施武媚，張蓉蓉，吳剣蘭（九江市第一人民醫(yī)院，江西332000）

·臨床研究·

淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫聯(lián)合丙種球蛋白治療復(fù)發(fā)性流產(chǎn)效果探討*

施武媚，張蓉蓉，吳剣蘭（九江市第一人民醫(yī)院，江西332000）

目的探討淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫聯(lián)合丙種球蛋白治療復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的效果。方法按照隨機(jī)雙盲對(duì)照原則將2013年6月至2014年1月收治的60例復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者分為試驗(yàn)組和對(duì)照組，每組30例。對(duì)照組患者給予單純淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療，試驗(yàn)組患者在此基礎(chǔ)上給予丙種球蛋白治療，比較兩組患者治療前后CD3+、CD4+、自然殺傷（NK）細(xì)胞、白介素10（IL-10）水平變化，以及隨訪20個(gè)月妊娠和流產(chǎn)情況。結(jié)果試驗(yàn)組患者治療后CD3+、IL-10水平［（69.92±7.43）%、（1.74±0.33）pg/mL］明顯高于對(duì)照組 ［（66.71±6.29）%、（1.35±0.31）pg/mL］，CD4+、NK細(xì)胞水平 ［（41.41±2.26）%、（10.38±5.62）%］明顯低于對(duì)照組［（46.32±2.57）%、（17.46±6.65）%］，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組患者治療后上述指標(biāo)分別與同組治療前比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。試驗(yàn)組患者妊娠成功率［90.00%（27/30）］明顯高于對(duì)照組［66.67%（20/30）］，流產(chǎn)率［10.00%（3/30）］低于對(duì)照組［33.33%（10/30）］，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫聯(lián)合丙種球蛋白能夠有效改善患者的免疫功能指標(biāo)，提高妊娠成功率，可作為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的優(yōu)選治療方案。

流產(chǎn)，習(xí)慣性；免疫，主動(dòng)；淋巴細(xì)胞；丙種球蛋白類；抗體，封閉

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)指產(chǎn)婦連續(xù)出現(xiàn)2次及以上自然流產(chǎn)的情況，臨床發(fā)生率較高。臨床研究表明，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)受免疫、內(nèi)分泌、感染、遺傳等多種因素影響，多數(shù)患者并無(wú)明確原因，臨床治療較為棘手［1］。免疫治療是目前治療復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的主要方法，其中最常用的是淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療及大劑量免疫球蛋白被動(dòng)免疫治療［2］。單一手段治療已在臨床上廣泛開展，但療效不一，淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫聯(lián)合丙種球蛋白治療報(bào)道較少。本研究擬深入分析淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫聯(lián)合丙種球蛋白治療的臨床效果和優(yōu)勢(shì)，以期為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的臨床治療提供新的思路和依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2013年6月至2014年1月本院收治的60例復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《婦產(chǎn)科學(xué)（第8版）》［3］中復(fù)發(fā)性流產(chǎn)相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；有連續(xù)2次及以上反復(fù)流產(chǎn)史，并結(jié)合病理診斷確診；以往未進(jìn)行過(guò)主動(dòng)免疫治療，內(nèi)分泌及免疫功能正常，染色體正常；夫妻雙方均能充分理解治療并自愿接受。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并器質(zhì)性疾病，感染，家族病史，丈夫精液檢查結(jié)果異常者。按照隨機(jī)雙盲對(duì)照原則，將60例患者分為試驗(yàn)組和對(duì)照組，每組30例。試驗(yàn)組患者年齡22～33歲，平均（29.27±3.26）歲；流產(chǎn)2～5次，平均（3.02±1.17）次；流產(chǎn)時(shí)孕周4～13周，平均（7.97±1.22）周。對(duì)照組患者年齡22～34歲，平均（29.35±3.22）歲；流產(chǎn)2～ 5次，平均（3.04±1.06）次；流產(chǎn)時(shí)孕周4～13周，平均（8.06±1.24）周。兩組患者一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1治療方法

1.2.1.1對(duì)照組患者給予單純淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療。在無(wú)菌條件下抽取患者丈夫或無(wú)關(guān)第三方肘靜脈血20 mL，利用淋巴細(xì)胞分離液（北京索奧生物醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào)：20130529）分離獲得外周血單核細(xì)胞，并制備成細(xì)胞濃度約為20×108L-1的細(xì)胞懸濁液，取0.8mL于患者前臂內(nèi)側(cè)行9點(diǎn)皮內(nèi)注射，每3周1次，4次為1個(gè)療程。療程結(jié)束后2周復(fù)查封閉抗體，若仍為陰性則需再進(jìn)行1個(gè)療程的治療；療程結(jié)束后2周復(fù)查封閉抗體結(jié)果為陽(yáng)性者可考慮懷孕，懷孕后需每2周給予1次淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療，連續(xù)治療6次。

1.2.1.2試驗(yàn)組患者在對(duì)照組治療基礎(chǔ)上給予丙種球蛋白（南岳生物制藥有限公司，批號(hào)：20130602）400mg/ （kg·d）治療，靜脈滴注，連續(xù)3 d?；颊咴星懊?周進(jìn)行1次治療，孕后改為每3周進(jìn)行1次治療，至孕26周。

