鄒淑君，許樹軍，李　靖，肖洪彬*（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) .藥學(xué)院 .實驗中心，黑龍江 哈爾濱150040）

遼東楤木葉中一個三萜皂苷*

鄒淑君a，許樹軍b，李靖a，肖洪彬b*
（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) a.藥學(xué)院 b.實驗中心，黑龍江 哈爾濱150040）

經(jīng)過乙醇溶液提取、正丁醇萃取、硅膠柱色譜分離，從遼東楤木（Araliaelata）的葉中分離得到2個三萜皂苷化合物。利用化學(xué)顯色法、HPLC譜、核磁共振譜方法鑒定，確定其中一個化合物為遼東楤木葉中首次分得的化合物，該化合物名稱為3-O-β-D-葡萄吡喃糖基齊墩果酸。

遼東楤木葉；三萜皂苷；分離；結(jié)構(gòu)鑒定

遼東楤木（Aralia elata）是五加科木屬植物，東北地區(qū)俗稱刺老鴉,民間將根皮作“五加皮”入藥,春季初發(fā)的嫩芽作為優(yōu)良的綠色食品山野菜可供食用,屬于山珍之一[1]。遼東楤木的活性成分主要為三萜皂苷。最初，對遼東楤木化學(xué)成分的研究多集中在根及莖上，而對資源豐富的葉資源的研究相對較少。近些年來有學(xué)者研究確定遼東楤木葉中皂苷類物質(zhì)有很好的抗腫瘤作用、保肝作用等[2,3]，并且遼東楤木葉皂苷提取物口服毒性較小[4]。為了更好地了解和利用該植物葉資源，確定葉中的藥效物質(zhì)是研究該資源的重要使命。目前從遼東楤木葉中分離出的化合物有皂苷類物質(zhì)、多糖類物質(zhì)、脂肪類化合物、黃酮類物質(zhì)等。本實驗從遼東楤木葉中提取分離皂苷類成分，從該植物葉中分離得到2個皂苷類化合物，分別經(jīng)化學(xué)法、高效液相色譜及核磁共振譜方法鑒定化合物結(jié)構(gòu)，其中之一為首次從葉中分離。

1　實驗部分

1.1儀器和材料

LC-2010型高效液相色譜儀（日本島津公司）；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科貿(mào)有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申勝生物技術(shù)有限公司）；電子分析天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）；ARX-300型核磁共振光譜儀（德國Bruker公司）；高效薄層板Kieselgel 60 F254及反相色譜用RP18薄層板（青島海洋化工廠）；柱色譜用硅膠（200～300目,青島海洋化工廠）。

遼東楤木葉采自黑龍江省五常市山河屯林業(yè)局鳳凰山下,經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥資源教研室鑒定；水為二次蒸餾水，其他所用試劑為國產(chǎn)分析純。

1.2實驗方法

遼東楤木葉置陰涼通風(fēng)處干燥（2kg）,用20倍量75%乙醇加熱回流提取3次,每次1.5h。合并乙醇藥液，減壓回收至無醇味，然后依次用石油醚、氯仿、水飽和的正丁醇萃取。收集正丁醇萃取液并低溫真空干燥得淡黃色粉末（總皂苷）56g?？傇碥战?jīng)高效薄層板Kieselgel 60 F254及反相色譜RP18薄層板確定硅膠柱色譜,氯仿-甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫,洗脫液經(jīng)薄層板及高效液相色譜檢查后相近者合并，得到6個部分。將第2個部分（約3,6g）再經(jīng)硅膠分配柱色譜（CHCl3:MeOH:H2O=8∶1∶0.1）得到A、B、C、D 4個部分。將B部分（約1.8g）經(jīng)硅膠分配柱色譜（CHCl3∶MeOH:H2O=10∶1∶0.1）得到化合物1和化合物2。

化合物鑒定方法如下：經(jīng)Molish及Liebermann-Burchard顯色反應(yīng)；酸水解產(chǎn)物經(jīng)HPLC色譜檢測，條件為：DiamonsilC18（2）（250×4.6m m，5μm）柱，流動相為乙腈-水，梯度洗脫80min，流速1.0mL·min-1，柱溫30℃；AlltechELSD 2000ES型蒸發(fā)光散射檢測器，ELSD參數(shù)：漂移管溫度110℃，載氣（N2）流速3.2mL·min-1；核磁共振譜：以TMS為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，C5D5N為溶劑，1H-NMR譜 300M Hz，1 3 C-NMR譜75MHz。

