趙敬軍　榮培晶　羅　曼　張金鈴　李　亮　梁繁榮

(1 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院針灸研究所，北京，100700； 2 成都中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，成都，610075)

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針刺“陽(yáng)陵泉”穴對(duì)豚鼠oddi括約肌肌電、膽囊壓力及膽汁流量的影響

趙敬軍1榮培晶1羅曼1張金鈴1李亮1梁繁榮2

(1 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院針灸研究所，北京，100700； 2 成都中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，成都，610075)

目的：通過(guò)觀察針刺“天樞”“期門”“陽(yáng)陵泉”對(duì)豚鼠膽囊壓力、oddi括約肌肌電及膽汁流量的影響，探討針刺“陽(yáng)陵泉”穴調(diào)節(jié)肝外膽道系統(tǒng)運(yùn)動(dòng)功能的效應(yīng)是否優(yōu)于其他穴位及其可能的作用機(jī)制。方法：選用成年豚鼠15只，雌雄不限，分成“天樞”“期門”“陽(yáng)陵泉”組，實(shí)驗(yàn)采用oddi括約肌雙鉤金屬電極埋植測(cè)肌電場(chǎng)電位與膽囊內(nèi)置小型人工球囊技術(shù)測(cè)壓，對(duì)麻醉豚鼠行在體記錄oddi括約肌肌電活動(dòng)及膽囊內(nèi)壓力變化，并記錄干預(yù)前后膽汁流量情況，針刺激頻率為60r/min，刺激穴位為：?jiǎn)蝹?cè)“期門”“天樞”“陽(yáng)陵泉”，每次刺激1 min，選取連續(xù)刺激5次的數(shù)據(jù)用來(lái)分析。結(jié)果：針刺“天樞”“期門”穴，oddi括約肌肌電頻率與幅值與針刺前相比均明顯增多(均P<0.05)，膽囊壓力幅值無(wú)明顯變化(P>0.05)；針刺“陽(yáng)陵泉”，oddi括約肌肌電頻率和幅值與針刺前相比明顯下降(P<0.01)，膽囊壓力幅值明顯上升(P<0.01)；針刺“陽(yáng)陵泉”1 min，膽汁流量有顯著性升高(P<0.001)，針刺“天樞”或“期門”1 min，膽汁流量略有升高但是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論：1)針刺豚鼠“期門”“天樞”能明顯抑制膽囊的運(yùn)動(dòng)、促進(jìn)oddi括約肌的肌電發(fā)放，減少進(jìn)入十二指腸的膽汁流量，而針刺“陽(yáng)陵泉”能顯著促進(jìn)膽囊的收縮運(yùn)動(dòng)、抑制oddi括約肌的肌電發(fā)放，促進(jìn)豚鼠膽汁流量的增加;2)“陽(yáng)陵泉”的效果要明顯于其他穴位，由于“陽(yáng)陵泉”為本經(jīng)穴位，因此在本研究中存在明顯的循經(jīng)特異性。

膽囊壓力；針刺；肌電；運(yùn)動(dòng)功能；oddi括約??；豚鼠

肝外膽道運(yùn)動(dòng)功能障礙類疾病屬于中醫(yī)脅痛范疇，長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐證實(shí)[1-3]，針刺“陽(yáng)陵泉”“肩井”“膽俞”“期門”等對(duì)膽道系統(tǒng)疾病具有良好療效，隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步和基礎(chǔ)研究的深入，越來(lái)越多的證據(jù)指出肝外膽道系統(tǒng)的運(yùn)動(dòng)功能障礙可能是導(dǎo)致各類膽道系統(tǒng)疾病的重要因素[4-7]。肝外膽道系統(tǒng)的主要觀察對(duì)象是膽囊和oddi括約肌。正常情況下，膽囊和oddi括約肌的活動(dòng)相互協(xié)調(diào)，而在病理情況下，膽囊的功能障礙與oddi括約肌的功能狀態(tài)息息相關(guān)[8]。

