段發(fā)亮，　王孟陽(yáng)，　吳京雷，　羅　明，　韋君武，　楊國(guó)平，　何主強(qiáng)

華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，武漢市第一醫(yī)院神經(jīng)外科，武漢　430022

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吲哚胺2，3-雙加氧酶在創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙大鼠海馬中的表達(dá)變化與作用*

段發(fā)亮，王孟陽(yáng)，吳京雷，羅明，韋君武，楊國(guó)平，何主強(qiáng)△

華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，武漢市第一醫(yī)院神經(jīng)外科，武漢430022

目的通過(guò)檢測(cè)創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(post-traumatic stress disorder，PTSD)大鼠海馬中吲哚胺2，3-雙加氧酶(indoleamine 2，3-dioxygenase，IDO)含量變化與運(yùn)用IDO抑制劑治療對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制，探討PTSD發(fā)病原因及機(jī)制。方法將60只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為：對(duì)照組、PTSD組、PTSD+IDO抑制劑治療組，運(yùn)用ELISA試劑盒檢測(cè)腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor，TNF-α)、白介素-6(interleukin-6，IL-6)含量變化，通過(guò)RT-PCR、Western blot檢測(cè)IDO的表達(dá)情況。通過(guò)TUNEL染色法檢測(cè)海馬神經(jīng)元凋亡率，并對(duì)大鼠進(jìn)行行為學(xué)評(píng)估。結(jié)果檢測(cè)結(jié)果顯示對(duì)照組、PTSD組與IDO抑制劑治療組TNF-α分別為[(1.26±0.12)vs. (8.58±0.67)vs. (3.69±0.41)pg/mL]、IL-6分別為[(2.28±0.19)vs. (15.72±1.42)vs. (7.45±0.58)pg/mL]、IDOmRNA分別為[(0.152 7±0.014 7)vs. (0.827 8±0.079 6)vs. (0.223 6±0.038 7)]、IDO蛋白分別為[(0.061 2±0.008 6)vs. (1.232 9±0.114 8)vs. (0.423 5±0.041 1)]、神經(jīng)元的凋亡率為[(5.46±1.87)%vs. (81.47±6.86)%vs. (42.54±3.98)%](均P<0.05)，行為學(xué)表現(xiàn)明顯改善。結(jié)論P(yáng)TSD大鼠海馬區(qū)域TNF-α、IL-6、IDO表達(dá)顯著提高，IDO抑制劑治療能降低其含量，細(xì)胞因子、IDO在PTSD發(fā)病機(jī)制中起重要作用，運(yùn)用IDO抑制劑能改善PTSD大鼠海馬區(qū)域神經(jīng)元損傷。

創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙；腫瘤壞死因子-α；白細(xì)胞介素-6；吲哚胺2，3-雙加氧酶

創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(post-traumatic stress disorder，PTSD)為機(jī)體對(duì)突發(fā)自然災(zāi)害、戰(zhàn)爭(zhēng)、嚴(yán)重交通意外、恐怖襲擊、外傷、虐待等強(qiáng)烈外界刺激的一種異常精神反應(yīng)，是應(yīng)激性精神障礙中最為典型的一種[1-2]。臨床表現(xiàn)具有病程長(zhǎng)、治療效果不明顯的特點(diǎn)，近年來(lái)PTSD發(fā)病率逐漸升高[3-4]。實(shí)驗(yàn)表明[5]PTSD是在劇烈環(huán)境刺激下，由個(gè)體生物易感基因及相關(guān)蛋白相互作用所致，PTSD發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚，強(qiáng)烈的外界刺激可過(guò)度激活免疫系統(tǒng)，外周免疫系統(tǒng)通過(guò)巨噬細(xì)胞釋放前炎性細(xì)胞因子(TNF-α、IL-6)觸發(fā)與應(yīng)激相關(guān)神經(jīng)內(nèi)分泌、神經(jīng)生理生化與行為學(xué)改變。研究證實(shí)[6-8]吲哚胺2，3-雙加氧酶(indoleamine 2，3-dioxygenase，IDO)為色氨酸-犬尿氨酸代謝路徑上最重要的限速酶，調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺代謝，均主要表達(dá)在外周巨噬細(xì)胞與中樞小膠質(zhì)細(xì)胞上。本研究主要檢測(cè)PTSD大鼠海馬區(qū)域TNF-α、IL-6、IDO含量變化，以及運(yùn)用IDO抑制劑治療對(duì)神經(jīng)元功能的保護(hù)作用及行為學(xué)的改善情況，探索細(xì)胞因子、IDO在PTSD發(fā)病過(guò)程中的相互作用機(jī)制，為臨床開(kāi)發(fā)PTSD新的治療途徑提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物分組