2　結(jié)果與討論

化合物1經(jīng)鑒定及與文獻對比確定為3-O-β-D-葡萄吡喃糖基常春藤皂苷元，已有報道[5]?；衔?為遼東楤木葉中首次分離得到，鑒定結(jié)果如下：

化合物為白色無定形粉末狀物質(zhì)，Molish反應(yīng)呈陽性，Liebermann-Burchard反應(yīng)呈陽性。酸水解產(chǎn)物經(jīng)過高效液相色譜與齊墩果酸和標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖對比，檢出葡萄糖、齊墩果酸和化合物2。堿性條件下化合物2基本不水解?；衔锏?H-NMR譜在δ5.30給出歸屬于1個葡萄糖的端基質(zhì)子信號，7個特征的甲基質(zhì)子信號:0.90（3H，s，23-CH3）、0.92（3H，s，25-CH3）、0.99（3H，s，24-CH3）、1.01（3H，s，29-CH3）、1.08（3H，s，26-CH3）、1.23（3H，s，30-CH3）、1.76（3H，s，27-CH3）；1個烯氫質(zhì)子信號 δ5.60（1H，br.s，H-12），。13C-NMR譜在δ106.9處葉出現(xiàn)1個糖的端基碳信號，烯碳信號122.5，144.8及羰基碳信號176.3，表明苷元為齊墩果酸型。另外的13C-NMR譜信號為：39.0（C-1）、26.5（C-2）、88.8（C-3）、39.4（C-4）、55.8（C-5）、18.5（C-6）、33.2（C-7）、39.7（C-8）、48.1（C-9）、37.4（C-10）、23.7（C-11）、122.5（C-12）、144.8（C-13）、42.2（C-14）、28.3（C-15）、23.8（C-16）、46.7（C-17）、42.0（C-18）、46.5（C-19）、31.0（C-20）、34.3（C-21）、33.2（C-22）、64.9（C-23）、13.6（C-24）、15.8（C-25）、17.4（C-26）、26.2（C-27）、180.2（C-28）、33.3（C-29）、23.8（C-30），為苷元13C-NMR譜的數(shù)據(jù)。及106.9（C-1'）、75.8（C-2'）、78.7（C-3'）、71.8（C-4'）、78.2（C-5'）、63.8（C-6'），為葡萄糖部分13C-NMR譜的數(shù)據(jù)。根據(jù)以上數(shù)據(jù)推測化合物2的結(jié)構(gòu)見圖1。命名為3-O-β-D-葡萄吡喃糖基齊墩果酸（3-O-β-D-glucopyranosyl-Oleanolic acid）。該化合物曾經(jīng)從遼東楤木根部分離獲得[6]。

圖1　3-O-β-D-葡萄吡喃糖基齊墩果酸的結(jié)構(gòu)式Fig.1　Structure of 3-O-β-D-glucopyranosyl-oleanolic acid

3　結(jié)論

經(jīng)提取分離及鑒定，確定從遼東楤木葉中獲得化合物3-O-β-D-葡萄吡喃糖基齊墩果酸，該化合物為首次從葉中分離獲得。遼東楤木三萜皂苷類成分居多。從葉中分離的成分許多往往也存在于根或莖中，目前，從遼東楤木全株分離的皂苷成分已經(jīng)有140多種。隨著葉中新化合物的不斷發(fā)現(xiàn)，可以分析對比遼東楤木不同部位中皂苷成分，為為從不同角度利用根莖葉提供參考。

［1］王忠壯，胡晉紅，于占洋，等.楤木屬植物的生物學(xué)研究及應(yīng)用［M］.上海:第二軍醫(yī)大學(xué)出版社,2001.4-7.

［2］張秀萍，孫達辰，肖洪彬.遼東楤木葉總皂苷抗腫瘤作用研究進展［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2015,21（11）：232-234.

［3］王麗巖,肖洪彬,王鳴慧.遼東楤木葉總皂苷抗急性肝損傷的實驗研究［J］.中醫(yī)藥信息,2009,26（2）:29-30.

［4］F Li，X He，W Niu，et al.Acute and sub-chronic toxicity study of theethanol extract fromleaves of aralia elata in rats［J］.Journal of Ethnopharmacology,2015,175:499-508.

［5］宋麗麗.遼東楤木葉中化學(xué)成分的研究［D］.長春:吉林大學(xué), 2006.

［6］S.Sakai，M.Katsumata，Y.Satoh，et al.Oleanolicacidsaponinsfromroot barkofAraliaelata［J］.Phytochemistry,1994,35（5）:1319-1324.

A saponins from leaves of Aralias elate*

ZOU Shu-juna，XU Shu-junb，LI Jinga，XIAO Hong-binb*
（a.College of Pharmacy；b.Experiment Center，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，China）

After extracted by ethanol solution and butanol，silicagel column chromatographic method were used to extract and separate the saponin.Two saponins were isolated from leaves of Aralia elata.One of the two was separated from leaves of Aralia elata firstly.Chemical coloration method，HPLC and NMR were used to analyze the purity and the determine structure.This compound was identified as 3-O-β-D-glucopyranosyl-Oleanolic acid.

Leaves of Aralia elata；triterpenoid saponin；separation；Structure identification

R282.71

A

10.16247/j.cnki.23-1171/tq.20160867

2016-04-20

中國博士后科學(xué)基金面上項目（2014M551289）

鄒淑君(1974-)：女，副教授，黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)在站博士后工作人員，研究方向：藥物分析。

肖洪彬：男，教授，研究方向：中藥藥理。