張茹薏，游　晶，楊微波，饒少鋒

(昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染性疾病科　650032)

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HIV/AIDS合并HBV/HCV感染病毒載量水平及與T淋巴細(xì)胞相關(guān)性的探討*

張茹薏，游晶△，楊微波，饒少鋒

(昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院感染性疾病科650032)

目的探討人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)/艾滋病(AIDS)合并乙型肝炎病毒(HBV)/丙型肝炎病毒(HCV)感染后病毒載量水平變化及對(duì)機(jī)體T淋巴細(xì)胞免疫機(jī)制的影響。方法分別測(cè)定HIV/AIDS單純感染組,HIV/HBV合并感染組,HIV/HCV合并感染組3組的HIV RNA、HBV DNA、HCV RNA、CD4+T淋巴細(xì)胞頻數(shù)、CD8+T淋巴細(xì)胞頻數(shù)、CD4/CD8比值，并分析各組T淋巴細(xì)胞與HIV RNA的關(guān)系，HBV DNA/HCV RNA與HIV RNA、CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞、CD4/CD8比值的相關(guān)性。結(jié)果HIV/AIDS單純感染組、HIV/HBV合并感染組及HIV/HCV合并感染組的CD4+T淋巴細(xì)胞與各自組的HIV RNA呈負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HIV/AIDS單純感染組、HIV/HBV合并感染組的CD8+T淋巴細(xì)胞與各自組的HIV RNA呈負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；HIV/AIDS單純感染組、HIV/HBV合并感染組及HIV/HCV合并感染組的CD4/CD8與各自組的HIV RNA呈負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論合并感染HBV后，HIV/AIDS患者T細(xì)胞的數(shù)量下降更明顯，致HIV RNA、HBV DNA高載量，加速了HIV病情進(jìn)展；感染HBV后CD4+T細(xì)胞的數(shù)量下降比感染HCV更明顯。

肝炎病毒，乙型；肝炎病毒，丙型；HIV/AIDS；HIV RNA;T淋巴細(xì)胞

人類(lèi)免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)主要侵犯人體的免疫系統(tǒng)，包括CD4+T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞等，主要表現(xiàn)為CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量不斷減少，同時(shí)會(huì)對(duì)CD8+T淋巴細(xì)胞等亞群T淋巴細(xì)胞造成不同程度損害，最終導(dǎo)致人體細(xì)胞免疫功能缺陷，引起各種機(jī)會(huì)性感染和腫瘤的發(fā)生。隨著高效抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療(highly active antiretroviral therapy，HAART)的有效應(yīng)用，HIV/艾滋病(AIDS)相關(guān)的機(jī)會(huì)性感染率下降，因?yàn)橐倚透窝撞《?HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)與HIV有著相似的感染途徑，故HIV 合并HBV/HCV感染比較常見(jiàn)，是影響HIV感染患者發(fā)病率和病死率的一個(gè)主要原因[1]。當(dāng)HIV合并HBV/HCV感染時(shí)，HIV促進(jìn)HBV/HCV的復(fù)制，發(fā)展為慢性乙型肝炎(CHB)/慢性丙型肝炎(CHC)的速度比單純HBV/HCV感染者快，其肝臟病變的患病率和病死率明顯增加[2]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)分析HIV/AIDS單純感染組、HIV/HBV合并感染組及HIV/HCV合并感染組中的HIV RNA、HBV DNA、HCV RNA的水平，并和T淋巴細(xì)胞的相關(guān)性，初步探討合并HBV/HCV感染后對(duì)HIV/AIDS病程及機(jī)體T淋巴細(xì)胞免疫機(jī)制的影響，并為臨床藥物治療提供免疫依據(jù)。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2010～2013年就診于昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院、昆明市第三人民醫(yī)院門(mén)診和住院部的經(jīng)HIV篩查試驗(yàn)陽(yáng)性，AIDS確證陽(yáng)性且未經(jīng)高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的HIV/AIDS單純感染者、HIV/HBV合并感染者及HIV/HCV合并感染者作為研究對(duì)象。HIV感染的診斷參照《艾滋病診療指南(2011版)》，HBV感染的診斷參照《乙型肝炎防治指南(2010版)》，HCV感染的診斷參照《丙型肝炎防治指南(2010版)》。全部患者均排除甲型、戊型肝炎，自身免疫性疾病，酒精性肝病，藥物性肝病，肝癌，淋巴瘤，卡波西肉瘤，結(jié)核，細(xì)菌感染，結(jié)締組織病，其他免疫缺陷疾病，且近1年內(nèi)未使用免疫抑制劑。研究對(duì)象共267例，其中男208例，女59例，年齡3～91歲，平均(41.00±11.15)歲。其中HIV/AIDS單純感染組100例，男74例，女26例，年齡3～91歲，平均(41.37±14.18)歲；HIV/HBV合并感染組66例，男53例，女13例，年齡23～73歲，平均(42.64±11.15)歲；HIV/HCV合并感染組101例，男81例，女20例，年齡22～63歲，平均(39.56±6.79)歲。