本研究在豚鼠生理狀態(tài)下，采用膽囊內(nèi)放置人工小型氣囊的技術(shù)和用金屬雙鉤電極穿過(guò)oddi括約肌導(dǎo)出肌電的方法，觀察針刺“期門”“天樞”“陽(yáng)陵泉”對(duì)豚鼠膽囊壓力和oddi括約肌及膽汁流量的影響，以進(jìn)一步探討針刺“期門”“天樞”“陽(yáng)陵泉”調(diào)整肝外膽道系統(tǒng)運(yùn)動(dòng)功能的效應(yīng)及影響因素，為針灸臨床提供生理學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物成年豚鼠15只，雌雄不限，體重在450～600 g，由北京西山動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)提供，生產(chǎn)許可證號(hào)為：SCXF-(京)-2011-0010。動(dòng)物自購(gòu)置后先進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)，時(shí)間為1周，使用標(biāo)準(zhǔn)草料喂養(yǎng)，由于豚鼠體內(nèi)無(wú)法合成充足維生素，故而每周在標(biāo)準(zhǔn)草料之外加入胡蘿卜與青菜喂養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)為其體重的一半/d，動(dòng)物可自由飲水與攝食，室溫為23～25 ℃。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)得到中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院針灸研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)許可，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物的處置嚴(yán)格遵循2006年中華人民共和國(guó)科技部頒發(fā)的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》。

1.2實(shí)驗(yàn)方法穴位定位及操作：穴位定位主要參照“常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的針灸穴位”之方法[9]、結(jié)合采用模擬人體經(jīng)穴進(jìn)行豚鼠穴位定位。豚鼠“天樞”穴位于臍中旁開(kāi)5 mm，操作為直刺進(jìn)針2～3 mm；豚鼠“期門”穴位于第6肋間隙處，操作為平刺進(jìn)2～3 mm；豚鼠“陽(yáng)陵泉”穴位于后三里(膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，在腓骨小頭下約3 mm處取穴)上外側(cè)4 mm，操作為直刺進(jìn)針2～3 mm。以上諸穴采用捻轉(zhuǎn)刺激，頻率60次/min，針刺1 min。

實(shí)驗(yàn)步驟：10%烏拉坦溶液(4.5 mL/kg)腹腔緩慢推注麻醉，劍突下沿腹正中線做長(zhǎng)約8 mm的切口，充分的暴露膽囊，十二指腸和膽總管。膽囊插管：在膽囊底部剪2 mm的小口，將裝有生理鹽水的測(cè)壓小囊放入膽囊內(nèi)，荷葉邊結(jié)扎切口，手術(shù)結(jié)固定。由一軟橡膠管將小囊與壓力換能器(MLT1199)相聯(lián)，壓力換能器的插頭插入生物信號(hào)放大器；oddi括約肌放置雙鉤電極，電極連線與十二指腸縱軸平行，電極的另一端通過(guò)生物信號(hào)放大器，2種信號(hào)均輸入到PowerLab S/4數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)。術(shù)后待動(dòng)物的狀態(tài)平穩(wěn)以后，能記錄到穩(wěn)定的肌電和壓力曲線再行針刺操作。Chart5.0記錄系統(tǒng)采樣頻率為200Hz；在線oddi括約肌肌電記錄濾波參數(shù)為低通10Hz，線下數(shù)字濾波低通1 Hz；膽囊壓力記錄參數(shù)為低通2 Hz，線下數(shù)字濾波低通1 Hz。

1.3針刺操作針刺方法：豚鼠“天樞”穴位于臍中旁開(kāi)5 mm，“期門”穴位于第6肋間隙處，“陽(yáng)陵泉”穴位于后三里(膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，在腓骨小頭下約3 mm處取穴)上外側(cè)4 mm，采用捻轉(zhuǎn)行針，頻率60次/min，行針1 min。

2　結(jié)果

2.1針刺陽(yáng)陵泉穴對(duì)豚鼠oddi括約肌肌電的影響正常豚鼠的oddi括約肌肌電由每隔3～5 s產(chǎn)生的包含1～8個(gè)峰電位放電所組成,在安靜狀態(tài)下，括約肌放電較為稀少，但始終是有規(guī)則的節(jié)律性發(fā)放。