健康雄性成年Wistar大鼠60只(體重為120～160 g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供)，首先在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，然后隨機(jī)分為3組：對(duì)照組、PTSD組、IDO抑制劑治療組，采取國(guó)際上公認(rèn)的單次延長(zhǎng)應(yīng)激(single-prolonged stress，SPS)建立PTSD組與IDO抑制劑治療組動(dòng)物模型。模型建立后給予對(duì)照組及PTSD組大鼠鼻飼生理鹽水，IDO抑制劑治療組給予鼻飼二唑基-N-羥基苯甲脒10 mg/(kg·d)，14 d后進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)步驟均經(jīng)過(guò)動(dòng)物倫理學(xué)審核，并嚴(yán)格遵守美國(guó)衛(wèi)生研究所(NIH)頒布的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)。

1.2行為學(xué)檢測(cè)

在行為學(xué)實(shí)驗(yàn)室用遮光布隔斷室外光線，室內(nèi)用4個(gè)60 W白熾燈安放于實(shí)驗(yàn)室4角，照射于墻壁上獲得漫反射光源，照度120～280 lx，照度恒定。室溫在21～24℃之間，注意實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)及保持安靜。并配備紅外攝像儀，依次進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)(openfield test，OF test)評(píng)估大鼠的自發(fā)活動(dòng)能力，高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)(elevated plus mace，EPM)評(píng)估大鼠的焦慮水平和水迷宮實(shí)驗(yàn)(Morris water mace，MWW)評(píng)估大鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力。

1.3RT-PCR測(cè)定海馬區(qū)域IDO mRNA含量變化

采用Trizol試劑盒一步法提取海馬組織總RNA，按RT試劑盒逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，取25 μL反應(yīng)體系，上機(jī)(Applied Biosystems)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)條件為：95℃，2 min變性。之后95℃，15 s退火；58℃，60 s；72℃，30 s進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。然后72℃，10 min延伸。Primer Premier 6.0軟件設(shè)計(jì)IDO引物：IDO上游引物5′-GCGCTGTTGGAA-ATAGCTTC-3′，下游引物5′-CAGGACGTCA-AAGCACTGAA-3′，分子量192 bp；β-actin上游引物5′-TGACGTGGACATCCGCAAAG-3′，下游引物5′-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3′，分子量204 bp。對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行定量檢測(cè)，結(jié)果為IDO /β-actin灰度比值。

1.4Western blot測(cè)定海馬區(qū)域IDO蛋白含量變化

將海馬組織置入研磨器中，加入裂解液，常規(guī)提取總蛋白，按BCA試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定蛋白濃度。然后制10%SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)膠，電泳，轉(zhuǎn)膜，以小牛血清白蛋白室溫封閉2 h，加入一抗稀釋液(1∶500)，然后在40℃條件下孵育過(guò)夜。用二抗稀釋液(羊抗鼠二抗1∶200)，常溫孵育1 h。用ECL顯影液進(jìn)行顯色，凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行膠片的曝光、成像。IDO分子量為42 kD。檢測(cè)結(jié)果為IDO /β-actin灰度比值。

