì)照組體溫上升，造模后第4、5、6天其體溫顯著高于假手術(shù)組（均＜0.05）。給藥組肺炎模型造模后體溫變化不明顯，術(shù)后第4、5、6天其體溫顯著低于對(duì)照組（均＜0.05）。見表2。

2.3大鼠臟器指數(shù)情況與假手術(shù)組相比，對(duì)照組大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均低（均＜0.05）；給藥組大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)低于對(duì)照組（均＜0.05）。見表3。

表1　各組間大鼠體質(zhì)量　g

表2　大鼠肛溫　℃

表3　大鼠臟器指數(shù)　mg/g

2.4肺組織切片假手術(shù)組：肺組織結(jié)構(gòu)正常，肺泡形態(tài)清晰，氣道、血管及肺泡間隔有輕度炎癥反應(yīng)。對(duì)照組：肺泡壁增厚，血管、氣道和肺泡間隔可見大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)（中性粒細(xì)胞、嗜酸細(xì)胞和淋巴細(xì)胞）。給藥組：炎細(xì)胞浸潤(rùn)主要存在于氣道和血管周邊，肺泡間隔周邊有較少炎細(xì)胞浸潤(rùn)，相對(duì)模型組，炎癥反應(yīng)明顯減輕（較假手術(shù)組重）。見封二彩圖1。

3　討論

近年來，人們認(rèn)識(shí)到腦卒中是一種能夠引起多系統(tǒng)受累的疾病，神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)是互相調(diào)節(jié)、保持機(jī)體平衡的兩大系統(tǒng)。神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)輸入的免疫信號(hào)進(jìn)行加工后主要通過三條信號(hào)通路輸出，影響外周的免疫活動(dòng)［6-7］。腦卒中干擾了兩系統(tǒng)之間的正常聯(lián)絡(luò)，導(dǎo)致卒中誘導(dǎo)的炎癥及卒中誘導(dǎo)的免疫抑制。

本研究顯示，腦梗死大鼠在吸入肺炎鏈球菌后，對(duì)照組和給藥組均出現(xiàn)體溫升高的炎癥反應(yīng)，而對(duì)照組大鼠體溫增加更加明顯，且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。并且，對(duì)照組大鼠體質(zhì)量也出現(xiàn)顯著降低，考慮與對(duì)照組大鼠炎癥反應(yīng)明顯，機(jī)體消耗較大有關(guān)。提示在給予參麥注射液治療后，大鼠對(duì)炎癥反應(yīng)的抵抗力較對(duì)照組有所提升。

胸腺和脾臟是重要的免疫器官，其臟器指數(shù)可在一定程度上反映機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱。本研究顯示，腦梗死后大鼠胸腺、脾臟指數(shù)等降低，從側(cè)面提示卒中后大鼠的免疫功能出現(xiàn)了抑制的表現(xiàn)；而給藥組相比于對(duì)照組胸腺、脾臟指數(shù)提升，說明參麥注射液表現(xiàn)出了免疫促進(jìn)作用。

綜上所述，參麥注射液對(duì)大腦中動(dòng)脈阻塞大鼠的免疫抑制具有一定的治療作用，可以減輕卒中后肺炎的發(fā)病程度。本實(shí)驗(yàn)未觀察到死亡率，以及炎癥介質(zhì)和炎癥因子改變情況，可在進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行研究。在臨床腦梗死患者的治療中，可根據(jù)患者的辨證分型考慮給予參麥注射液治療。

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10.3969/j.issn.1671-0800.2016.04.021

R743

A

1671-0800（2016）04-0458-02

2015-12-21

（本文編輯：孫海兒）

浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)臨床科研基金（2013ZYC-A47）

310007杭州，杭州市中醫(yī)院

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