針刺干預(yù)前，豚鼠的oddi括約肌肌電表現(xiàn)為單發(fā)或簇發(fā)，頻率3～7次/min，平均頻率：3.71±1.56(times/min)；最大幅值：16.7 mV，平均幅值：(13.72±2.71)mv；針刺陽(yáng)陵泉前平均頻率為：4.75±0.50(times/min)，平均幅值為：(10.60±0.55)mV,針刺1 min oddi括約肌肌電平均頻率3.4±0.55(times/min)(P<0.01)，平均幅值(9.40±0.55)mV(P<0.01)；針刺期門前平均頻率為：3.60±0.55(times/min)，平均幅值為：(10.40±0.55)mV,手針刺激1 min，oddi括約肌肌電平均頻率4.60±0.55(times/min)(P<0.05)，平均幅值(11.40±0.55)mV(P<0.05)；針刺天樞前平均頻率為：4±0.71(times/min)，平均幅值為：(10.40±0.55)mV,手針刺激1 min，oddi括約肌肌電平均頻率5.2±0.84(times/min)(P<0.05)，平均幅值(11.20±0.45)mv(P<0.05)。

2.2針刺陽(yáng)陵泉穴對(duì)豚鼠膽囊壓力的影響膽囊的壓力比較平穩(wěn)，每分鐘有2～5次收縮，呼吸波與膽囊收縮波復(fù)合出現(xiàn)。針刺陽(yáng)陵泉穴干預(yù)前，豚鼠膽囊壓力平均幅值為(3.2±0.45)mmHg，針刺陽(yáng)陵泉1 min，觀察發(fā)現(xiàn)豚鼠膽囊壓力幅值上升為4.8±0.84(P<0.01)；針刺期門前，豚鼠膽囊壓力平均幅值(3.4±1.14)mmHg，針刺期門1 min，觀察發(fā)現(xiàn)豚鼠膽囊壓力幅值下降為2.8±0.45(P>0.05)；針刺天樞前，豚鼠膽囊壓力平均幅值為(3.8±0.84)mmHg，針刺天樞1 min，觀察發(fā)現(xiàn)豚鼠膽囊壓力幅值下降為3.2±0.45(P>0.05)。

圖1　針刺前和針刺過(guò)程中oddi括約肌肌電的 頻率變化情況(n=5)

注：△P<0.01；*P<0.05；針刺激“陽(yáng)陵泉”穴1 min，oddi括約肌肌電頻率和針刺前相比顯著減少(P<0.01)；手針刺激“期門”或“天樞”穴1 min，oddi括約肌肌電頻率和針刺前相比顯著增加(P<0.05)。

圖2　針刺前和針刺過(guò)程中oddi括約肌肌電的 幅度變化情況(n=5)

注：△P<0.01；*P<0.05；針刺激“陽(yáng)陵泉”穴1 min，oddi括約肌肌電幅度和針刺前相比顯著降低(P<0.01)；手針刺激“期門”或“天樞”穴1 min，oddi括約肌肌電頻率和針刺前相比顯著升高(P<0.05)。

2.3針刺陽(yáng)陵泉穴對(duì)豚鼠膽汁流量的影響針刺陽(yáng)陵泉穴干預(yù)前，豚鼠膽囊壓力平均幅值為10.8±0.84(g/min)，針刺陽(yáng)陵泉1 min，觀察發(fā)現(xiàn)豚鼠膽囊壓力幅值上升為14.6±0.55(P<0.001)；針刺期門前，豚鼠膽囊壓力平均幅值10.2±1.09(g/min)，針刺期門1 min，觀察發(fā)現(xiàn)豚鼠膽囊壓力幅值下降為11±0.71(g/min)(P>0.05)；針刺天樞前，豚鼠膽囊壓力平均幅值為10.2±0.84(g/min)，針刺天樞1 min，觀察發(fā)現(xiàn)豚鼠膽囊壓力幅值下降為10±1(g/min)(P>0.05)。