1.2.2觀察指標(biāo)比較兩組患者治療前后CD3+、CD4+、自然殺傷（NK）細(xì)胞、白介素10（IL-10）水平變化，并進(jìn)行連續(xù)20個(gè)月隨訪，記錄隨訪期間患者妊娠和流產(chǎn)情況，以妊娠達(dá)到或超過(guò)28周判定為成功妊娠。

1.2.3CD3+、CD4+、NK細(xì)胞、IL-10檢測(cè)抽取患者空腹靜脈血4mL，使用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝后高速分離血清，使用FAC-SCatibur型流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）進(jìn)行檢測(cè)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1兩組治療前后CD3+、CD4+、NK細(xì)胞、IL-10水平比較兩組患者治療后CD3+、IL-10水平明顯升高，CD4+、NK細(xì)胞水平明顯降低，與同組治療前比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；試驗(yàn)組患者治療后CD3+、IL-10水平明顯高于對(duì)照組，CD4+、NK細(xì)胞水平明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1　兩組治療前后CD3+、CD4+、NK細(xì)胞、IL-10水平比較

2.2兩組妊娠和流產(chǎn)情況比較試驗(yàn)組患者妊娠成功率明顯高于對(duì)照組，而流產(chǎn)率低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2　兩組妊娠和流產(chǎn)情況比較［n（%）］

3　討　論

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)是婦產(chǎn)科發(fā)病率較高且較難處理的疾病，對(duì)患者的生殖健康有明顯影響。妊娠是一種同種半異體移植情況，胎兒擁有父親的抗原基因，因此能夠產(chǎn)生抗原，若母體將這種抗原判定為異物而產(chǎn)生排斥作用將發(fā)生流產(chǎn)［4］。正常母體中能夠產(chǎn)生封閉抗體，封閉異物抗原，從而保證妊娠的正常進(jìn)行；而復(fù)發(fā)性流產(chǎn)正是因?yàn)槟阁w缺乏封閉抗體而導(dǎo)致母體產(chǎn)生抗體排斥和攻擊胚胎，造成自然流產(chǎn)［5］。許多專家也認(rèn)為，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)主要因胚胎未得到母體足夠的封閉抗體和失去免疫防護(hù)而引發(fā)，即關(guān)鍵發(fā)病因素為胚胎抗原免疫低反應(yīng)［6］。

近年來(lái)，免疫因素逐漸被臨床醫(yī)生所關(guān)注，有研究報(bào)道指出，免疫職能細(xì)胞亞群的格局變化，即輔助性T細(xì)胞Th1/Th2細(xì)胞因子失調(diào)、胎盤血管環(huán)境變化，可能是導(dǎo)致復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的重要原因［7］。目前臨床上應(yīng)用的免疫治療方案的主要作用機(jī)制為誘導(dǎo)母體對(duì)胚胎免疫產(chǎn)生耐受作用，從而保證胚胎在母體內(nèi)能夠正常存活。常用免疫治療方案包括淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療、大劑量免疫球蛋白的被動(dòng)免疫治療和維生素D3治療等。目前單用其中一種方法治療復(fù)發(fā)性流產(chǎn)在國(guó)內(nèi)一些大的生殖中心已開展，療效不一。

本研究所采用的淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫治療主要是利用丈夫或無(wú)關(guān)第三方個(gè)體的外周血淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)母體產(chǎn)生同種免疫反應(yīng)，產(chǎn)生足夠量的封閉抗體并對(duì)再次受孕的胚胎提供免疫保護(hù)［8］。而丙種球蛋白治療則主要是通過(guò)補(bǔ)充丙種球蛋白中抵抗胚胎抗原的抗體成分改善母體封閉抗體缺乏情況，促進(jìn)Th2等細(xì)胞因子產(chǎn)生，減少NK細(xì)胞毒性，從而起到保護(hù)胚胎的作用［9］。

本研究結(jié)果顯示，試驗(yàn)組患者治療后CD3+、IL-10水平均明顯高于對(duì)照組，CD4+、NK細(xì)胞水平均明顯低于對(duì)照組，表明淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫與大劑量丙種球蛋白被動(dòng)免疫有明顯的協(xié)同作用，二者聯(lián)合治療方案在改善患者免疫系統(tǒng)功能方面臨床效果更加明顯。另外，本研究中試驗(yàn)組患者妊娠成功率明顯高于對(duì)照組，也證實(shí)了淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫與大劑量丙種球蛋白被動(dòng)免疫聯(lián)合治療方案在保護(hù)胚胎、提高患者正常妊娠率方面有顯著臨床優(yōu)勢(shì)。

總之，淋巴細(xì)胞主動(dòng)免疫聯(lián)合丙種球蛋白能夠有效改善患者免疫功能指標(biāo)，提高妊娠成功率，可作為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的優(yōu)選治療方案。

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江西省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)科研基金資助項(xiàng)目（20157067）。

2015-10-22）