1.2方法

1.2.1HIV RNA測(cè)定血清HIV RNA病毒載量采用RT-PCR方法，用美國(guó)Roche公司的全自動(dòng)核酸分離純化系統(tǒng)(COBAS AMPLICOR)和核酸提取試劑盒，提取病毒RNA并測(cè)定病毒載量。操作過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.2HBV DNA測(cè)定采用寶生物核酸提取試劑盒，PCR方法測(cè)定HBV DNA。

1.2.3HCV RNA測(cè)定采用寶生物核酸提取試劑盒，RT-PCR方法測(cè)HCV RNA。

1.2.4T淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定采集所有研究病例新鮮肝素抗凝外周血300 μL，采用美國(guó)Beeton Dickinson公司生產(chǎn)的FACS calibur型流式細(xì)胞儀及其公司生產(chǎn)的專(zhuān)用試劑盒進(jìn)行嚴(yán)格操作。

2　結(jié)　　果

2.1HIV/AIDS單純感染組與HIV/HBV合并感染組之間T淋巴細(xì)胞亞群的差異HIV/AIDS單純感染組與HIV/HBV合并感染組的HIV RNA、CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞、CD4/CD8比值的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表1。

2.2HIV/AIDS單純感染組與HIV/HCV合并感染組之間T淋巴細(xì)胞亞群的差異HIV/AIDS單純感染組與HIV/HCV合并感染組的HIV RNA、CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞、CD4/CD8比值，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。

2.3HIV/HBV合并感染組與HIV/HCV合并感染組之間T淋巴細(xì)胞亞群的差異HIV/HBV合并感染組與HIV/HCV合并感染組的HIV RNA、CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞、CD4/CD8比值的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表1　　HIV/AIDS單純感染組與HIV/HBV合并感染組之間HIV RNA及T淋巴細(xì)胞亞群的差異

表2　　HIV/AIDS單純感染組與HIV/HCV合并感染組之間HIV RNA及T淋巴細(xì)胞亞群的差異

表3　　HIV/HBV合并感染組與HIV/HCV合并感染組之間HIV RNA及T淋巴細(xì)胞亞群的差異

表4　　3組中T淋巴細(xì)胞亞群與各自組HIV RNA(log10 copies/mL)的相關(guān)性

2.43組中T淋巴細(xì)胞亞群與各自組HIV RNA間的相關(guān)性HIV/AIDS單純感染組、HIV/HBV合并感染組及HIV/HCV合并感染組的CD4+T淋巴細(xì)胞與各自組的HIV RNA呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)；HIV/AIDS單純感染組、HIV/HBV合并感染組的CD8+T淋巴細(xì)胞與各自組的HIV RNA呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)；而HIV/HCV合并感染組的CD8+T淋巴細(xì)胞與本組的HIV RNA呈負(fù)相關(guān)(P>0.05);HIV/AIDS單純感染組、HIV/HBV合并感染組及HIV/HCV合并感染組的CD4/CD8與各自組的HIV RNA呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表4。

2.5HIV/HBV合并感染組HIV RNA、T淋巴細(xì)胞亞群與HBV DNA間的相關(guān)性HIV/HBV合并感染組中HIV RNA與HBV DNA呈正相關(guān)(P<0.05)；CD4+T淋巴細(xì)胞、CD4/CD8與HBV DNA呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)；而CD8+T淋巴細(xì)胞與HBV DNA呈正相關(guān)(P>0.05)，見(jiàn)表5。

表5　　HIV/HBV合并感染組HIV RNA、T淋巴細(xì)胞亞群 與HBV DNA間的相關(guān)性

2.6HIV/HCV合并感染組HIV RNA、T淋巴細(xì)胞亞群與HBV DNA間的相關(guān)性HIV/HCV合并感染組中HIV RNA與HCV RNA呈正相關(guān)，CD4+T淋巴細(xì)胞與HCV RNA呈負(fù)相關(guān)，CD4/CD8與HCV RNA無(wú)相關(guān)，CD8+T淋巴細(xì)胞與HCV RNA呈負(fù)相關(guān)(P>0.05)，見(jiàn)表6。