圖3　針刺前和針刺過(guò)程中膽囊壓力的變化情況(n=5)

注：△P<0.01；針刺激“陽(yáng)陵泉”穴1 min，豚鼠膽囊壓力幅度和針刺前相比顯著升高(P<0.01)；針刺激“期門”或“天樞”穴1 min，豚鼠膽囊壓力幅度和針刺前相比無(wú)顯著性變化(P>0.05)。

圖4　針刺前和針刺過(guò)程中膽汁流量的變化情況(n=5)

注：△△P<0.001；針刺激“陽(yáng)陵泉”穴1 min，豚鼠膽汁流量和針刺前相比顯著升高(P<0.001)；針刺激“期門”或“天樞”穴1 min，豚鼠膽汁流量和針刺前相比無(wú)顯著性變化(P>0.05)。

3　討論

針刺對(duì)急慢性膽道系統(tǒng)疾病及其常見(jiàn)癥狀具有良好療效，現(xiàn)代大量臨床觀察[1-3，10]顯示，針刺足少陽(yáng)膽經(jīng)“陽(yáng)陵泉”、足厥陰肝經(jīng)穴“期門”等對(duì)膽道系統(tǒng)疾病具有良好的治療效果，然而目前依然缺乏相關(guān)的效應(yīng)機(jī)制研究。

在本實(shí)驗(yàn)中，“陽(yáng)陵泉”為足少陽(yáng)膽經(jīng)上合穴，為本經(jīng)五輸穴，刺之有疏肝利膽之功，早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中就已經(jīng)有關(guān)于“陽(yáng)陵泉”治療膽病的記載，《靈樞·邪氣藏府病形篇》曰：“膽病者，善太息，口苦，嘔宿汁，……，亦視其脈三陷下者炙之，其寒熱者，取陽(yáng)陵泉”；“期門”穴是足厥陰肝經(jīng)之募穴，且為足太陰、厥陰、陰維之會(huì)穴，功能健脾理氣，疏肝活血，對(duì)膽結(jié)石癥，肝炎、膽囊炎等肝膽病的康復(fù)保健具有良好療效；“天樞”穴為足陽(yáng)明胃經(jīng)穴位，位于臍旁兩寸，亦為手陽(yáng)明大腸經(jīng)之募穴，功善理氣行滯。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果而言，針刺膽經(jīng)上合穴“陽(yáng)陵泉”穴能有效促進(jìn)膽汁流量的生成，能抑制oddi括約肌的活動(dòng)增加膽囊的壓力，其針刺產(chǎn)生的效應(yīng)最為明顯，遠(yuǎn)優(yōu)于“天樞”和“期門”2個(gè)穴位產(chǎn)生的效應(yīng)；在循經(jīng)特異性效應(yīng)的層面來(lái)說(shuō)，本經(jīng)的穴位其效果要優(yōu)于相表里的肝經(jīng)穴位“期門”穴和近端的“天樞”穴，因此，針刺本經(jīng)的“陽(yáng)陵泉”穴對(duì)膽道系統(tǒng)疾病具有特異性效應(yīng)，這為肝外膽道系統(tǒng)疾病的治療提供了有意義的臨床參考。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實(shí)，針刺“期門”穴、“天樞”穴、“陽(yáng)陵泉”穴對(duì)oddi括約肌肌電、膽囊壓力和膽汁流量的調(diào)節(jié)主要經(jīng)由交感和迷走神經(jīng)協(xié)調(diào)完成，在消化間期迷走神經(jīng)參與了oddi括約肌與膽囊協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)的調(diào)控[11]；從神經(jīng)分布的節(jié)段性支配情況來(lái)看，支配膽囊運(yùn)動(dòng)的交感神經(jīng)元主要分布在T4-T10脊髓側(cè)角，支配oddi括約肌的交感神經(jīng)元主要分布在T6-T12脊髓側(cè)角，“天樞”區(qū)域的軀體傳入信號(hào)主要投射到T9-T11，“期門”區(qū)域的軀體傳入信號(hào)主要投射到T3-T6，“陽(yáng)陵泉”區(qū)域的軀體傳入信號(hào)主要投射到L4-L5，因此，針刺“期門”“天樞”的軀體傳入信息與膽囊、oddi括約肌的交感神經(jīng)支配基本上處在脊髓的同節(jié)段或者重疊節(jié)段，因此,針刺“期門”“天樞”能有效抑制膽囊活動(dòng)促進(jìn)oddi括約肌舒縮。因而可以認(rèn)為，膽道系統(tǒng)運(yùn)動(dòng)可以由針刺刺激引發(fā)抑制或者易化，而且抑制和易化都在很大程度上依賴于刺激部位的節(jié)段，“天樞”和“期門”的刺激通過(guò)Aδ類纖維或者C類纖維傳入，在脊髓水平通過(guò)激活交感神經(jīng)反射性抑制膽道系統(tǒng)運(yùn)動(dòng)，而來(lái)自陽(yáng)陵泉的針刺沖動(dòng)，可能通過(guò)無(wú)髓傳入纖維經(jīng)由脊髓上中樞的整合反射性經(jīng)由副交感迷走神經(jīng)傳出纖維發(fā)揮促進(jìn)膽道運(yùn)動(dòng)和膽汁分泌的作用。

