鄒　楠，王學(xué)東，閻　兵，李　彪，胡先勤，胡駿鵬，劉　瓊（.武漢輕工大學(xué)，湖北武漢43003；.安琪酵母股份有限公司，湖北宜昌443003）

不同后處理富硒酵母對小鼠抗氧化力、免疫力及硒沉積的影響

鄒楠1，王學(xué)東1，閻兵1，李彪2，胡先勤1，胡駿鵬2，劉瓊1
（1.武漢輕工大學(xué)，湖北武漢430023；2.安琪酵母股份有限公司，湖北宜昌443003）

為研究不同后處理方式對富硒酵母應(yīng)用效果的影響，本試驗比較了活性富硒酵母、酶解富硒酵母和機械粉碎富硒酵母對飼喂霉變?nèi)占Z小鼠生理生化機能的影響。結(jié)果顯示，活性富硒酵母組在提高小鼠肝臟谷胱甘肽過氧化物酶（GSH－Px）水平上表現(xiàn)最佳，但與其他組差異不顯著（P＞0.05）；機械粉碎富硒酵母組血清總超氧化物歧化酶（TSOD）和血凝集指標(biāo)顯著優(yōu)于其他各組（P＜0.05）；而酶解富硒酵母組肝臟硒含量顯著優(yōu)于其他各組（P＜0.05）。該試驗說明，不同后處理富硒酵母均具有緩解霉變?nèi)占Z對動物負(fù)面影響的作用，但后處理方式不同，作用效果有差異。

富硒酵母；后處理；小鼠；抗氧化；免疫

［Abstract］Ⅰn order to explore the application effect of different post-processing selenium-enriched yeast（Se-Yeast），this paper compared the physiological activity changes ofmice fed moldy diet，which was treated with active Se-Yeast，hydrolysised Se-Yeast or crushed Se-Yeast.Results showed that the liver glutathione peroxidase（GSH-Px）in active Se-Yeastgroup was the highest，while therewas no significant difference among all groups（P＞0.05）.The serum total superoxide dismutase（T-SOD）and anti-SRBC antibody level in crushed Se-Yeast group was significantly higher than those of other groups（P＜0.05）.While the contentof tissue Se in the hydrolysised Se-Yeast group was higher than thatof other groups significantly（P＜0.05）.This experiment indicated that all the Se-Yeast above-mentioned could decrease the negative effects caused bymoldy diet，meanwhile the effect could be influenced by the post-processingmethods.

［Key words］selenium-enriched yeast；post-processing；mice；antioxidant；immunity

霉菌毒素污染會對動物機體的抗氧化和免疫機能等造成諸多負(fù)面影響，而硒具有提高動物機體抗氧化能力和免疫水平的作用。發(fā)酵制備的富硒酵母，可以通過不同的后處理技術(shù)得到不同類型的產(chǎn)品，其中包括具有酵母菌活性的富硒酵母（簡稱活性富硒酵母）、經(jīng)機械粉碎失去酵母菌活性的富硒酵母（簡稱機械粉碎富硒酵母）及經(jīng)過酶解自溶失去酵母活性的富硒酵母（簡稱酶解富硒酵母）等。為探討不同后處理富硒酵母的應(yīng)用效果差異，本試驗比較了活性富硒酵母、酶解富硒酵母和機械粉碎富硒酵母對飼喂霉變?nèi)占Z小鼠生理生化機能的影響，以期為選擇富硒酵母的后處理方式提供參考。

1　材料與方法

1.1試驗材料試驗動物：雄性昆明小鼠48只，單只體重約20g，購自湖北省疾病控制中心。

富硒酵母：活性富硒酵母、酶解富硒酵母、機械粉碎富硒酵母，均為實驗室自制。

試驗日糧：對小鼠普通日糧進行人工霉變處理（高溫高濕環(huán)境致霉）。檢測其中主要霉菌毒素含量，如表1所示。由表1可以看出，試驗日糧霉菌總數(shù)、黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮均已超標(biāo)。

主要試劑：谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）檢測試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）檢測試劑盒、丙二醛（MDA）檢測試劑盒、考馬斯亮藍蛋白檢測試劑盒、溶菌酶（LZM）測試盒等，均購自南京建成生物工程研究所。

表1　發(fā)霉飼料主要霉菌毒素指標(biāo)檢測結(jié)果及相應(yīng)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