表6　　HIV/HCV合并感染組HIV RNA、T淋巴細(xì)胞 亞群與HCV RNA間的相關(guān)性

3　討　　論

正常情況下外周血中的T細(xì)胞亞群主要包括CD4+T細(xì)胞亞群和CD8+T細(xì)胞亞群。CD8+T細(xì)胞的功能在于清除被病毒感染了的靶細(xì)胞，CD4+T細(xì)胞的功能則在于清除入侵機(jī)體的細(xì)菌等病原微生物。研究證明，HIV合并HBV感染患者HBV DNA載量較HBV單純感染高[3]。研究發(fā)現(xiàn)特異性T細(xì)胞與共感染HBV病毒載量呈負(fù)相關(guān)，而HIV合并HBV感染中HBV特異性T細(xì)胞反應(yīng)減少[4]，故HBV DNA高載量。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HIV/HBV合并感染組CD4+T淋巴細(xì)胞與HBV DNA呈負(fù)相關(guān)，而CD8+T淋巴細(xì)胞與HBV DNA呈正相關(guān)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。栗群英等[5]發(fā)現(xiàn)在HIV合并HBV和HCV感染的患者外周血檢查中發(fā)現(xiàn)HIV、HBV和HCV感染患者的外周血CD8+T細(xì)胞的數(shù)量增加較單純HIV感染患者的增加更為劇烈。而本實(shí)驗(yàn)HIV/HBV中的外周血CD8+T細(xì)胞和CD4+T淋巴細(xì)胞的數(shù)量比HIV/AIDS單純感染組減少，HIV/HCV組中的外周血CD8+T細(xì)胞的數(shù)量比HIV/HBV合并感染組明顯增加，HIV/HBV合并感染組中的外周血CD4+T細(xì)胞的數(shù)量比HIV/HCV合并感染組下降明顯。且合并感染組HIV RNA較HIV/AIDS單純感染組水平高。

CD4+T細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行性減少是HIV感染的重要特征性改變，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)合并感染HBV后CD4+T細(xì)胞的數(shù)量下降更明顯，破壞嚴(yán)重，致HIV RNA、HBV DNA高載量。且感染HBV后CD4+T細(xì)胞的數(shù)量下降比感染HCV合并感染更明顯?？烧J(rèn)為合并感染HBV后加速了HIV病情進(jìn)展。

HIV/HCV合并感染組和HIV/AIDS單純感染組相比，外周血CD8+T細(xì)胞的數(shù)量、CD4+T細(xì)胞的數(shù)量及HIV RNA均無(wú)差異。HIV/HCV合并感染時(shí)，情況相對(duì)復(fù)雜，也有研究發(fā)現(xiàn)，HIV/HCV合并感染時(shí)，HCV RNA等對(duì)HIV感染者的免疫學(xué)或病毒學(xué)方面影響并不明顯[6]。

本實(shí)驗(yàn)中HIV/HCV合并感染與HIV/AIDS單純感染組之間的HIV RNA、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD4/CD8的差異不顯著，HCV RNA與HIV RNA，CD4+T細(xì)胞，CD8+T細(xì)胞，CD4/CD8幾乎不相關(guān)，與臨床經(jīng)驗(yàn)及其他研究結(jié)論不相符[7]。目前多數(shù)學(xué)者對(duì)HCV的感染是否可加快HIV發(fā)展為AIDS的進(jìn)程還存在爭(zhēng)論[8]。

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Discussing viral load levels after HIV/AIDS merges HBV/HCV infection and its relationship with T lymphocytes

ZhangRuyi,YouJing△,YangWeibo,RaoShaofeng

(DepartmentofInfectious,theFirstAffiliatedHospitalofKunmingMedicalUniversity，Kunming，Yunnan650032,China)

ObjectiveTo explore the viral load levels after HIV/AIDS merges HBV/HCV infection and its relationship with T lymphocytes.MethodsHIV RNA,HBV DNA,HCV RNA,CD4+T lymphocyte frequency,CD8+T lymphocyte frequency,CD4/CD8 measured in HIV/AIDS simple infection group,mixed HIV/HBV infection group and mixed HIV/HCV infection group.Analyze relationship of T lymphocyte and HIV RNA,the correlation of HBV DNA/HCV RNA,HIV RNA,CD4+T lymphocyte frequency,CD8+T lymphocyte frequency,CD4/CD8.ResultsCD4+T lymphocyte frequency of HIV/AIDS simple infection group,mixed HIV/HBV infection group and mixed HIV/HCV infection group showed negative correlated with their respective group′s HIV RNA(P<0.05);CD8+T lymphocyte frequency of HIV/AIDS simple infection group and mixed HIV/HBV infection group showed negative correlated with their respective group′s HIV RNA(P<0.05);CD4/CD8 of HIV/AIDS simple infection group,mixed HIV/HBV infection group and mixed HIV/HCV infection group show negative correlated with their respective group′s HIV RNA(P<0.05).ConclusionT lymphocyte of HIV/AIDS patients drop faster,leading to high viral load of HIV RNA,HBV DNA and accelerating HIV disease progress with HBV infection.T lymphocyte of HIV/AIDS patients with HBV infection drop faster than with HCV infection.

hepatitis B virus;hepatitis C virus;HIV/AIDS;HIV RNA;T lymphocyte

張茹薏(1987-)，住院醫(yī)師，碩士，主要從事病毒性肝炎及艾滋病研究，現(xiàn)在在云南省第一人民醫(yī)院工作?！?/p>

，E-mail:jingyoukm@126.com。

論著·臨床研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2016.07.015

R512.91；R392.3

A

1671-8348(2016)07-0912-03

2015-09-12

2015-11-20)