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(2016-06-16收稿責(zé)任編輯：洪志強(qiáng))

Effects on Guinea Pig′s Oddi Sphincter, Pressure of Gallbladder, Bile flow When Acupuncturing at GB34

Zhao Jingjun1，Rong Peijing1，Luo Man1，Zhang Jinling1，Li Liang1，Liang Fanrong2

(1InstituteofAcupunctureandMoxibustion,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China;2SchoolofAcupuncture-MoxibustionandTuina,ChengduUniversityofTCM,Chengdu610075,China)

Objective: To observe the effects of acupuncturing at “Qimen” (LR14)、“Tianshu” (ST25), “Yanglingquan” (GB34) on pressure of gallbladder, bile flow and motor function of oddi sphincter on guinea pig, so as to explore the efficacy and mechanism of acupuncture on regulating extra-hepatic biliary system movement and its advantages compared with the other different acpoints. Methods: Total 15 adult guinea pigs, no matter male or female, were were divided into LR14 group, ST25 group and GB34 group. The technology of implanted electrodes with double hooks was adopted for electrical detection of oddi sphincter, changes of gallbladder pressure, as well as bile flow. The frequency of acupuncture is 60r/min, acpoints were ST25、LR 14、GB34 for the single side, 1 min every time. And the results were obtained from the continues five time′s statistic. Results: Stimulation at ST25 or LR14 significantly increased the frequency and amplitude of oddi sphincter(P<0.05); but there was no significant decrease in the gallbladder pressure(P>0.05); On the contrary, stimulation at GB34 significantly decreased oddi sphincter and increased the gallbladder pressure(P<0.01). Bile current capacity of gallbladder had no significant change following one minute′s stimulation at the ST25 or LR14, but had significant change following one minute′s stimulation at the GB34(P<0.01). Conclusion: 1)Acupuncture at ST25 and LR14 could obviously inhibit the movement of gallbladder and promote the myoelectricity release of oddi sphincter. Acupuncturing at GB34 can apparently promote the shrinking movement of gallbladder and inhibit the myoelectricity release of oddi sphincter. 2)The effects of acupuncture at GB34 in this study had most significant changes than the ST25 or LR14.

Gall bladder pressure；Acupuncture；Myoelectricity；Motor function；Oddi sphincter; Guinea pig

科技部“973”課題(編號(hào)：2012CB518503)——“經(jīng)穴效應(yīng)循經(jīng)特異性靶器官響應(yīng)的生物學(xué)基礎(chǔ)研究”，負(fù)責(zé)人：榮培晶

趙敬軍，碩士研究生，研究方向：針灸效應(yīng)機(jī)制，E-mail:tongchengzjj@163.com

榮培晶，研究員，博士研究生導(dǎo)師，研究方向：針灸效應(yīng)機(jī)制，E-mail:drrongpj@163.com

R245

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2016.08.049