1.5檢測(cè)大鼠海馬區(qū)域神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率

消毒后開(kāi)顱取腦，分離海馬組織，石蠟包埋切片。根據(jù)TUNEL試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行染色，運(yùn)用HMIAS-2000系統(tǒng)對(duì)每組大鼠海馬切片進(jìn)行TUNEL染色后計(jì)數(shù)凋亡神經(jīng)細(xì)胞，隨機(jī)選取非重疊的5個(gè)高倍鏡視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，取其均值，凋亡率=凋亡細(xì)胞數(shù)/神經(jīng)元細(xì)胞總數(shù)× 100%。

1.6大鼠海馬區(qū)IL-6，TNF-α含量檢測(cè)

采用夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)，對(duì)海馬組織標(biāo)本按試劑盒上的操作步驟進(jìn)行檢測(cè)。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2　結(jié)果

2.1各組大鼠行為學(xué)評(píng)估結(jié)果

曠場(chǎng)行為(水平活動(dòng)距離、中央停留時(shí)間)是評(píng)定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的警覺(jué)水平、焦慮狀態(tài)和環(huán)境適應(yīng)能力的方法。高架十字迷宮(開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)的百分比、開(kāi)臂停留時(shí)間百分比)是運(yùn)用大鼠對(duì)未知環(huán)境的探究性，及對(duì)高懸開(kāi)臂的恐懼感形成的矛盾沖突狀態(tài)來(lái)評(píng)測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物焦慮素質(zhì)特征。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)(上臺(tái)潛伏期)通過(guò)檢測(cè)動(dòng)物空間學(xué)習(xí)及記憶能力，評(píng)定動(dòng)物空間認(rèn)知功能加工過(guò)程，了解應(yīng)激刺激對(duì)動(dòng)物認(rèn)知功能的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與對(duì)照組相比，PTSD組大鼠水平活動(dòng)距離(8 775.84±38.67)mm、中央停留時(shí)間(22.65± 1.54)s明顯減少，開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)的百分比(21.49±2.98)%、開(kāi)臂停留時(shí)間百分比(10.55±1.96)%明顯降低以及上臺(tái)潛伏期(56.38 ±4.21)s明顯延長(zhǎng)(均P<0.05)；與PTSD組相比，IDO抑制劑治療組大鼠水平活動(dòng)距離(5 668.45±28.79)mm、中央停留時(shí)間(30.78±3.20)s明顯增加，開(kāi)臂進(jìn)入次數(shù)的百分比(29.87±4.02)%、開(kāi)臂停留時(shí)間百分比(13.89±2.75)%顯著提高以及上臺(tái)潛伏期(49.27±2.78)s縮短，均P<0.05。

2.2各組大鼠海馬區(qū)中IDO mRNA含量的變化

對(duì)照組大鼠海馬區(qū)域IDO mRNA轉(zhuǎn)錄水平較低，PTSD組IDO mRNA轉(zhuǎn)錄水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。PTSD組大鼠給予IDO抑制劑治療后，IDO轉(zhuǎn)錄水平降低，與PTSD組間相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖1，表1。

M：Marker；1：對(duì)照組；2：PTSD組；3：PTSD+IDO抑制劑治療組；4：對(duì)照組內(nèi)參；5：PTSD組內(nèi)參；6：PTSD+IDO抑制劑治療組內(nèi)參圖1　RT-PCR檢測(cè)IDO mRNA表達(dá)Fig.1 RT-PCR for the detection of the expression of IDO mRNA

2.3各組大鼠海馬區(qū)中IDO蛋白含量的變化

對(duì)照組海馬組織中IDO在蛋白水平表達(dá)較低，PTSD組大鼠海馬組織中IDO蛋白含量顯著升高(均P<0.05)。而IDO抑制劑治療組，IDO蛋白含量減少，與PTSD組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖2，表1。

1：對(duì)照組；2：PTSD組；3：PTSD+IDO抑制劑治療組圖2　Western blot檢測(cè)大鼠海馬組織中IDO蛋白表達(dá)Fig.2 Western blot analysis of the expression of IDO protein in the hippocampus of rats