主要設(shè)備：低溫冷凍離心機（CR22GⅠⅠ，日本日立Hitachi）；組織勻漿機（FG200，濰坊三水檢驗設(shè)備公司）；電子天平（PL-2002，上海精密科學(xué)儀器有限公司）；分光光度計（T6，北京普析有限公司）；恒溫水浴鍋（HH-S2，常州普天儀器制造有限公司）。

1.2試驗方法試驗動物分組與樣品采集：為消除不同飼養(yǎng)環(huán)境對試驗結(jié)果造成的影響，采用完全隨機分組的方法，將48只小鼠隨機分配成4組，即空白對照組（發(fā)霉飼料，灌胃0.86％生理鹽水）、機械粉碎富硒酵母組（發(fā)霉飼料，灌胃機械粉碎富硒酵母懸液）、酶解富硒酵母組（發(fā)霉飼料，灌胃酶解富硒酵母懸液）和活性富硒酵母組（發(fā)霉飼料，灌胃活性富硒酵母懸液），每劑型組有12只小鼠，實行混籠飼養(yǎng)。先預(yù)飼養(yǎng)1周，然后進行灌胃試驗，灌胃時間為4周。于每天15：00灌胃一次。各富硒酵母組中每天灌胃的硒劑量隨小鼠體重調(diào)節(jié)，按照每10 g體重給予0.9μg硒計算。小鼠自由采食、飲水、每天更換一次墊料，保證鼠籠內(nèi)的環(huán)境清潔（張賓和王予輝，2007）。在第35天試驗結(jié)束后對小鼠進行體重稱量，全群利用摘除眼球法采血，之后處死并對其解剖，采集肝臟，低溫勻漿備用。血樣于離心管內(nèi)，放置約1 h，將凝固血與管壁剝離，使血清充分析出，2000 r/min離心10 min，收集血清，-20℃保存。

抗氧化指標(biāo)檢測：GSH-Px活性、T-SOD活性和MDA值均依照南京建成生物工程研究所提供的方法進行測定。

免疫指標(biāo)檢測：遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)指標(biāo)參照Corsini等（1997）提供的方法測定；血清溶血素的測定采用血凝集法（徐學(xué)瑛，1979）；溶菌酶的測定（比濁法）參照南京建成生物工程研究所提供的溶菌酶試劑盒LZM中的測定。

硒含量指測定：參照GB/T 5009.93-2003進行。

1.3數(shù)據(jù)處理所有數(shù)據(jù)均以 “平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，用SPSS12.0.1軟件進行統(tǒng)計分析。

2　試驗結(jié)果與分析

2.1不同后處理富硒酵母對小鼠肝臟抗氧化指標(biāo)的影響不同后處理富硒酵母對小鼠肝臟抗氧化指標(biāo)的影響結(jié)果見表2。由表2可以看出，添加富硒酵母各組的GSH-Px值均顯著高于空白硒組（P＜0.05），其中，活性富硒酵母組最高，但各不同后處理富硒酵母組間無顯著差異 （P＞0.05）；機械粉碎富硒酵母組T-SOD值顯著高于空白硒組和酶解富硒酵母組 （P＜0.05）；MDA值各組之間未見顯著差異（P＞0.05）。

表2　肝臟組織抗氧化指標(biāo)

本試驗中，飼喂霉變?nèi)占Z后，小鼠肝臟GSHPx和T-SOD值下降，MDA值上升，提示霉菌毒素對小鼠機體的抗氧化能力有負(fù)面作用，富硒酵母具有緩解上述負(fù)面作用的趨勢，但不同處理組間存在一定差異。

2.2不同后處理富硒酵母對小鼠血清免疫指標(biāo)的影響不同后處理富硒酵母對小鼠血清免疫指標(biāo)的影響結(jié)果見表3。由表3可見，血凝集抗體積數(shù)指標(biāo)上機械粉碎富硒酵母組顯著高于其他各組（P＜0.05），另外兩個免疫指標(biāo)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)和溶菌酶含量各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

表3　血清的各項免疫指標(biāo)

本試驗中，飼喂霉變?nèi)占Z后，小鼠肝臟遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)和血凝集抗體積數(shù)升高，溶菌酶含量下降，提示霉菌毒素對小鼠機體的免疫能力有負(fù)面作用。從數(shù)值上看，富硒酵母緩解了遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，提高了溶菌酶活力，顯示出改善免疫機能的作用。機械粉碎富硒酵母組血凝集抗體積數(shù)提高，這可能與機械破碎后酵母細(xì)胞壁的形態(tài)有關(guān)，具體原因還有待進一步探討。