2.4各組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡情況

對(duì)照組海馬區(qū)僅可見(jiàn)少量TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞，PTSD組海馬區(qū)可見(jiàn)較多TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞。IDO抑制劑治療組海馬區(qū)TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞較PTSD組顯著降低，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，IDO抑制劑治療組、PTSD組與對(duì)照組3組間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)(圖3，表1)。

A：對(duì)照組;B：PTSD組;C：IDO抑制劑治療組圖3　大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞凋亡情況比較(TUNEL染色，×400)Fig.3 Comparison of the neuron apoptosis in rat hippocampus(TUNEL staining，×400)

2.5各組大鼠海馬區(qū)炎性因子TNF-α和IL-6表達(dá)情況

大鼠海馬區(qū)域炎性因子水平檢測(cè)數(shù)據(jù)表明，PTSD組大鼠海馬組織TNF-α、IL-6較對(duì)照組顯著提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；IDO抑制劑治療組比對(duì)照組升高(均P<0.05)，但與PTSD組比較明顯降低(均P<0.05)，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

表1　各組間細(xì)胞因子、IDO含量及凋亡率比較

與對(duì)照組比較，*P<0.05；與PTSD組比較，△P<0.05

3　討論

雖然PTSD病因尚未明確，但I(xiàn)DO被認(rèn)為是PTSD多種病理機(jī)制假說(shuō)中的共同調(diào)節(jié)因子，在PTSD的發(fā)病中具有重要作用。下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸、神經(jīng)遞質(zhì)(如5-羥色胺，5-HT)主要參與機(jī)體對(duì)應(yīng)激反應(yīng)、情緒及覺(jué)醒的維持。過(guò)度的機(jī)體應(yīng)激使HPA軸興奮，促使細(xì)胞因子異常分泌。而跨膜蛋白可將前炎性因子(如：TNF-α、IL-6)通過(guò)主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)到腦組織，觸發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)后續(xù)的免疫應(yīng)答。PTSD病變基礎(chǔ)主要為炎性因子及壓力相關(guān)蛋白的異常表達(dá)，神經(jīng)遞質(zhì)下降及行為學(xué)改變[9]。本研究中PTSD鼠中樞TNF-α、IL-6含量升高，而應(yīng)用IDO抑制劑后TNF-α、IL-6表達(dá)下降，表明IDO與細(xì)胞因子可相互調(diào)節(jié)，應(yīng)激可激活機(jī)體免疫系統(tǒng)失衡，分泌過(guò)量的炎性細(xì)胞因子及上調(diào)壓力相關(guān)性蛋白表達(dá)，引起PTSD行為學(xué)改變。

實(shí)驗(yàn)證明[10-11]在抑郁癥患者中有COX-2的表達(dá)異常，強(qiáng)烈的應(yīng)激刺激可激活免疫系統(tǒng)釋放前炎性細(xì)胞因子，過(guò)量的炎性細(xì)胞因子引發(fā)顱內(nèi)繼發(fā)性損傷，PTSD主要病理學(xué)改變?yōu)?-HT神經(jīng)遞質(zhì)含量下降，在多種急慢性神經(jīng)退行性疾病中均有IDO的異常表達(dá)，它是調(diào)節(jié)腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的最終限速酶。目前PTSD患者的藥物治療手段仍十分有限，通過(guò)美國(guó)食品藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)的只有5-羥色胺重?cái)z取抑制劑帕羅西汀及舍曲林，但治療效果并不理想。本研究通過(guò)SPS法建立PTSD模型測(cè)得大鼠海馬區(qū)IDO含量明顯升高，運(yùn)用IDO抑制劑治療后大鼠焦慮癥狀得到明顯改善，與正常對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示PTSD大鼠的焦慮情緒反應(yīng)可以通過(guò)二唑基-N-羥基苯甲脒的治療而得到緩解。同時(shí)也證明IDO的表達(dá)升高主要參與了創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的發(fā)病過(guò)程，且可以作為藥物治療創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的潛在靶點(diǎn)。IDO蛋白的表達(dá)與機(jī)體內(nèi)發(fā)生的炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，研究也證實(shí)促炎性因子的升高伴有IDO含量的增加，進(jìn)而引起PGE2、NO及氧化應(yīng)激產(chǎn)物的表達(dá)上調(diào)[12-13]。氧化應(yīng)激在細(xì)胞凋亡中的機(jī)制已被證實(shí)，IDO通過(guò)正反饋機(jī)制使細(xì)胞因子進(jìn)一步升高，以上均加重了神經(jīng)元細(xì)胞的不可逆損傷。

綜上所述，細(xì)胞因子、IDO可能在PTSD發(fā)病機(jī)制中扮演重要的角色。本實(shí)驗(yàn)表明應(yīng)激狀態(tài)下TNF-α、IL-6、IDO在PTSD大鼠海馬區(qū)域表達(dá)明顯升高，這與PTSD的病理改變及影像學(xué)檢測(cè)顯示的腦結(jié)構(gòu)和功能異常的腦區(qū)非常一致[14-15]。PTSD大鼠海馬區(qū)的炎性因子增加和IDO表達(dá)上調(diào)共同參與了中樞神經(jīng)損傷。早期給予選擇性IDO抑制劑(新型二唑基-N-羥基苯甲脒)可降低海馬區(qū)細(xì)胞因子、IDO水平，提高中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)遞質(zhì)5-HT含量，改善行為學(xué)變化。這對(duì)PTSD臨床早期干預(yù)和開(kāi)發(fā)新的治療手段具有重要意義。我們認(rèn)為可以把二唑基-N-羥基苯甲脒作為PTSD新的治療手段進(jìn)一步研究與開(kāi)發(fā)。

[1]殷莉，黃姍姍，何主強(qiáng).吲哚胺2，3-雙加氧酶及細(xì)胞因子在創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙患者中的表達(dá)變化及意義[J].華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2016，45(1)：108-110.

[2]Josh M C，Keith B G，Andrew J，et al.Decoding the traumatic memory among women with PTSD：Implications for neurocircuitry models of PTSD and real-time fMRI neurofeedback[J].PLoS One，2015，10(4)：1-17.

[3]Pietrzak R H，Goldstein R B，Southwick S M，et al.Psychiatric comorbidity of full and partial post-traumatic stress disorder among older adults in the United States：results from wave 2 of the National Epidemiologic Survey on Alcohol and Related Conditions[J].Am J Geriatr Psychiatry，2012，20(5)：380-390.

[4]Cohen H，Kaplan Z，Koresh O，et al.Early post-stressor intervention with propranolol is ineffective in preventing post-traumatic stress responses in an animal model for PTSD[J].Eur Neuropsychopharmacol，2011，21(3)：230-240.

[5]Thomas C，Eric E，Rachel Y.Biomarkers for combat-related PTSD：focus on molecular networks from high-dimensional data[J].Eur J Psychotraumatol，2014，5(7)：1-3.

[6]Moeller D R，Duffy J M，Goolsby A M，et al.Use of a removable mandibular neuroprosthesis for the reduction of post-traumatic stress disorder(PTSD)and mild traumatic brain injury/PTSD/associated nightmares，headaches，and sleep disturbances[J].Spec Oper Med，2014，14(3)：64-73.

[7]Koek R J，Langevin J P，Krahl S E，et al.Deep brain stimulation of the basolateral amygdala for treatment-refractory combat post-traumatic stress disorder(PTSD)：study protocol for a pilot randomized controlled trial with blinded，staggered onset of stimulation[J].Trials，2014，15(5)：356-358.

[8]Kousha M，Mehdizadeh T S.Normative life events and PTSD in children：how easy stress can affect children’s brain[J].Acta Med Iran，2013，51(1)：47-51.

[9]Richard R.A molecular clue to PTSD[J].PloS Biology，2015，13(2)：1-2.