2.3不同后處理富硒酵母對小鼠肝臟硒含量的影響不同后處理富硒酵母對小鼠肝臟硒含量的影響見表4。表4結(jié)果表明，添加不同后處理富硒酵母的各組肝臟硒沉積量均極顯著高于空白組（P＜0.01）。各富硒酵母組之間也存在一定差異，酶解富硒酵母組硒沉積量顯著高于活性富硒酵母組和機械粉碎富硒酵母組（P＜0.05）。

表4　肝臟組織樣硒的含量

本研究中各富硒酵母組肝臟硒水平均在2.0 mg/kg以上。這提示，攝入霉變?nèi)占Z后，小鼠機體需要更多的硒儲備，以利于緩解霉菌毒素的負(fù)面影響。

3　討論與小結(jié)

硒元素具有提高動物機體抗氧化能力和免疫水平的作用 （王冠興等，2008；Kouadio等，2007）。不同來源的硒應(yīng)用效果不同，這與各種形態(tài)的硒在吸收、轉(zhuǎn)運和代謝的方面的差異有關(guān)。同一來源的硒，受各種因素的影響，應(yīng)用效果也可能不同（陳忠法等，2003）。

富硒酵母是發(fā)酵生產(chǎn)的制劑，其最初是單細(xì)胞形態(tài)，也可繼續(xù)通過酶解或機械加工打開細(xì)胞壁，以促進其中硒成分的釋放。研究顯示，單細(xì)胞形態(tài)的富硒酵母在動物消化道內(nèi)會發(fā)生自溶現(xiàn)象，釋放出包含硒成分的內(nèi)容物組分，發(fā)揮補硒的作用（閻兵等，2011）。目前，關(guān)于不同后處理工藝制備的富硒酵母的應(yīng)用效果研究較少。

本試驗中，小鼠飼喂發(fā)霉日糧后，其機體抗氧化和免疫能力受到一定程度的負(fù)面影響，通過應(yīng)用富硒酵母，上述負(fù)面作用得到緩解。不同后處理方法制備的富硒酵母在應(yīng)用效果上存在一定差異?；钚愿晃湍冈谔岣咝∈蟾闻KGSH-Px水平上表現(xiàn)最佳，但與其他組差異不顯著（P＞0.05）；機械粉碎富硒酵母組血清T-SOD和血凝集指標(biāo)顯著優(yōu)于其他各組（P＜0.05）；而酶解富硒酵母組肝臟硒含量顯著優(yōu)于其他各組（P＜0.05）。

本試驗結(jié)果提示，富硒酵母的后處理工藝影響硒的釋放及其在機體內(nèi)的吸收利用。同時，由于富硒酵母自身除硒元素外，還含有其他諸多成分，這些成分也會收到后處理的影響，進而最終影響產(chǎn)品的應(yīng)用效果，其原因還有待今后深入探討。

［1］陳忠法，俞信光，韓澤建.不同硒源對內(nèi)仔雞生產(chǎn)性能和肉質(zhì)的影響［J］.浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報，2003，15（4）：250～254.

［2］王冠興，孫茂紅，岳春旺.硒與動物免疫機能研究進展［J］.河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，12（6）：97～99.

［3］徐學(xué)瑛.一個改進的體液免疫測定方法-溶血素測定法 ［J］.藥學(xué)學(xué)報，1979，14：443～444.

［4］閻兵，王學(xué)東，譚斌，等.不同硒源對小鼠抗氧化、免疫及組織硒貯存影響的研究［J］.糧食科技與經(jīng)濟，2011，36（2）：50～54.

［5］張賓，王予輝.常用動物實驗操作指南［M］.上海：上海中醫(yī)藥大學(xué)出社，2007.64～65

［6］Corsini A C，Bellucci SB，Costa M G，et a1.A simplemethod of evaluating delayed typed hypersensitivity in mice［J］.JImmunol Methods，1979，30：195～200.

［7］Kouadio J H，Dano Sébastien D，M oukha S.Effects of combinations of Fusarium mycotoxinson the inhibition ofmacromole-cular synthesis，malondialdehyde levels，DNA methylation and fragmentation，and viability in Caco-2 cells［J］.Toxicon，2007，49（3）：306～317.

S816.7

A

1004-3314（2016）08-0040-03

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20160811