[10]Gao H M，Liu B，Zhang W et al.Novel anti-inflamatory therapy for Parkinson's disease[J].Trends Pharmacol Sci，2003，24(6)：395-401.

[11]Hinz B，Brune K.Paracetamol and cyclooxygenase inhibition：is there a cause for concern?[J].Ann Rheum Dis，2012，71(1)：20-25.

[12]Said R S，Badr A M，Nada A S，et al.Sodium selenite treatment restores long-lasting ovarian damage induced by irradiation in rats：impact on oxidative stress and apoptosis[J].Reprod Toxicol，2014，43(5)：85-93.

[13]Nury T，Zarrouk A，Vejux A，et al.Induction of oxiapoptophagy，a mixed mode of cell death associated with oxidative stress，apoptosis and autophagy，on 7-ketocholesterol-treated 158N murine oligodendrocytes：impairment by α-tocopherol[J].Biochem Biophys Res Commun，2014，446(3)：714-719.

[14]張建芳，陳欣，王偉，等.異氟烷通過(guò)激活Calpain影響大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞的增殖與分化[J].華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2015，44(3)：263-267.

[15]Puetz T W，Youngstedt S D，Herring M P.Effects of pharmacotherapy on combat-related PTSD，anxiety，and depression：a systematic review and meta-regression analysis[J].PloS One，2015，10(5)：529-532.

(2016-02-25收稿)

Changes of the Expression of Indoleamine 2，3-dioxygenase in the Hippocampus of Rats with Post-traumatic Stress Disorder

Duan Faliang，Wang Mengyang，Wu Jingleietal

DepartmentofNeurosurgery，WuhanFirstHospital，AffiliatedTCM-integratedHospital，TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430022，China

ObjectiveTo examine the changes of the expression of indoleamine 2，3-dioxygenase(IDO)in the hippocampus of rats with post-traumatic stress disorder(PTSD)and the protective effect of the IDO inhibitor on neurons，in an attempt to explore the pathogenesis of PTSD.MethodsAdult male Wistar rats were randomly divided into three groups：control group，PTSD group，and PTSD+IDO inhibitor group(n=20 each).The levels of tumor necrosis factor-α(TNF-α)and interleukin-6(IL-6)were detected by ELISA and the expression of IDO by RT-PCR and Western blotting.TUNEL staining was used to observe the apoptosis of rat hippocampal neurons.Rat behaviors were also evaluated.ResultsThe levels of TNF-α were(1.26±0.12)，(8.58±0.67)，and (3.69±0.41)pg/mL in control，PTSD and PTSD+IDO groups，respectively(P<0.05).The levels of IL-6 were(2.28±0.19)，(15.72±1.42) and (7.45±0.58)pg/mL in control，PTSD and PTSD+IDO groups，respectively(P<0.05).The expression of IDO was(0.1527±0.0147)，(0.8278±0.0796) and (0.2236±0.0387)at mRNA level and(0.0612±0.0086)，(1.2329±0.1148)，(0.4235±0.0411)at protein level in control，PTSD and PTSD+IDO groups，respectively(P<0.05).The apoptosis rates were(5.46±1.87)%，(81.47±6.86)% and (42.54±3.98)% in control，PTSD and PTSD+IDO groups，respectively(P<0.05).Rat behavioral function was significantly improved in PTSD+IDO group.ConclusionThe expression levels of TNF-α，IL-6 and IDO were significantly increased in the hippocampus of PTSD rats，which could be reversed by the IDO inhibitor.The IDO inhibitor could improve the neuron injuries in the hippocampus of PTSD rats.

post-traumatic stress disorder；tumor necrosis factor-α；interleukin-6；indoleamine 2，3-dioxygenase

，Corresponding author，E-mail：colei@sina.com

R329.2

10.3870/j.issn.1672-0741.2016.04.006

*湖北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.2015CFB694)，武漢市衛(wèi)生計(jì)生委科研項(xiàng)目(No.WZ16C10)

段發(fā)亮，男，1973年生，副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士，E-mail：Duanfaliang@126.com